湖南省食品科学技术实验教学中心.ppt

食品分析实验 使用专业 食品科学与工程食品质量与安全食品加工与卫检专科 郭华罗凤莲合编制 湖南农业大学食品科技实验教学中心2009年9月 实验项目 实验一食品中水分含量的测定 直接干法实验二食品中水分含量的测定 蒸馏法实验三食品中水分活度的测定 扩散法实验四食品中总灰分的测定实验五水溶性灰分及水不溶性灰分的测定实验六酸溶性及酸不溶性灰分的测定 实验七果蔬中总酸的测定实验八蛋白质的测定 微量凯氏定氮法实验九蛋白质的测定 双缩脲法实验十氨基酸总量测定 双指示剂法实验十一脂肪的测定 索氏提取法实验十二还原糖的测定 直接滴定法实验十三还原糖的测定 3 5 二硝基水杨酸比色法 实验十四可溶性总糖的测定实验十五淀粉的测定 酶水解法实验十六淀粉的测定 酸水解法实验十七酱油中氯化钠含量的测定 莫尔法实验十八肉制品中亚硝酸钠的测定实验十九二氧化硫的测定实验二十食品中钙含量的测定 实验二十一果蔬制品中铁含量的测定实验二十二碘含量的测定 氯仿萃取比色法实验二十三铜含量的测定实验二十四食品中砷的测定实验二十五硒含量的测定 二氨基萘荧光光度法实验二十六黄曲霉毒素B1的测定 实验一食品中水分含量的测定 直接干燥法 一 实验目的掌握用直接干燥法来测定食品中水分含量及干燥箱的使用方法 二 实验原理基于食品中的水分受热以后 产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱中的分压 使食品中的水分蒸发出来 同时 由于不断的加热和排走水蒸汽 而达到完全干燥的目的 食品干燥的速度取决于这个压差的大小 三 适用范围该法适用于在95 l05 范围内不含或含其他挥发性成分极微且对热稳定的各种食品 四 仪器及试剂仪器 1 称量皿2 干燥器3 坩埚钳4 鼓风干燥箱5 分析天平 精确到0 0001g 试剂 变色硅胶 五 实验步骤1 固态样品固态样品必须磨碎 全部经过20 40目筛 混匀 在磨碎过程中 要防止样品中水分含量变化 制备好的样品存于干燥洁净的磨口瓶中备用 测定时 精确称取上述样品2 10g 视样品性质和水分含量而定 置于已干燥 冷却并称至恒重的有盖称量瓶中 移入95 l05 常压烘箱中 瓶盖斜支于称量瓶上烘2 4h后取出 加盖置干燥器内冷却0 5h后称重 再烘1h左右 又冷却0 5h后称重 重复此操作 直至前后两次质量差不超过2mg即算恒重 测定结果按下式计算 式中 m1 干燥前样品与称量瓶质量 gm2 干燥后样品与称量瓶质量 gm3 称量瓶质量 g 对于水分含量在16 以上的面包类样品 通常采用二步干燥法进行测定 首先将样品切分 称取一定质量样品后 在自然条件下风干15 20h 使其达到安全水分标准 再准确称重 然后再将风干样品粉碎 过筛 混匀 按上述安全水分含量的样品的操作步骤进行 分析结果按下式计算 式中 m1 新鲜样品总质量 gm2 风干后样品总质量 gm3 干燥前样品与称量瓶质量 gm4 干燥后样品与称量瓶质量 gm5 称量瓶质量 g 2 浓稠态样品浓稠态样品直接加热干燥 其表面易结硬壳焦化 使内部水分蒸发受阻 故在测定前 需加入精制海砂或无水硫酸钠 搅拌均匀 以增大蒸发面积 但测定中 应先准确称样 再加入已知质量的海砂或无水硫酸钠 搅拌均匀后干燥至恒重 测定结果按下式计算 式中 m1 干燥前样品与称量瓶质量 gm2 海砂 或无水硫酸钠 质量 gm3 干燥后样品与称量瓶质量 gm4 称量瓶质量 g 3 液态样品液态样品直接置于高温下加热 会因沸腾而造成样品损失 故需经低温浓缩后 再进行高温干燥 测定时先准确称样于已烘干至恒重的蒸发皿内 置于热水浴上蒸发至近干 再移入干燥箱中干燥至恒重 结果计算公式同上述一步干燥法 六 操作条件选择1 称样数量 称样数量一般控制在其干燥后的残留物质量在1 5 3 0g为宜 对于固态 浓稠态食品 将称样数量控制在3 5g 而液态食品每份样量控制在15 20g为宜 2 称量皿规格 称量皿分为玻璃称量瓶和铝质称量盒两种 前者能耐酸碱 不受样品性质的限制 故常用于干燥法 铝质称量盒质量轻 导热性强 但对酸性食品不适宜 常用于减压干燥法 称量皿规格的选择 以样品置于其中平铺开后厚度不超过皿高的1 3为宜 3 干燥设备 一般使用风量可调节的循环通风式电热烘箱 温度计通常处于离上隔板3cm的中心处 一批测定的称量皿最好为8 12个 并排放在隔板的较中心部位 4 干燥条件 温度一般控制在95 105 对热稳定的谷物等 可提高到120 130 范围内进行干燥 对含还原糖较多的食品应先用低温 50 60 干燥0 5h 然后再用100 105 干燥 七 说明及注意事项1 水果 蔬菜样品 先洗去泥沙 用纱布吸干表面水分 2 在测定过程中 称量皿从烘箱中取出后 应迅速放入干燥器中进行冷却 否则不易达到恒重 3 干燥器内一般用硅胶作干燥剂 当硅胶蓝色减褪或变红时 需及时换出 置120 左右烘2h 3h使其再生后再用 4 果糖含量较高的样品 如水果制品 蜂蜜等 在高温下 70 长时间加热 其果糖会发生氧化分解作用而导致明显误差 故宜采用减压干燥法测定水分含量 5 含有较多氨基酸 蛋白质及羰基化合物的样品则会发生碳氨反应析出水分而导致误差 对此类样品宜用其他方法测定水分含量 6 在水分测定中 恒重的标准一般定为1 3mg 依食品种类和测定要求而定 7 对于含挥发性组分较多的样品 如香料油 低醇饮料等宜采用蒸馏法测定水分含量 8 测定水分后的样品 可供测脂肪 灰分含量用 实验二食品中水分含量的测定 蒸馏法 一 实验目的掌握用蒸馏法测定食品中的水分含量及蒸馏装置的使用 二 实验原理基于两种互不相溶的液体二元体系的沸点低于各组分的沸点这一原理 将食品中的水分与甲苯 二甲苯或苯共沸蒸出 冷凝并收集馏液 由于密度不同 馏出液在接收管中分层 根据馏出液中水的体积 即可计算出样品中水分含量 