CA7000血凝仪分析程序.doc

贵州省黔南州中医院检验科 临检室管理SOP文件文件编号：QZJ-LJ-022版 序：A/O生效日期：2016年1月10日责任部门：检验科页 码： 第 8 页 共8页CA-7000血凝仪分析程序1 原理CA7000 是一台用于体外诊断的全自动凝血分析仪。能快速并且高精度地分析大量样本。其利用凝固法、发色底物法及免疫分析样本。1.1凝固法基本测试原理是光学法的散射光检测（用660nm光电二极管检测散射光强度的变化）。还并用了百分比方式的测定原理，当加入试剂后，凝血启动，随之光学出现变化，仪器把这种光学的变化描绘成凝固曲线：把开始出现凝集的起始点作为0%、把完全凝固的终点作为100%、把50%变化点处作为凝固时间（报告点），当测定含有干扰物（黄疸、溶血、高脂血症等）或低纤维蛋白原血症的特殊标本时，其作为起始点的0%的基线会随之上移或下移，相当于扣除本底干扰。用此法检测的项目PT、APTT、FIB、TT、内源凝血因子（FVIII、IX、XI、XII）、外源凝血因子（FII、V、VII、X）等。1.2 发色底物法试剂中为人工合成的含某种酶裂解位点的短肽，与产色物质如对硝基苯胺（pNA）连接，待检物品中含有活性酶或无活性的酶源被加入的激活剂活化，在检测过程中产色物质被解离下来，使被检物品出现颜色变化，与其被检物含量呈一定的数量关系。用此法检测项目：AT-III、PIg、PC、PS、FM、PAI、Tpa、2-AP等。1.3免疫法以被检物作为抗原，制备相应的多克隆抗体，利用抗原抗体的特异结合反应来对被检测物进行定性和定量检测，在凝血仪上多采用免疫比浊法测定，其基本原理是当一定波长的光线通过反应混合液时，被其中抗原抗体反应形成的免疫复合物吸收而减弱，在一定范围内，其吸光度与复合物量呈正相关，因此当抗体量固定时，根据复合物的吸光度值，即可推算出待测抗原含量。用此法检测的项目有D-二聚体、vWF-因子、FDP等。2 试剂及消耗品2.1凝血活酶含钙试剂（Thrombore1 S)2.1.1德灵（DADE BEHRING）公司生产，ISI（国际敏感度指数）0.96.2.1.2使用方法：配制时每瓶用10ml蒸馏水溶解，须放置37水浴30min方可使用，使用前小心混匀。2.1.3试剂稳定性：未溶解试剂2-8至包装有效期内稳定；试剂溶解后37稳定8h、15-25稳定2d、2-8稳定5d。2.2激活剂2.2.1德灵（DADE BEHRING）公司生产，为液体试剂，直接使用，使用前轻轻颠倒混匀5-8次。2.2.2储存：未开盖试剂置2-8存放至有效期，开盖后2-15有效期7d，不能冷冻保存。2.3氯化钙溶液（Calcium Chloride Solution）2.3.1德灵（DADE BEHRING)公司产品，为液体时机，直接使用。2.3.2储存：未开盖试剂置2-25存放至包装有效期，开盖后2-25有效期8周。2.4凝血酶试剂2.4.1德灵（DADE BEHRING)公司产品。2.4.2配制方法：每瓶5ml专用缓冲液溶解，须放置室温或3730min后方可使用。2.4.3储存：未溶解试剂2-8至包装有效期，试剂溶解后2-8可稳定7d，机上有效期（15）10h。2.5D-Dimer Plus试剂盒2.5.1为德灵（DADE BEHRING)为公司产品，包含以下内容：D-Dimer PLUS试剂，6小瓶，每瓶4ml；D-Dimer PLUS乳胶，6小瓶，每瓶5ml；D-Dimer PLUS溶剂，1小瓶，每瓶25ml。2.5.2配制方法2.5.2.1D-Dimer PLUS Reagent：每瓶用4ml“D-Dimer PLUS Reconstitution Medium”溶剂溶解，在室温下（15-25）放置约5min，并不时进行摇动混匀。2.5.2.2D-Dimer PLUS Accelerator：用5ml“蒸馏水”溶解，在室温下（15-25）放置约15mn，并不时进行摇动混匀。2.5.3储存：没开配试剂置2-8存放至包装有效期，溶解后按表8-1-1条件保存。保存条件D-Dimer乳胶试剂（使用前摇匀）D-Dimer Accelerator2-8（冷藏）不建议5h15-25（不开盖）5dN/A-18（冷冻）2周2周上机稳定性（8-20）48hN/A表8-1-1 D-二聚体试剂配制后保存条件2.5.4注意事项2.5.4.1D-D乳胶试剂在0-4易发生自凝现象，自凝现象会引致试剂浊度发生变化而影响监测，建议复溶后常规使用的乳胶试剂保存在15-25，可以避免乳胶试剂的自凝现象，但开盖状态下乳胶试剂上机的稳定性为仅48h。2.5.4.2溶解后的试剂若在2d内用不完的，请分装冷冻保存，但注意不能反复冻溶。2.6缓冲液（Dade OwrenS Veronal Buffer或CA System Buffer)2.6.1德灵（DADE BEHRING)公司产品，用于标本稀释。