C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒EIA3954.doc

C反应蛋白超敏检测ELISA试剂盒（德国DRG进口原装 货号 EIA3954 规格 96T）用于体外诊断用存储于2 C 8 C.产品专利名C反应蛋白超敏检测试剂盒（酶联免疫法）预期用途此超敏CRP ELISA检测试剂盒能用于人血清中C反应蛋白的定量检测检测C反应蛋白可用于感染，组织损伤，炎症和相关疾病的辅助检测简介C反应蛋白于1930年首次由Tilet和Francis在肺炎患者血清中鉴别出来，因其能结合和沉淀肺炎球菌C多糖而得名它是一种分子量约为110,000140，000道尔顿，由5个相同亚单位(由非共价键结合成的循环五聚物)组成的球蛋白C反应蛋白在肝脏中合成，正常情况下血清和血浆含量很少，浓度约为0.3 mg/dl它具有广泛的生理学意义，但与其它免疫球蛋白具有几种相似的功理，主要表现为机体防御C反应蛋白是种急性期蛋白，在多种疾病的非特异性反应过程中(包括革兰氏阳性和革兰氏阴性微生物感染，风湿性关节炎，腹脓肿，胆管发炎等)，患者血清和血浆中的含量水平都会剧增在格林-巴利综合征，多发性硬化，特定的病毒感染，肺结核，急性传染性肝炎，多种神经和炎症疾病，灼伤和外科术后的病人体内也能观察到高浓度的C反应蛋白尽管检测血清中C反应蛋白上升的浓度不能作为特定疾病的指标，但对于多种炎症的病发研究是很有意义的急性组织损伤后，在2448小时内血清或血浆中C反应蛋白的浓度就迅速上升，急性期间达到顶峰(大约上升1000倍)，创伤或炎症治疗后，其浓度立即下降人血清或血浆中C反应蛋白的浓度，在降至正常水平前会持续几天的上升检测C反应蛋白可作为炎症病变过程的标记物，甚至比红细胞沉降速度这种指标更可靠和灵敏因为红细胞沉降速度会受到非炎症进程机体的生理变化的影响常见检测C反应蛋白的方法包括：乳胶凝集试验，比浊法，放射免疫扩散法但这些方法的灵敏度都很低，而ELISA方法的灵敏度和特异性更高由于上升浓度的C反应蛋白往往与病理改变存在紧密联系，故也可作为诊断，治疗，炎症监测和相关病症的有效辅助工具此外，通过高灵敏度的方法检测C 反应蛋白也可增强其它心肌标记物(如肌红蛋白，肌钙蛋白I和T)的预测价值，有利于心血管和外围血管疾病的风险评估由于C反应蛋白值的上升为非特异性，所以需结合患者病历评估与先前的检测值作对比进行分析实验原理超敏CRP检测试剂盒基于酶免法原理，试验中采用了抗CRP的特异性单克隆抗体，包被板上包被了抗CRP抗体鼠单抗，HRP标记的抗CRP抗体羊抗，试验样本与这两个抗体反应，样本中CRP分子在固相抗体和酶联物抗体之间，室温下45min孵育过后，洗板，除去未结合的标记抗体，TMB底物液加入，孵育20min，变成蓝色，以1N HCL终止颜色反应，变成黄色样本中的CRP浓度与颜色强度成正比，450nm处检测吸光值试剂盒组成1. 包被板，96孔，包被有抗CRP小鼠单抗2. 标准品，1.0ml/支，浓度分别为：0；0.005；0.010；0.025；0.050；0.100mg/L，含防腐剂，即用3. 样本稀释液，50ml/支，含磷酸缓冲液-BSA溶液，含防腐剂4. 酶联物，12ml/支，含HRP标记的抗CRP羊抗，含防腐剂5. TMB底物液，11ml/瓶，TMB6. 终止液，11ml/瓶，1N 盐酸实验所需器材但试剂盒未提供1. 精确移液器：5ul；10ul；50ul；100ul；1.0ml2. 一次性枪头3. 酶标仪4. 混合器或相关仪器5. 吸水纸6. 坐标纸贮存条件1. 未开封的试剂盒可在2-8下保存至有效期2. 保持微孔板保存于含有干燥剂的密封袋内，尽可能避免接触潮湿的空气试剂准备1. 实验前将所有试剂平衡至室温(18 C 25 C)2. 实验前病人血清应稀释100倍，如5ul的血清+495ul的样本稀释液；标准品不需要稀释3. 稀释后的样本CRP浓度仍超过了10mg/L时，应进一步进行稀释（10倍）（如10ul 已100倍稀释的样本+90ul样本稀释液）样本采集与准备1. 此试验需使用血清样本2. 标准静脉采血技术采集样本，采集后60min内分离出血清3. 24小时内样本不使用的话，需贮存于-20或更低，可保存6个月4. 避免使用溶血（鲜红色），脂血（乳白色）或浑浊样本（离心后）5. 样本不能反复冻融，不要将样本贮存于无霜冷冻机内，冻存的样本和浑浊样本或含有其他微粒物质的样本，在使用前都需要进行离心操作注意事项1. 加样建议（单通道或多通道）：所有标准品，样本和质控加样应在3min之内完成2. 所有标准品，样本和质控都做双孔检测3. 加入终止液后15min内读数实验步骤1. 实验前病人样本和质控稀释100倍，见“试剂准备”；不要稀释标准品2. 将实验所需包被板固定于板架上3. 将10ul的标准品，稀释的样本，稀释的质控加于相应孔内4. 每孔加100ul的CRP酶联物5. 充分混合30秒，充分混合相当重要6. 室温下（18-25）孵育45min7. 迅速弃去反应液，用去离子水或双蒸水洗板5次，不要使用自来水；8. 吸水纸上拍干，去除残留液滴9. 每孔加100ul的TMB底物液，轻轻混合5秒10. 室温下孵育20min11. 每孔加终止液100ul12. 轻轻混合30秒，确保蓝色溶液全转变为黄色13. 15min内酶标仪上读数（450nm）结果计算1. 计算各标准品，样本的平均OD值2. 以标准品的浓度为X轴，OD值为Y值，绘制标准曲线3. 样本浓度值可从标准曲线上直接得到；也可使用相关数据处理软件得到实验结果4. 所得样本浓度值还需乘以稀释因子100，而得到最终结果5. 若样本浓度高于10mg/L，需进一步稀释（10倍），所得结果需乘以10006. 注意：病人样本CRP浓度低于0.1mg/L的记录为0.1mg/LCRP标准曲线示范以下为以CRP的浓度为X轴，相应的吸光值为Y轴的典型标准曲线提示：此标准曲线仅供演示说明用，不能用于未知样品的计算每个实验室在每次实验都应建立自已的数据和标准曲线期望值建议每个实验室都应在健康人群的基础上建立自己的正常值范围；以下是出版的文献中提及的健康人群的CRP值正常血清：0.010.35mg/L成人血清：0.068