三 适用范围该法设备简单 操作方便 现已广泛用于谷类 果蔬 油类 香料等多种样品的水分测定 特别对于香料 此法是唯一公认的水分含量的标准分析法 四 仪器及试剂甲苯或二甲苯 取甲苯或二甲苯 先以水饱和后 分去水层 进行蒸馏 收集馏出液备用 五 实验方法准确称取适量样品 放入水分测定仪的烧瓶中 加入新蒸馏的甲苯 或二甲苯 50 75mL使样品浸没 连接冷凝管及接收管 从冷凝管顶端注入甲苯 或二甲苯 使之充满水分接收刻度管 先慢慢加热蒸馏 使每秒钟约蒸出2滴馏出液 待大部分水分蒸出后 加速蒸馏使每秒钟约蒸出4滴馏出液 当水分全部蒸出后 接收管内水的体积不再增加时 从冷凝管顶端注入少许甲苯 或二甲苯 冲洗 如发现冷凝管壁或接收管上部附有水滴 可用带有小橡皮头的铜丝擦下 再蒸馏片刻直至接收管上部及冷凝管壁无水滴附着为止 读取接收管水层的容积 六 结果计算式中 V 接收管内水的体积 mlW 样品的质量 g七 说明及注意事项1 样品用量 谷类 豆类约20g 鱼 肉 蛋 乳制品约5 10g 蔬菜 水果约5g 2 有机溶剂一般用甲苯 对于在高温易分解样品则用苯作蒸馏溶剂 纯苯沸点为80 2 水 苯混合物其沸点为69 25 但蒸馏的时间需延长 3 加热温度不宜太高 温度太高时冷凝管上端水汽难以全部回收 蒸馏时间一般为1 2h 样品不同则蒸馏时间各异 4 为了尽量避免接收管和冷凝管壁附着水滴 仪器必须洗涤干净 实验三食品中水分活度的测定 扩散法 一 实验目的掌握用康威氏 Conway 微量扩散皿测定食品的水分活度方法 二 实验原理样品在康威氏微量扩散皿的密封和恒温条件下 分别在Aw较高和较低的标准饱和溶液中扩散平衡后 根据样品质量的增加和减少的量 求出样品的Aw值 三 主要仪器1 康威氏微量扩散皿 每组3 4个 2 分析天平 感量0 0001g3 小铝皿或玻璃皿 直径25mm 深度5mm的圆形小皿 放样品用 每组3 4个 4 恒温箱 0 70 可调 四 试剂标准水分活度试剂如表3 1所示 表3 1标准水分活度试剂及其在25 时的Aw值 五 操作方法在预先准确称重过的铝皿或玻璃皿中 准确称取约1 000g均匀切碎样品 迅速放入康威氏皿的内室中 在康威氏皿的外室预先放入标准饱和试剂5mL 或标准的上述各式盐5 0g 加入少许蒸馏水润湿 操作时选择3 4份标准饱和试剂 每只皿装一种 其中1 2份的Aw值大于或小于试样的Aw值 然后在扩散皿磨口边缘均匀地涂上一层凡士林 加盖密封后在25 0 5 温度下放置2 0 5h 然后取出铝皿或玻璃皿 用分析天平迅速称重 记录下各称量值 并分别计算各样品每克质量的增减数 六 结果计算以各种标准饱和溶液在25 时的Aw值为横坐标 每克样品质量增减数 W为纵坐标在方格坐标纸上作图 将各点连结成一条直线 此线与横轴的交点即为所测样品的Aw值 七 说明及注意事项1 每个样品测定时应作平行试验 其测定值的平行误差不得超过0 02 2 取样要在同一条件下进行 操作要迅速 3 试样的大小和形状对测定结果影响不大 4 康威氏微量扩散皿密封性要好 5 取食品的固体或液体部分 样品平衡后其结果没有差异 6 绝大多数样品可在2小时后测得Aw值 但米饭类 油脂类 油浸烟熏鱼类则需4天左右时间才能测定 为此 需加入样品量0 2 的山梨酸防腐 并以山梨酸的水溶液作空白 实验四食品中总灰分的测定 一 实验目的掌握食品中总灰分的测定方法及灰化炉的使用 二 实验原理把一定量的样品经炭化后放入高温炉内灼烧 使有机物质被氧化分解 以二氧化碳 氮的氧化物及水等形式逸出 而无机物质以硫酸盐 磷酸盐 碳酸盐等无机盐和金属氧化物的形式残留下来 这些残留物即为灰分 称量残留物的重量即可计算出样品中总灰分的含量 三 实验仪器1 箱式电阻炉2 瓷坩埚3 坩埚钳4 干燥器5 分析天平四 实验试剂1 1 4 盐酸溶液2 0 5 三氯化铁溶液和等量蓝墨水的混合液3 6mol L硝酸4 30 过氧化氢5 辛醇或纯植物油 五 测定步骤1 瓷坩埚的准备将坩埚用 1 4 盐酸煮1 2h 洗净晾干后 用三氯化铁与蓝墨水的混合液在坩埚外壁及盖上写上编号 置于规定温度 550 25 的中灼烧0 5h 移至炉口冷却到200 左右后 再移入干燥器中 冷却至室温后 准确称重 再放入高温炉内灼烧30min 取出冷却称重 直至恒重 两次称量之差不超过0 5mg 2 称样通常奶粉 麦乳精 大豆粉 调味料及海产品等取1 2g 谷物及其制品 肉及其制品 糕点 牛乳等取3 5g 蔬菜及其制品 砂糖及其制品 淀粉及其制品 蜂蜜 奶油等取5 10g 水果及其制品取20g 油脂取50g 3 样品预处理 液体试样准确称取适量试样于已知重量的瓷坩埚 或蒸发皿 中 置于水浴上蒸发至近干 再进行炭化 这类样品若直接炭化 液体沸腾 易造成溅失 含水分较多的试样准确称取适量试样于已知重量的坩埚中 置烘箱中干燥 再进行炭化 也可取测定水分后的干燥试样直接进行炭化 含量较少的固体试样先粉碎成均匀的试样 取适量试样于已知重量的坩埚中再进行炭化 富含脂肪的样品把试样制备均匀 准确称取一定量试样提取脂肪 再将残留物移入已知重量的坩埚中 进行炭化 4 炭化把坩埚置于电炉或煤气灯上 半盖坩埚盖 小心加热使试样在通气情况下逐渐炭化 直至无黑烟产生 对特别容易膨胀的试样 如含糖多的食品 可先在试样上加数滴辛醇或纯植物油 再进行炭化 5 灰化 炭化后 把坩埚移入已达规定温度 550 25 的高温炉炉口处 稍停留片刻 再慢慢移入炉膛内 灼烧一定时间至灰中无碳粒存在时 打开炉门 将坩埚移至炉口处冷却至200 左右 移入干燥器中冷却30min 取出准确称重 再灼烧 冷却 称重 直至前后两次称量相差不超过0 5mg为恒量 六 结果汁算式中 m1 空坩埚质量 gm2 样品加空坩埚质量 gm3 残灰加空坩埚质量 g七 说明1 样品炭化时要注意热源强度 防止产生泡沫溢出坩埚 