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微生物的基本知识回顾 细菌的性质 1 菌体形态:球，杆，螺旋 约40层网状肽聚糖覆盖在细胞表面，磷壁酸贯穿于肽聚糖层，形成厚约2080nm的细胞壁； 磷壁酸贯穿其中； 内壁层：靠近细胞膜，为12层网状肽聚糖； 外壁层： 脂多糖（LPS）、磷脂层和脂蛋白层； 细菌的特出结构芽孢：在其生长的一定阶段在细胞内形成圆形或椭圆形、圆柱形休眠体结构称为芽孢。 功能：对恶劣环境有很强的抵抗能力 ，有的芽孢，在一定条件下可保持活力数年甚至数十年之久，它本身具有一个细胞维持生命的所有功能。 特点：耐高温，抗热性很强；抗化学药物和酸类；对溶菌酶有抗性 。 细菌的特出物质 热原质：特点：耐高温；不具挥发性（重要疏水原理）；易被强酸、强碱破坏；可滤过性；易吸附性；可稀释性（水溶性） 内毒素：细胞壁外层，属于细胞壁的组成部分（脂质A）一般与细胞结合在一起不分泌到环境中，只有当细菌溶解（裂解）后才释放出来，故称内毒素。少量内毒素0.001g入血即可引起发热反应。内毒素被吞噬细胞吞饮后，细胞释放出内源性致热原，经血流到达下丘脑， 体温调节中枢引起发热。 作用特点：没有组织器官的选择性 肌体发热，腹泻，出血性休克或其他组织损伤 不能经甲醛脱毒 3 细菌纯培养的群体生长规律 细菌菌落 放线菌菌落 霉菌菌落 2010年版中国药典微生物检验主要增修订内容 1.培养基的质量控制 2.菌种的质量控制 1.微生物检验培养基质量控制技术 1.1培养基制备过程中的注意事项 1.1.1培养基的水化 培养基水化时不得用铜锅或铁锅,以防有离 子混入培养基中,影响微生物的生长； 配制培养基最常用的溶剂是纯化水 ,不能含 有任何可能抑制或影响微生物生长的物质； 培养基制备过程中的注意事项 1.1.2 培养基的溶解 在培养基分装灭菌前,各成分应溶解均匀, 使用电炉等设备煮沸培养基时,应用小火加热,并边加热边搅拌,避免培养基焦化或爆沸溢出。 培养基制备过程中的注意事项1.1.3 培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌 湿热灭菌必须严格控制灭菌温度和时间 培养基制备过程中的注意事项 1.1.4 培养基的pH微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。调整培养基的pH,应用1 mol/LNaOH或1 mol/L HCl调整pH，一般灭菌前比最终pH高0.20.3。 培养基制备过程中的注意事项 1.1.5 培养基的保温 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。 1.2 培养基质量控制（2010版药典） 培养基适用性检查 二、 定量质控菌株（BioBall） BioBall是由生物梅里埃BTF公司生产的定量质控标准菌株，其水溶性球状物包含了数量精确的微生物个体，主要用于培养基生长能力验证、无菌控制、微生物限度检查、抑菌效力检查、阳性对照、方法验证、能力验证和MOU测定等试验，广泛用于制药工业、食品工业、水及废水检测和其他相关行业的微生物质控。目前，BioBall有超过25种常用的检测标准菌种，可提供SingleShot、MultiShot-550、HighDose -10K和MultiShot-10E8四类系列产品，分别含有2830cfu（标准误差小于或等于3cfu ）、500600cfu、800012000 cfu和0.71.5x 108 cfu数量的孢子、芽孢或细胞。 菌落计数法证明培养基生长能力USP USP要求每批配制培养基作促生长能力测试 菌种选择（变化大）：每个微生物单独测试 大豆酪蛋白消化培养基：金葡，铜绿，枯草 沙堡葡萄糖培养基：白念，黑曲 方法：在培养中加入少量中（不超过100cfu）的微生物，按要求培养。对于新鲜制备的菌液，生长与前批已通过测试的培养基的前次测试结果一致。标准： 计数结果与标准接种物的计算量差别小于系数2（即 计数结果在标准接种物数量的50%-200%）。 USP控制菌检查用固体培养基能力检查： 使用表面涂布法，在