2.6.2使用方法;每次倒出刚够当天使用的量放置于仪器上使用。2.6.3储存：没开配试剂置2-8密封存放至包装有效期，开盖后2-8可保存8周。2.7凝血酶试剂（Thrombin Reagent)2.7.1德灵（DADE BEHRING)公司产品。2.7.2配置方法：5ml蒸馏水盖好瓶盖，轻轻颠倒混匀直至完全溶解，禁止剧烈震荡，使用前轻轻混匀几次。2.7.3储存：没开试剂配置2-8存放至包装有效期，开配后2-8可稳定5d，15-25可稳定8h。2.8乏因子血浆包括乏VIII因子血浆试剂盒（人）、乏IX因子血浆试剂盒（人）、乏XII因子血浆试剂盒（人）。2.8.1配制方法：每瓶用1ml蒸馏水溶解使用，使用前放置15-25至少15min，然后，轻轻摇匀（不要产生泡沫）。2.8.2储存：未溶解试剂2-8之包装有效期，试剂溶解后15-25可稳定8h，-20可稳定4周。2.9Sysmex Clean I清洁液2.9.1希森美康（Sysmex)公司产品，为液体试剂，直接使用，用于测定过程中的吸样针冲洗。2.9.2储存：没开盖试剂置2-8存放至包装有效期，开盖后放于仪器上有效期1个月。2.10蒸馏水：实验室自制，用于检测过程中系统管路的冲洗。2.11质控血浆（Ci-TROl)德灵（DADE BEHRING)公司产品，包括Level1(Normal)、Level2(Abnormal)、Level3(Abnormal)三个水平，主要用于普通凝血项目的质量控制。2.12质控血浆（D-Dimer control I,II)德灵（DADE BEHRING)公司产品，包括Control plasma I、Control plasma II,用于D-二聚体的质量控制。2.13定标血浆2.13.1PT标准血浆（Standard Human Plasma)2.13.1.1德灵（DADE BEHRING)公司产品，用于PT%的定标校准；2.13.1.2配制方法：1ml蒸馏水溶解，放置15min后使用；2.13.1.3储存：没开盖试剂置2-8存至包装有效期，配置后室温可稳定2h，2-8可稳定4h，-20分装冷冻保存可稳定2周，-70分装冷冻保存可稳定6个月。2.13.2D-D的定标校准，为德灵（DEDA BEHRING0公司产品。2.13.2.2配制方法：1ml蒸馏水溶解，放置15min后使用（标准品靶值在瓶的标签上以“ug/L”给出）。2.13.2.3储存：未溶解试剂置2-8存放至包装有效期，溶解后保存室温可稳定2h，2-8可稳定4h，-20分装冷冻保存可稳定2周，-70分装冷冻保存可稳定6个月。2.13.3FIB标准血浆（Standard Human Plasma)2.13.3.1用于FIB的定标校准，为德灵（DADE BEHRING)公司产品。2.13.3.2配制方法：1ml蒸馏水溶解，轻轻转动和倒置混合，至完全溶解，严禁激烈震荡，室温放置15min后使用。2.13.3.3储存：未溶解试剂置2-8存放至包装有效期，溶解后室温可稳定2h，2-8可稳定4h，-20分装冷冻保存可稳定2周，-70分装冷冻保存可稳定6个月。2.13.4因子标准血浆（Standard Human Plasma)2.13.4.1用于因子的定标校准，为德灵（DADE BEHRING)公司产品。2.13.4.2配制方法：1ml蒸馏水溶解，轻轻转动和倒置混合，至完全溶解，严禁剧烈震荡，室温放置15min后使用。2.13.4.3储存：未溶解试剂置2-8存放至包装有效期，溶解后室温可稳定2h，2-8可稳定4h，-20分装冷冻保存可稳定2周，-70分装冷冻保存可稳定6个月。2.14其他消耗品Sysmex ReactionCA7000 Tube反应杯3校准程序3.1光学通道灵敏度校准检测每6个月1次，由厂家工程师进行。3.2定期进行温度检测校准每6个月1次，或有相应温度错误报警时进行，由厂家工程师执行。3.3定期进行机械位置检查调校每6个月1次，或有相应定位错误报警时进行，由厂家工程师执行。3.4项目定标对于Fbg、D-D、因子活性这些报告单位含量浓度、活性单位的项目，原则上每更换一批新批号的试剂就要进行定标曲线的重新制备，方法如下。3.4.1按要求溶解好定标血浆，放室温10min后使用。3.4.2在主菜单选择【Stand Curve】选择项目（如Fbg)【Analysis Setting】将定标液的定制输入【Assay Sheet Val】处。3.4.3在每个稀释度后面输入要测试的次数2（Times)。3.4.4以上全部输入完后，按Return 【OK】储存设置。3.4.5将定标液用小样本杯放置在样本加上第1位，放在进样器上，将相应试剂/稀释液等放好在试剂盘相应位置。3.4.6在主菜单选【Work List】【Standard Curve】点击相应项目【Return】【Start】，测定标曲线测试自动进行。