2 把坩埚放入高温炉或从炉中取出时 要放在炉口停留片刻 使坩埚预热或冷却 防止因温度剧变而使坩埚破裂 3 灼烧后的坩埚应冷却到200 以下再移入干燥器中 否则因热的对流作用 易造成残灰飞散 且冷却速度慢 冷却后干燥器内形成较大真空 盖子不易打开 4 从干燥器中取坩埚时 开干燥器盖时应注意使空气缓缓流入 以防残灰飞散 5 灰化后所得残渣可留作Ca P Fe等成分的分析 6 新坩埚在使用前须在盐酸溶液 1 4 中煮沸1 2h 然后用自来水和蒸馏水分别冲洗干净并烘干 用过的旧坩埚经初步清洗后 可用粗盐酸或废盐酸浸泡10 20min再用水来冲洗洁净 实验五水溶性灰分及水不溶性灰分的测定 向测定总灰分所得残留物中加入25mL无离子水 盖上表面皿 加热至近沸 用无灰滤纸过滤 用25mL热的无离子水分多次洗涤坩埚 滤纸及残渣 将残渣连同滤纸移回原坩埚中 在水浴上蒸发至干涸 放入干燥箱中干燥 再进行炭化 灼烧 冷却 称重 直至恒重 水不溶性灰分含量式中 m4 不溶性灰分和坩埚质量 g其他符号意义同总灰分的计算水溶性灰分含量水溶性灰分 总灰分 水不溶性灰分 实验六酸溶性灰分及酸不溶性灰分的测定 向总灰分或水不溶性灰分中加入25mL 1 9 盐酸 盖上表面皿 小火加热煮沸5min 用无灰滤纸过滤 用热水洗涤至滤液无Cl 反应为止 将残渣和滤纸一同放入原坩埚中 进行干燥 炭化 灼烧 冷却 称重 直至恒重 酸不溶性灰分含量式中 m5 酸不溶性灰分和坩埚质量 g其他符号意义同总灰分的计算酸溶性灰分含量酸溶性灰分 总灰分 酸不溶性灰分 实验七果蔬制品中总酸的测定 一 实验目的掌握果蔬制品中总酸的测定方法及滴定管的使用 二 实验原理食品中的有机弱酸在用标准碱液滴定时 被中和生成盐类 用酚酞作指示剂 当滴定至终点 pH 8 2 指示剂显微红色 时 根据耗用标准碱液的体积 可计算出样品中总酸含量 三 适用范围本法适用于各类颜色较浅的食品中总酸含量的测定 四 仪器及试剂配置仪器 1 分析天平2 容量瓶3 烧杯4 锥形瓶5 9cm漏斗6 碱式滴定装置试剂 1 邻苯二甲酸氢钾AR2 0 1mol LNaOH标准溶液 五 操作方法1 氢氧化钠标准溶液的标定精密称取0 6g 准确至0 0001g 在105 110 干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾 加50mL去CO2的蒸馏水 振摇使其溶解 加2滴酚酞指示剂 用NaOH标准溶液滴定至溶液呈微红色30秒不褪 同时做空白试验 计算 式中 C 氢氧化钠标准溶液的浓度 mol L m 基准邻苯二甲酸氢钾的质量 g V1 标定时所耗用氢氧化钠标准溶液的体积 mL V2 空白试验中所耗用氢氧化钠标准溶液的体积 mL 0 2042 1 000mol L 相当的邻苯二甲酸氢钾的质量 g 2 样液制备 固体样品样品 将样品用粉碎机或高速组织捣碎机捣碎并混合均匀 取适量样品 按其总酸含量而定 用15mL无CO2蒸馏水 果蔬干品须加8 9倍无CO2蒸馏水 将其移入250mL容量瓶中 在75 80 水浴上加热0 5h 果脯类沸水浴加热1h 冷却后定容 用干燥滤纸过滤 弃去初始滤液25mL 收集滤液备用 含CO2的饮料 酒类 将样品置于40 水浴上加热30min 以除去CO2 冷却后备用 调味品及不含CO2的饮料 酒类 将样品混匀后直接取样 必要时加适量水稀释 若样品混浊 则需过滤 咖啡样品 将样品粉碎通过40目筛 取10g粉碎的样品于锥形瓶中 加入75mL80 乙醇 加塞放置16h 并不时摇动 过滤 3 样液滴定准确吸取样液50mL 加入酚酞指示剂3 4滴 用0 1mol LNaOH标准溶液滴定至微红色30秒不褪 记录消耗0 1mol LNaOH标准溶液mL数 六 结果计算式中 C 标准NaOH溶液的浓度 mol L V 滴定消耗标准NaOH标准液体积 mL m 样品质量或体积 g或mL V0 样品稀释液总体积 mL V1 滴定时吸取的样液体积 mL K 换算为主要酸的系数 因食品中含有多种有机酸 总酸度测定结果通常以样品中含量最多的那种酸表示 一般分析葡萄及其制品时 用酒石酸表示 K 0 075 分析柑桔类果实及其制品时 用柠檬酸表示 K 0 064或0 070 带一分子水 分析苹果 核果类果实及其制品时 用苹果酸表示 K 0 067 分析乳品 肉类 水产品及其制品时用乳酸表示 K 0 090 分析酒类 调味品时 用乙酸表示 K 0 060 七 说明1 浸渍样品和稀释用的蒸馏水必须除去CO2 即将蒸馏水在使用前煮沸15min并迅速冷却备用 样品中CO2对测定有干扰 对含有CO2的饮料 酒类等样品须除去CO2 2 样液制备方法 浸渍与稀释用水量和滴定方法等应根据样品中总酸含量来慎重选择 为使误差不超过允许范围一般要求滴定时消耗0 1mol LNaOH溶液不得少于5mL最好在10 15mL 3 若样液带有颜色 则在滴定前用与样液同体积的不含CO2蒸馏水稀释之或采用试验滴定法测定 实验八蛋白质的测定 微量凯氏定氮法 一 实验目的掌握用微量凯氏定氮法测定蛋白质的含量的方法 二 实验原理样品与浓硫酸 催化剂一同加热消化 使蛋白质分解 其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出 而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵 然后加碱蒸馏 使氨蒸出 用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定 根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量 三 适用范围此法可应用于各类食品中蛋白质含量的测定 四 仪器 试剂及玻皿配置仪器 1 凯氏烧瓶2 