植物生理学 NR活力测定——体内法(活体法).doc

XX大学实验报告课程名称： 植物生理学及实验 实验类型: 实验项目名称： 植物NR活力测定体内法（活体法） 学生姓名： XXX 专业： XX 学号： 3XXXXXX 同组学生姓名： XXX 指导老师: XXX 实验地点： XXXXXXXXX 实验日期： 2XXX 年 X 月 XX 日一、实验目的和要求：1. 掌握体内法测定植物组织中的硝酸还原酶原理和方法，明确诱导酶含义。二、实验内容和原理：植物细胞呼吸代谢NO2NO2NO3NO3NADH2 NAD测定原理：后加！先加！ NO2 + 磺胺 + 萘基乙烯二胺红色化合物540nm最大吸收峰测定OD三、主要仪器设备：小麦苗、50mL注射器、恒温箱、烧杯、分光光度计、试管四、操作方法与实验步骤：抽气1min放入50mL注射器中加酶促反应液10ml取各组苗地上部0.5g,切成合适长度 加磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml取出后将反应液过滤入烧杯中取4ml反应过的液体置恒温箱35 20min 室温放置5min测540nm OD作空白：测540nm OD室温放置5min4ml酶促反应液 +磺胺溶液2ml+萘基乙烯二胺溶液2ml五、实验数据记录和处理：OD值对照组1.187处理组0.181六、实验结果与分析：NO 2标准曲线:拍照得到标准曲线为 y = 0.0068x + 0.007 (R2=0.9992).处理组NO 2 (nmol) = (1.187 0.007) / 0.0068 = 173.53 (nmol)对照组NO 2 (nmol) = (0.181 0.007) / 0.0068 = 25.59 (nmol)NR活力（NO2生成nmol/（鲜重g.h）= NO2（nmol）*（10/4）/（1/3）/0.5g.处理组NR活力 = 173.53 * 2.5 * 3 / 0.5 = 2602.95 nmol/gh对照组NR活力 = 25.59 * 2.5 * 3 / 0.5 = 383.85 nmol/gh表1.处理组与对照组NR活力记录表取材质量（g）OD540NO 2(nmol)NR活力（nmol/gh）处理组0.501.187173.532602.95对照组0.500.18125.59383.851、比较KNO3诱导和加NH4Cl的NR活力大小，诱导时如用NaNO3 替代KNO3结果会如何，为什么？如不进行光照，结果会怎么样，为什么？如用NaNO3 替代KNO3，那么光合呼吸作用减弱，酶的活力降低，从而影响硝酸根转化为亚硝酸根，实验中可能两组紫红色的颜色差别很小，使测得的还原酶活力偏低。原因：K+离子可以调节渗透，气孔开闭，促进氧化磷酸化，另外钾火花呼吸作用和光合作用的酶的活性，是40多种酶的辅助因子，是形成细胞膨胀和维持细胞内电中性的主要阳离子。而Na离子虽然可以部分地代替钾的作用，但不能完全替代。如不进行光照，结果可能是两则的实验结果相差不大，而且所测定的还原酶的活力都很低。原因：之前的呼吸作用已经消耗大量的糖类，而在没有光合作用的条件下，苗储存的糖类很少，所以呼吸作用会大大减弱，使酶活力比预期结果低，两组亚硝酸盐含量相差不多。2、亚硝酸是过多施用氮肥后蔬菜中积累的致癌物质，请根据本实验写出简易测定蔬菜亚硝酸含量的方法。取待测蔬菜的组织，用酶促反应液浸提，取适量的反应液加磺胺加萘胺，静置后用分光光度计测定，然后再标准曲线上计算出相应的亚硝酸的含量。七、讨论、心得：1.在剪叶片的时候不要为了一时的简便而直接用手撕，因为很多手上的杂质会带入到叶片