3.4.7重新进入定标曲线画面【Standard Curve】，等所有稀释点结果都测定出来后，如果曲线可接受，则按【Update】【Update】储存新曲线。4仪器常规操作步骤9图8-1-10打开电源前的外观检查 打开电源准备试剂，输入试剂补充反应管检查标准曲线运行质量控制准备样本建立工作列表分析样本分析STAT样本中断分析关闭电源4.1 开电源前操作4.1.1 清洗液桶：及时用蒸馏水或去离子水补充清洗液桶，勿使清洗液低于最低液面。4.1.2 清倒废液：及时清倒废液，至少每天清倒废液一次。4.1.3 仪器外观检查：检查各种管线的连接，确保没有管子脱线或扭结，且电源线被牢固的插入交流电插座。4.1.4 打印纸：如配备打印机，请确保打印机中有当天待处理样本所需的足够打印纸。4.2 打开电源4.2.1 按顺序打开设备电源：打印机气动组件电源组件主机（右侧），自检自动进行。4.2.2 当自检完成并且没有检测到错误信息时，程序自动载入，完成后进入主菜单窗口；约5min，屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”，提示可进行检测。4.3 试剂准备4.3.1 准备试剂：配置见前述。4.3.2 设置试剂：见图8-1-2试剂放入相应设定的试剂架上【Reagent Position】或【F/C/B Position】点击菜单窗口【Set Reagents】点试剂位所对应按键显示数字键，输入试剂量【ENTER】【return】回到主菜单窗口图8-1-2试剂准备流程图4.4 补充反应管打开反应管斗仓，添加反应管。注意补充反应管时不要超出限制线，否则容易引起堵塞。4.5 检查标准曲线在主菜单中点【Standard Curve】点所需检查的分析参数【Select Tests】选择其他分析参数【Main Menu】回到主菜单。如需重设标准曲线请参考前述定标程序。4.6 运行质量控制：具体操作见质控操作程序。4.7 标本上机检测步骤4.7.1常见标本检测4.7.1.1无条码标本号管从主菜单按【Work List】【ID NO.Entry】在相应样本架孔位中输入样本编号按相应检测项目名称键（如Profile#1】可输入凝血四项检测的项目、Profile#2可输入凝血四项+D-二聚体检测项目、另PT、APTT】.则可单个输入检测项目），输入此标本检测项目后，选中项目相应位置标记为“0”【Enter】按或继续输入其他病人的编号、项目，按下【Repeat】，输入重复标本数目（此数目包括已输入的第一个标本数），可重复当前光标所选项目及按序编号【NEXT】进入下一空工作列表，该工作列表对应一样本架，如上操作继续输入（注意：该工作列表未输标本及检测项目不能跳至下一工作列表，否则样本架会前移一架而错位，故在标本检测命令录完后，应按【Prev】键检查所输项目的工作列表是否为空白，若为空白可相应位置撤入一空样本架）将标本按编号顺序摆入普通样本架，然后放置在进样器右侧当仪器处于Ready状态，按【START】，仪器自动条码扫描并通过双向连接识别标本号、项目等进行自动检测。4.7.1.2 有条码标签标本的检测：将标本按顺序摆入普通样本架，条码标签朝向内侧，然后放置在进样器右侧上，当仪器处于Ready状态，按【START】，仪器自动条码扫描并通过双向连接识别标本号、项目等进行自动检测。4.7.1.3 异常结果标本的检测：在工作列表中选中所要稀释标本按【Sample Specific】选中所要检测项目的名称进入该检测项目操作页面，选择稀释倍数【Retutn】【Start】开始检测。4.7.1.4 手工录入检测命令的删除：从主菜单按【Work List】选中工作列表中要删除的检测命令【ID No.Entry】按标本号编辑窗口中【C】键，删除标本编号按相应已选检测项目键，使“0”变为“”点【ENTER】点【QUIT】退回工作列表窗口。4.7.1.5 中断分析：当需修改工作量列表或补充试剂时，点【Interrupt】系统显示中断分析窗口，点【Order Change】/【Reagent Supply】进行修改指令或补充试剂和消耗品，点【Resume】分析重新开始；如果不恢复分析，并显示分析错误“X”。4.7.2急复标本的检测：采用将标本放置到“STAT样本固定器中检测的方法，若要分析一个STAT样本，必须暂时中断正在进行的分析。检测步骤如下。4.7.2.1 按下屏幕右上端的【STAT】键，将会出现STAT样本放置位置选择窗。4.7.2.2 按下【STAT Holder】键，将会中断正在进行的分析并出现“Being Interrupted”消息。短时间后，消息将消失，设置STAT样本的消息将出现。不中断分析，按下【Cancel】键。4.7.2.3 按下【OK】键，将出现STAT样本固定器分析登录屏上的工作列表，按【ID No.Entry】输入相应标本号及项目。4.7.2.4