微量凯氏定氮装置3 锥形瓶4 分析天平5 酸式滴定装置6 容量瓶试剂 1 浓硫酸2 硫酸铜3 硫酸钾4 40 氢氧化钠溶液5 4 硼酸吸收液6 0 1000mol L盐酸标准溶液 7 甲基红 溴甲酚绿混合指示剂 半微量凯氏消化与定氮装置 微量凯氏定氮装置 五 操作方法1 盐酸标准溶液的标定 精密称取分析纯硼砂约1 9g 放入100mL烧杯中 加入20 30mL蒸馏水使其溶解转入100mL容量瓶中 用少量蒸馏水淌洗烧杯3 4次 洗涤液一并转入容量瓶中 定容至100mL 摇匀备用 准确吸取上述硼砂标准溶液20 00mL 放入100mL锥形瓶中 加入2 3滴甲基红 溴甲酚绿混合指示剂 用盐酸溶液滴定至恰好变为橙色即为终点 由消耗盐酸的体积 计算盐酸的准确浓度 2 样品测定 准确称取固体样品0 20g 2 00g 半固体样品2 00g 5 00g 液体样品10 00mL 20 00mL 小心移入干燥洁净的500mL凯氏烧瓶中 然后加入研细的硫酸铜0 5g 硫酸钾10g和浓硫酸20mL 摇匀后 安装好消化装置 于凯氏瓶口放一小漏斗 并将其以45 角斜支于石棉网上 用电炉以小火加热 待内容物全部炭化泡沫停止产生后 加大火力 保持瓶内液体微沸 至液体变蓝绿色透明后 再继续加热微沸30min 停止加热 待消化液冷却后 转入100mL容量瓶中 加蒸馏水至刻度 摇匀 3 蒸馏与滴定装好微量定氮装置 准确移取消化稀释液10mL于反应管内 经漏斗再加入10mL40 氢氧化钠溶液使呈强碱性 用少量蒸馏水洗漏斗数次 夹好漏斗夹 进行水蒸汽蒸馏 冷凝管下端预先插入盛有30mL2 硼酸吸收液的液面下 蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为蓝绿色开始计时 继续蒸馏10min后 将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min 用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏 馏出液用0 1000mol LHCl标准溶液滴定至微红色为终点 同时做一空白试验 六 结果计算1 盐酸准确浓度的计算式中 C 盐酸标准溶液的摩尔浓度 mol LW硼砂 硼砂的质量 gVHCl 消耗盐酸的体积 mL0 1906 与1 00mL盐酸标准溶液 c HCl 1 000mol L 相当的硼砂的质量 g 2 样品中粗蛋白的含量式中 C 盐酸标准溶液的浓度 mol LV1 滴定样品吸收液时消耗盐酸标准溶液体积 mLV2 滴定空白吸收液时消耗盐酸标准溶液体积 mLm 样品质量 gM氮 样品稀释液总体积 mLF 换算为主要酸的系数 即1毫摩尔氢氧化钠相当于主要酸的克数 七 说明1 所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制 2 消化时不要用强火 应保持和缓沸腾并不时转动凯氏烧瓶 以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下 3 样品中若含脂肪或糖较多时 消化过程中易产生大量泡沫 为防止泡沫溢出瓶外 在开始消化时应用小火加热 或者加入少量消泡剂如辛醇 同时注意控制热源强度 4 当样品消化液不易澄清透明时 可将凯氏烧瓶冷却 加入30 过氧化氢2 3mL后再继续加热消化 5 蒸馏装置不能漏气 蒸馏前若加碱量不足 消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀 此时需再增加氢氧化钠用量 实验九食品中蛋白质的测定 双缩脲法 一 实验目的掌握用双缩脲法测定蛋白质的方法及分光光度计的使用 二 实验原理当脲被小心地加热至150 160 时 可由两个分子间脱去一个氨分子而生成双缩脲 双缩脲与碱及少量硫酸铜溶液作用生成紫红色的配合物 由于蛋白质分子中含有肽键 CO NH 与双缩脲结构相似 故也能呈现此反应而生成紫红色配合物 在一定条件下其颜色深浅与蛋白质含量成正比 据此可用吸收光度法来测定蛋白质含量 三 方法特点及应用范围本法灵敏度较低 但操作简单快速 可适用于豆类 油料 米谷等作物种子及肉类等样品测定 四 主要仪器试剂及玻皿配置仪器1 分光光度计2 离心机 4000r min 3 50mL纳氏比色管试剂1 四氯化碳 CCl4 2 碱性硫酸铜溶液 以甘油为稳定剂 将10mL10mol L氢氧化钾和3 0mL甘油加到937mL蒸馏水中 激烈搅拌 同时慢慢加入50mL4 硫酸铜 CuSO4 5H2O 溶液 五 操作方法1 标准曲线的绘制以采用凯氏定氮法测出蛋白质含量的样品作为标准蛋白质样 按蛋白质含量40mg 50mg 60mg 70mg 80mg 90mg 100mg 110mg分别称取混合均匀的标准蛋白质样于8支50mL纳氏比色管中 然后各加入1mL四氯化碳 再用碱性硫酸铜溶液准确稀释至50mL 振摇10min 40 水浴放置40min 取上层清液离心10min 取离心后的透明液于比色皿中 在560nm波长下以蒸馏水作参比液调零 测定各溶液的吸光度A 以蛋白质的含量为横坐标 吸光度A为纵坐标绘制标准曲线 2 样品的测定 样品粉碎过60目筛 准确称取样品适量 使得蛋白质含量在40mg 110mg之间 于50mL纳氏比色管中 加1mL四氯化碳 按上述步骤显色后 在相同条件下测其吸光度A 查标准曲线得蛋白质mg数 计算蛋白质含量 六 结果汁算式中 C 由标准曲线上查得的蛋白质mg数m 样品质量 g 实验十氨基酸总量测定 双指示剂甲醛滴定法 一 实验目的掌握用双指示剂甲醛滴定法测定氨基酸总量的方法 二 实验原理氨基酸具有酸性的 C00H基和碱性的 NH2基 它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐 