高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量.doc

高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量更新日期： 06-07 作者：林少华， 赫玉芳， 南敏伦， 王铁柱， 赵全成 【关键词】 高效液相色谱法 摘要：目的建立降脂减肥颗粒中葛根素的含量测定方法。方法采用Shim-pack（岛津）ODS C柱（150 mm 4.6 mm，5 m），流动相为甲醇0.1%磷酸（25.374.7），流速为0.9 mg/ml，检测波长为250 nm。结果葛根素在0.114 00.570 0范围内线性关系良好，r=0.999 6，平均回收率为98.7%，RSD为0.67%。结论此测定方法准确，重现性好，可作为制剂的质量控制方法。 关键词：降脂减肥颗粒； 葛根素； 高效液相色谱法 Determination of Puerarin in Jiangzhijianfei Granule by HPLC Abstract:ObjectiveTo establish the HPLC method for the determination of puerarin in Jiangzhijianfei granule.MethodsThe chromatographic conditions included:The column is Shim-pack ODS C18 column (150 mm4.6 mm, 5 m),the mobile phase is methol- water H3PO4 ,the detection wavelength is 250 nm and the column temperature is room temperature.ResultsThe linear range of puerarin was 0.114 00.570 0 g, r=0.999 6.The average recovery of puerarin was 98.7% with RSD 0.67%. ConclusionThe mothod is accurate and can be used as a determination of puerarin in Jiangzhijianfei granule. Key words:Jiangzhijianfei granule； Puerarin； HPLC 降脂减肥颗粒是在原部颁标准17册收载的药物降脂减肥片基础上开发而成的中药、天然药物9类新药，由何首乌、三七、葛根、菟丝子、枸杞子、松花粉 、丹参、大黄、泽泻、茵陈等中药组成。该药具有滋补肝肾，养益精血，扶正固本，通络定痛，健脾豁痰，明目生津，润肠通便等作用，用于各型高脂血症，心脑血管硬化，单纯性肥胖，习惯性便秘，痔疮出血等症。其中葛根系方中主药，为常用中药，系豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根。在原降脂减肥片标准中没有收载方中药味的含量测定，现有的文献中也没有对方中葛根素进行含量测定的研究。本实验利用HPLC法，在有关文献的基础上1，2，对降脂减肥颗粒中葛根素的含量进行了测定，并对该方法进行考察，结果表明该方法可以控制复方制剂的质量。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪：岛津LC10AT高效液相色谱仪，日本岛津公司生产， SPD10A紫外检测器，手动进样；KQ250型超声波处理器（功率 250W、频率 20kHz）；电子天平（德国赛多利斯公司BP211D）。葛根素对照品：购于中国药品生物制品检定所，批号为0752200108；降脂减肥颗粒为通化鸿宝药业有限公司提供。甲醇为色谱纯(Fisher Chemicals，批号为040126)，水为超纯水，其它试剂皆为分析纯。 2 实验方法 2.1 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每毫升含葛根素0.03 mg的溶液，即得。 2.2 供试品溶液的制备取本品20 g，研细，取1 g，精密称定，加入30%乙醇30 ml，置具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，以30%乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 2.3 含量测定色谱条件与系统适应性实验 Shimpack（岛津） ODS C18柱（150 mm 4.6 mm，5 m），进样量：10 l；流动相为甲醇0.1%磷酸（25.374.7），流速为0.9 mg/ml，检测波长为250 nm，柱温为室温。在上述色谱条件下，对降脂减肥颗粒进行测定，测定后按外标法计算。对照品、样品、阴性对照及溶剂色谱图见图14。结果表明，葛根素与杂质峰没有重叠，分离效果好（分离度为3.15），理论塔板数以芍药苷计为5 630（n=5），RSD=0.9%。图1 葛根素对照品图谱 图2 降脂减肥颗粒样品图谱 图3 阴性对照图谱 图4 溶剂图谱 3 实验结果 3.1 线性关系考察精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇制成每毫升含葛根素0.028 5 mg的溶液。精密吸取此溶液4，8，12，16，20 l注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值对进样量进行回归，得回归方程为：Y=2 490 376.5X+19 847.9，r=0.999 6。葛根素在0.114 00.570 0 g内线性关系良好。 3.2 精密度实验按2.2方法制备供试品溶液，连续进行5次测定，葛根素的RSD为0.53%，表明其精密度良好。 3.3 稳定性实验取同一供试品溶液，室温放置，在0，2，4，6，8 h分别进样，测定峰面积，其葛根素的RSD为0.24%，表明供试品溶液中葛根素在8 h内稳定。 3.4 重现性实验对同一批样品分别称取5份，按照2.2方法操作，按2.3色谱条件测定，测定其葛根素的RSD为1.05%，表明重现性良好。 3.5 回收率实验精密称取已知葛根素含量的样品，分