当加入甲醛溶液时 NH2基与甲醛结合 使其碱性消失 这样就可以用强碱标准溶液来滴定 C00H基 间接测定氨基酸总量 三 仪器试剂及玻皿配置仪器1 锥形瓶2 量筒3 移液管4 分析天平5 碱式滴定装置试剂1 40 中性甲醛溶液 以百里酚酞作指示剂 用氢氧化钠将40 甲醛中和至淡蓝色2 0 1 百里酚酞乙醇溶液3 0 1 中性红50 乙醇溶液 四 操作方法准确吸取含氨基酸约20mg 30mg的样品溶液2份 分别置于250mL锥形瓶中 各加50mL蒸馏水 其中l份加入3滴中性红指示剂 用0 1000mol L氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点 另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20mL 摇匀 静置1min 用0 1000mol L氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点 分别记录两次所消耗的碱液体积 五 结果计算式中 C 氢氧化钠标准溶液的浓度 mol LV1 用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积 mLV2 用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积 mLm 测定用样品溶液相当于样品的质量 g0 014 氮的毫摩尔质量 g mmol 六 说明及注意事项1 此法适用于测定食品中的游离氨基酸 2 固体样品应先进行粉碎 准确称样后用水萃取 然后测定萃取液 液体试样如酱油 饮料等可直接吸取试样进行测定 萃取可在50 水浴中进行0 5h即可 3 若样品颜色较深 可加适量活性炭脱色后再测定 或用电位滴定法进行测定 4 与本法类似的还有单指示剂 百里酚酞 甲醛滴定法 此法用标准碱完全中和 C00H基时的pH为8 5 9 5 但分析结果稍偏低 即双指示剂法的结果更准确 实验十一大豆中脂肪的测定 索氏提取法 一 实验目的掌握用索氏提取法测定大豆中脂肪的方法及索氏提取器的使用 二 实验原理将粉碎干燥的样品用无水乙醚或石油醚等溶剂回流提取 使样品中的脂肪进入溶剂中 回收溶剂后所得到的残留物 即为粗脂肪 其中主要成分是游离脂肪 此外还含有磷脂 色素 树脂 挥发油 糖脂等物质 索氏提取法Soxhletextractormethod Driedsample Crudelipids Evaporatingsolvent Solventextracting Principle 三 适用范围与特点此法适用于脂类含量较高 结合态脂类含量较少 结构疏松 能烘干磨细 不易吸湿结块样品的测定 四 仪器及试剂仪器1 索氏抽提器2 恒温水浴锅3 干燥箱4 分析天平 精确到0 0001g 5 干燥器试剂1 无水乙醚或石油醚2 海砂 五 测定方法1 样品处理 固体样品 精密称取干燥并研细的样品2 5g 可取测定水分后的样品 无损地移入滤纸筒内 半固体或液体样品 称取5 0 10 0g于蒸发皿中 加入海砂约20g 于沸水浴上蒸干后 再于95 105 烘干 研细 移入滤纸筒内 2 脂肪抽提将滤纸筒封口后放入抽提筒内 连接已干燥至恒重的脂肪接受瓶 从冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚100 150mL 通入冷凝水 于水浴上 夏天40 冬天55 加热回流提取6 12h 3 回收溶剂 烘干 称重取出滤纸筒 重新安装好索式提取器 利用抽提筒回收乙醚或石油醚 待接受瓶内乙醚只剩下1 2mL时 取下接受瓶 在水浴上挥发去掉溶剂 再于100 105 干燥2h 取出放干燥器内冷却30min 称重 并重复操作至恒重 式中 m 样品的质量 如为测定水分后的样品 以测定水分前的质量计 gm1 接受瓶质量 gm2 接受瓶和脂肪的质量 g 实验十二还原糖的测定 直接滴定法 一 实验目的掌握用直接滴定法测定食品中还原糖的方法 二 实验原理样品经除去蛋白质后 在加热条件下 以次甲基蓝作为指示剂 用样液直接滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液 达到终点时 稍过量的还原糖把蓝色的次甲基蓝指示剂还原为无色 而显出氧化亚铜的砖红色 根据样品液消耗体积 计算出样品中还原糖的含量 各步反应式 以葡萄糖为例 如下 1 Cu2SO4 2NaOH 2Cu OH 2 Na2SO4 2 Cu OH 2 KNaC4H4O6 KNaC4H2O6Cu 2H2O 3 C6H12O6 6KNaC4H2O6Cu 6H2O C6H12O7 6KNaC4H4O6 3Cu2O H2CO3从上述反应式可知 1mol葡萄糖可以将6molCu2 还原为Cu 但实际上此反应为非定量反应 即不能根据反应式直接计算出还原糖含量 因此在测定过程中要严格遵守所规定的操作条件 如热源强度 电炉功率 锥形瓶规格 加热时间 滴定速度等 三 适用范围及特点本法又称快速法 特点是试剂用量少 操作和计算都比较简便 快速 滴定终点明显 适用于各类食品中还原糖的测定 但测定酱油 深色果汁等样品时因色素干扰 滴定终点常常模糊不清 影响准确性 本法是国家标准分析方法 四 试剂及玻皿配置仪器1 容量瓶2 移液管3 锥形瓶4 电炉5 恒温水浴锅6 碱式滴定装置7 分析天平 试剂1 碱性酒石酸铜甲液 称取15g硫酸铜及0 05g次甲基蓝溶于水中并稀释到1000mL 2 碱性酒石酸铜乙液 称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠 溶于水中 再加入4g亚铁氰化钾 完全溶解后 用水稀释至1000mL 贮存于橡皮塞玻璃瓶中 3 乙酸锌溶液4 10 6 亚铁氰化钾溶液5 葡萄糖标准溶液 准确称取1 0000g经过98 100 干燥至恒重的无水葡萄糖 加水溶解后移入1000mL容量瓶中 加入5mL盐酸 用水稀释到1000mL 五 测定方法1 样品处理视样品含糖量的多少 称取2 10g样品 例如奶粉 准确称样5克左右于200mL烧杯中 加入100 150mL温水 搅拌 置于45 恒温水浴锅中 放置45min 中间不时搅拌 取出 将提取液移入250mL容量瓶中 慢慢加入5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液 加水至刻度 摇匀后静置30min 用干燥滤纸过滤 弃去15 20mL初滤液 收集滤液备用 2 碱性酒石酸铜溶液的标定准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5mL 置于150mL锥形瓶中 加水10mL 加玻璃珠4粒 从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液 加热使其在2min内沸腾 准确沸腾30秒钟后 以每2秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液 直至溶液蓝色刚好褪去为终点 记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积 平行操作3次 取其平均值 按下式计算10mL碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量 F C VS式中 F 10mL碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量 mgC 葡萄糖标准溶液的浓度 mg mLVS 标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积 mL 3 样品溶液预滴定吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5 00mL 置于150mL锥形瓶中 加水10mL 加玻璃珠3粒 加热使其在2min内沸腾 准确沸腾30秒钟后 趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液 滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态 待溶液蓝色变浅时 以每2秒1滴的速度滴定 直至溶液蓝色刚好褪去为终点 记录样品溶液消耗的体积 4 样品溶液精确滴定吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5 00mL 置于150mL锥形瓶中 加玻璃珠3粒 从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少1mL的样品溶液 加热使其在2min内沸腾 准确沸腾30秒钟后 以每2秒1滴的速度继续滴加样液 直至蓝色刚好褪去为终点 记录消耗样品溶液的总体积 平行操作3次 取平均值 六 结果计算式中 m 样品质量 gF 10mL碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量 mgVx 测定时消耗样品溶液的平均体积 mLV 样品溶液的定容体积 mL七 说明与讨论碱性酒石酸铜的氧化能力较强 醛糖和酮糖都可被氧化 所以测得的是总还原糖量 实验十三还原糖的测定 3 5 二硝基水杨酸比色法 一 实验目的掌握用3 5 二硝基水杨酸比色法测定还原糖的方法及分光光度计的使用 二 实验原理在氢氧化钠和丙三醇存在下 还原糖能将3 5 二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基 生成氨基化合物 此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色 在540nm波长处有最大吸收 在一定浓度范围内其吸光度与还原糖含量呈线性关系 三 适用范围及特点此法适用于各类食品中还原糖的测定 具有准确度高 重现性好 操作简便 快速等优点 尤其适用于大批样品的测定 四 仪器试剂及玻皿配置仪器 1 恒温水浴锅2 分光光度计3 分析天平试剂 1 3 5 二硝基水杨酸溶液 称取6 5g3 5 二硝基水杨酸溶于少量水中 移入1000mL容量瓶中 加入2mol L氢氧化钠溶液325mL 再加入45g丙三醇 摇匀 冷却后定容到1000mL 五 测定方法准确吸取0 1 2 3 4 5 6 7mg mL的葡萄糖标准溶液各1mL 样液1mL 含糖3 4mg 分别置于25mL容量瓶中 各加入3 5 二硝基水杨酸溶液2mL 置沸水浴中煮5min显色 然后以流水迅速冷却 用水定容到25mL 摇匀 以空白调零 在540nm处测定吸光度 绘制标准曲线 计算样品中还原糖的含量 六 计算还原糖 A V定 10 W样 V测 式中 A 从标准曲线上查得的葡萄糖质量 mgW样 称取样品的质量 mgV定 样品溶液的定容体积 mLV测 测定时吸取样液体积 mL 实验十四可溶性总糖的测定 一 实验目的掌握食品中可溶性总糖的测定方法 二 实验原理样品经处理除去蛋白质等杂质后 加入盐酸 在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖 以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量 三 仪器试剂及玻皿配置仪器仪器及玻皿配置同直接滴定法测定还原糖 试剂1 1 1 盐酸溶液 2 0 1 甲基红乙醇溶液 称取0 1g甲基红 用70 乙醇溶解并定容到100mL 3 30 氢氧化钠溶液 4 0 1 转化糖标准溶液 准确称取105 烘干至恒重的纯蔗糖1 0526g于锥形瓶中 用100mL水溶解后 加 1 1 盐酸5mL 在68 70 水浴中加热15min 取出于流动水下迅速冷却 加甲基红指示剂2滴 用30 NaOH溶液中和至中性 转移至1000mL容量瓶中 加水至刻度 混匀 此溶液每毫升含转化糖1mg 四 测定方法1 样品处理同直接滴定法测定还原糖 2 测定称取一定量样品 按直接滴定法中的样品提取方法处理 吸取处理后的样液50mL 放入100mL容量瓶中 加入5mL 1 1 盐酸溶液 置68 70 水浴中加热15min 取出迅速冷却至室温 加2滴甲基红指示剂 用30 NaOH溶液中和至中性 加水至刻度 混匀 将样液灌入滴定管中 按直接滴定法测定还原糖含量 五 结果计算式中 F 10mL酒石酸钾钠铜溶液相当的转化糖的质量 mgV1 样品溶液定容体积 mLV2 测定时消耗样品水解液的体积 mLm 样品质量 g 实验十五淀粉的测定 酶水解法 一 实验目的掌握酶水解法测定淀粉含量的方法 二 实验原理样品经除去脂肪和可溶性糖类后 在淀粉酶的作用下 使淀粉水解为麦芽糖和低分子糊精 再用盐酸进一步水解为葡萄糖 然后按还原糖测定法测定其还原糖含量 并折算成淀粉含量 三 仪器试剂及玻皿配置仪器及玻皿配置同可溶性总糖的测定试剂1 乙醚2 85 乙醇3 0 5 淀粉酶溶液4 碘溶液 称3 6g碘化钾溶于20mL水中 加入1 3g碘 溶解后加水稀释到100mL 5 其余试剂 四 测定方法1 样品处理称取2 5g样品 含淀粉0 5g左右 置于铺有折叠滤纸的漏斗内 先用50mL乙醚分5次洗涤以除去脂肪 再用约100mL85 的乙醇分次洗去可溶性糖类 用50mL水将残渣移至250mL烧杯中 2 酶水解将烧杯置沸水浴上加热15min 使淀粉糊化 放冷至60 以下 加入20mL淀粉酶溶液 在55 60 保温1h 并不时搅拌 取1滴此液于白色点滴板上 加1滴碘液应不呈蓝色 若呈蓝色 再加热糊化 冷却至60 以下 再加20mL淀粉酶溶液 继续保温 直至酶解液加碘液后不呈蓝色为止 加热至沸使酶失活 冷却后移入250mL容量瓶中 加水定容 混匀后过滤 弃去初滤液 收集滤液备用 3 酸水解取50mL上述滤液于250mL锥形瓶中 加5mL 1 1 盐酸 装上回流装置 在沸水浴中回流1h 冷却后加2滴甲基红指示剂 用20 氢氧化钠溶液中和至红色刚好消失 把溶液移入100mL容量瓶中 洗涤锥形瓶 洗液并入100mL容量瓶中 加水定容 摇匀 供测定用 4 测定按还原糖测定法中直接滴定法进行 同时取50mL水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液 做试剂空白试验 六 结果计算式中 F 10mL碱性酒石酸铜相当的葡萄糖量 mgV 滴定时样品水解液消耗量 mLV0 滴定时空白溶液消耗量 mLm 样品质量 g 实验十六淀粉的测定 酸水解法 一 实验目的掌握酸水解测定淀粉含量的方法 二 实验原理样品经乙醚除去脂肪 乙醇除去可溶性糖类后 用酸水解淀粉为葡萄糖 按还原糖测定方法测定还原糖含量 再折算为淀粉含量 三 适用范围及特点此法适用于淀粉含量较高 而半纤维素和多缩戊糖等其他多糖含量较少的样品 四 仪器试剂及玻皿配置仪器1 40目筛2 精密pH试纸3 组织捣碎机4 恒温水浴锅5 分析天平试剂1 乙醚AR2 85 乙醇3 40 氢氧化钠4 21 9 醋酸锌溶液5 10 6 亚铁氰化钾溶液6 0 2 甲基红乙醇溶液7 10 氢氧化钠8 1 1 盐酸溶液 五 测定方法1 样品处理 粮食 豆类 糕点 糕干粉 代乳粉等较干燥 易研细的样品 称取2 5g 含淀粉0 5g左右 磨碎 过40目筛的样品 置于铺有慢速滤纸的漏斗中 用30mL乙醚分三次洗去样品中的脂肪 再用150mL85 乙醇分数次洗涤残渣以除去可溶性糖类 然后用100mL水把漏斗中残渣全部转移至250mL锥形瓶中 蔬菜 水果 粉皮等水分较多 不易研细的样品 先按1 1加水在组织捣碎机中捣成匀浆 称取5 10g 含淀粉0 5g左右 匀浆于250mL锥形瓶中 加30mL乙醚振荡提取脂肪 用滤纸过滤除去乙醚 再用30mL乙醚分二次洗涤滤纸上残渣 然后以150mL85 乙醇分数次洗涤残渣 以除去可溶性糖类 以100mL水把残渣转移到250mL锥形瓶中 2 酸水解于上述250mL锥形瓶中加入30mL 1 1 盐酸 装上冷凝管 置沸水浴中回流2h 取出用流动水冷却 加入两滴甲基红指示剂 先用40 氢氧化钠调到黄色 再用 1 1 盐酸调到刚好变为红色 再用10 氢氧化钠调到红色刚好褪去 若水解液颜色较深 可用精密pH试纸测试 使样品水解液的pH值约为7 然后加入5mL21 9 醋酸锌 10 6 亚铁氰化钾 摇匀后放置20min 以沉淀蛋白质 果胶等杂质 摇匀后用水转移至250mL容量瓶中 加水定容 过滤 弃去初滤液 收集滤液供测定用 空白试验 取100mL水和30mL 1 1 盐酸于250mL锥形瓶中 按上述方法操作 得试剂空白液 3 测定 按直接滴定法测定还原糖进行 六 结果计算 公式同淀粉的测定 酶水解法 实验十七酱油中氯化钠含量的测定 莫尔法 一 实验目的掌握酱油或其它液体食品中氯化钠的测定方法 二 实验原理样品中的氯化钠溶于水 其中的氯离子能与硝酸银反应生成乳白色沉淀 当反应到达终点时 稍过量的硝酸银能与铬酸钾反应生成砖红色沉淀从而指示终点 可用铬酸钾作指示剂 用硝酸银滴定来测定氯化钠含量 三 仪器试剂及玻皿配置仪器1 分析天平2 恒温水浴锅3 酸式滴定装置试剂1 0 1mol LAgNO3溶液2 NaClAR3 5 K2CrO4四 测定方法1 样品处理准确吸取酱油样品2 00ml 于100ml容量瓶中 用蒸馏水定容 2 样品测定吸取1中样品溶液5 00mL于250ml锥形瓶中 加水至80ml 加5 铬酸钾指示剂1ml 摇匀 用0 1mol LAgNO3溶液滴定出现砖红色沉淀 记下消耗AgNO3溶液的体积V1 3 空白试验 取蒸馏水80mL 加5 铬酸钾指示剂1ml 用0 1mol LAgNO3溶液滴定出现砖红色沉淀 记下消耗AgNO3溶液的体积V0 4 0 1mol LAgNO3溶液的标定精密称取经98 102 烘干的氯化钠固体0 5850g 于100mL小烧杯中溶解后 转入100mL容量瓶中 用蒸馏水洗涤烧杯2 3次 洗液一并转入容量瓶中 定容 准确吸取上述氯化钠标准溶液20 00mL 置于250mL锥形瓶中 加水至80mL 再加5 铬酸钾指示剂1mL 用0 1mol LAgNO3溶液滴定出现砖红色沉淀 记下消耗AgNO3溶液的体积V2 5 固体样品中氯化钠的测定将样品捣碎后 精密称取样品5 20g 置于250mL烧杯中 加入蒸馏水80 150mL 置电炉上加热到90 98 后 保温浸泡30min 冷却之后转移到100或250mL容量瓶中 用蒸馏水稀释至刻度 吸取25 0 50 0mL滤液用于滴定 对于蛋白质含量高的样品 还应除去蛋白质 对于含有机酸较多的样品 应用碱中和后再测定 五 结果计算1 0 1mol LAgNO3溶液的准确浓度式中 C 硝酸银溶液的准确浓度V2 硝酸银标定氯化钠时消耗的体积 mL 2 样品中氯化钠的含量式中 C 硝酸银溶液的准确浓度 V1 硝酸银滴定样液消耗的体积 mL V0 硝酸银滴定空白液消耗的体积 mL V测 测定时吸取样液的体积 mL V定 样品处理时定容的体积 mL 实验十八肉制品中亚硝酸钠的测定 盐酸萘乙二胺法 一 实验目的掌握盐酸萘乙二胺法测定肉制品中亚硝酸钠的方法及分光光度计的使用 二 实验原理样品经沉淀蛋白质 除去脂肪后 在弱酸条件下 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化 再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料 其最大吸收波长为538nm 可测定吸光度并与标准比较定量 三 仪器试剂及玻皿配置仪器1 组织捣碎机2 分光光度计3 分析天平4 温度计5 漏斗及过滤装置试剂1 10 6 亚铁氰化钾溶液2 21 9 乙酸锌溶液3 饱和硼砂溶液4 0 4 对氨基苯磺酸溶液5 氢氧化铝乳液 6 0 2 盐酸萘乙二胺溶液7 果蔬提取剂8 5 0 g mL亚硝酸钠标准液 四 测定方法1 试样中硝酸盐和亚硝酸盐的提取 肉类制品 红烧类除外 称取经搅碎混合均匀的试样5 0g于50mL烧杯中 加硼砂饱和溶液12 5mL 搅拌均匀 以70 左右重蒸馏水约300mL将其洗入500mL的容量瓶中 置沸水浴中加热15min 取出 一边转动 一边加入5mL亚铁氰化钾溶液 摇匀 再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质 定容 混匀 静置0 5h 除去上层脂肪 过滤 弃去初滤液30mL 收集滤液备用 红烧类肉制品 前面部分同肉类制品 取其滤液60mL于100mL容量瓶中 加氢氧化铝乳液至刻度 过滤 滤液应无色透明 果蔬类 称取适量样品用组织捣碎机捣碎 取适量匀浆于500mL容量瓶中 加200mL水 加入果蔬提取剂100mL 如滤液有白色悬浮物 可以适当减少加入量 振摇1h加2 5mol L氢氧化钠溶液40mL 用重蒸馏水定容后立即过滤 然后取60mL滤液于100mL容量瓶中 加氢氧化铝乳液至刻度 用滤纸过滤 滤液应无色透明 2 标准曲线绘制吸取0 00 0 20 0 40 0 60 0 80 1 00 1 50 2 00 2 50mL亚硝酸钠标准使用液 相当于0 1 2 3 4 5 7 5 10 12 5 g亚硝酸钠 分别置50mL带塞比色管中 各加入0 4 对氨基苯磺酸2mL 混匀 静置3min 5min后各加入1 0mL0 2 盐酸萘乙二胺溶液 加水至刻度 混匀 静置15min 用2cm比色杯 以零管调节零点 于波长538nm处测定吸光度 绘制标准曲线 3 样品测定吸取40 0mL样品提取液于50mL比色管中 按绘制标准曲线同样方法操作 于波长538nm处测吸光度 从标准曲线上查出测定用样液中亚硝酸钠的含量 g mL 五 结果计算式中 c 测定用样液中亚硝酸盐含量 g mLm 样品质量 g 实验十九二氧化硫的测定 盐酸副玫瑰苯胺比色法 一 实验目的掌握盐酸副玫瑰苯胺比色法测定二氧化硫的方法及分光光度计的使用 二 实验原理亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物 再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色物质 其色泽深浅与亚硫酸含量成正比 可比色测定 三 仪器及试剂配置仪器 1 烧杯2 容量瓶3 移液管4 量筒5 带塞比色管6 碘量瓶7 分析天平试剂 1 四氯汞钠吸收液 称取13 6g氯化高汞及6 0g氯化钠溶于水中并稀释至1000mL 放置过夜 过滤备用 2 0 1 盐酸副玫瑰苯胺溶液 称取0 1g盐酸副玫瑰苯胺于研钵中 加少量水研磨使溶解并稀释至100mL 取出20mL 移入l00mL容量瓶中 加入盐酸 1 1 充分摇匀后使溶液由红变黄 如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色 再加水至刻度 混匀备用 3 1 2 氨基磺酸铵溶液 称取1 2g氨基磺酸胺于50mL烧杯中 用水转入100mL容量瓶中 定容 4 0 2 甲醛溶液 吸取0 55mL无聚合沉淀的甲 36 加水定容至100mL 混匀 5 亚铁氰化钾溶液 参见比色法则亚硝酸盐试剂