新型肿瘤血管生成抑制剂hexastatin的研究进展.pdf

中国肿瘤生物治疗杂志h t t p ：w w w b i o t h e r o r gC h i nJC a n c e rB i o t h e r ，O c t 2 0 0 9 ，V 0 1 1 6 ，N o 55 3 7 D O I ：1 0 3 s 7 2 j i s s n 1 0 0 7 - 3 8 5 X 2 0 0 9 0 5 0 2 4新型肿瘤血管生成抑制剂h e x a s t a t i n 的研究进展A d v a n c e so fan e wi n h i b i t o ro ft u m o ra n g i o g e n e s i s ：h e x a s t a t i n综述温镭，贺欣，赵启仁综述，宋娜玲审阅( 中国医学科学院北京协和医学院放射医学研究所，天津3 0 0 1 9 2 ) 摘要肿瘤的生长和转移离不开新生血管的形成。H e x a s t a t i n 是一种新型的肿瘤血管生成抑制剂，它来源于细胞外基质，是型胶原蛋白面链的非胶原区N C I ，相对分子质量为2 50 0 0 。H e x a s t a t i n 的分布具有明显的组织特异性。H e x a s t a t i n 可以通过一种R G D 非依赖方式与整合素分子仅。B ，结合调节内皮细胞的黏附和迁移，并且剂量依赖性地抑制内皮细胞的增殖，对抑制血管生成起到显著的作用。H e x a s t a t i n 能抑制8 0 一9 0 的经b F G F 刺激的鸡胚绒毛膜血管的生成，抑制9 0 的人脐静脉内皮细胞的迁移，H e x a s t a t i n 还能有力地( 大约6 0 ) 抑制C S I 黑素瘤细胞的生长。在已建立的肿瘤小鼠模型中，H e x a s t a 一曲能抑制小鼠肺癌移植瘤生长。在癌细胞浸润过程中，a 6 ( I V ) 链经常会在癌细胞巢穴周围的基底膜区域中缺失，使得H e x -a s t a t i n 在癌组织中含量下调，从而成为诊断肿瘤浸润的重要指标。H e x a s t a t i n 作为新型的肿瘤血管生成抑制剂在肿瘤的防治中具有重要的研究和应用前景。 关键词 H e x a s t a t i n ；血管生成抑制剂；内皮细胞；肿瘤生物治疗 中图分类号】I L 0 7 9 1 ；R 7 3 0 5 文献标志码A 文章编号1 0 0 7 - 3 8 5 X ( 2 0 0 9 ) 0 5 - 0 5 3 7 - 0 4血管发生对于生物体内很多正常的生理过程来说是至关重要的，它是从已有的血管中形成新生的管道。同样，各种病理现象的产生和发展，如糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎以及肿瘤的生长和转移等，也与血管发生有着重要的联系划。研究p 剖发现血管发生过程的开启是由上调血管产生的刺激因子及下调血管形成的抑制因子共同作用的结果。通常情况下，人体内存在一个血管生成的屏障，血管发生的诱导过程是受到抑制的，而当需要产生新生血管时，这个屏障便被破坏，诱导过程刺激产生新的血管。早在1 9 7 1 年，F o l k m a n 一。便提出肿瘤的隹长和转移依赖于新生血管的生成，氧气从血管中扩散的最大限值是1 5 0 斗m ，如果阻断r 血流，肿瘤细胞便因为从血管中得不到赖以生存的氧气及营养而发生凋亡。此学说的提出为肿瘤的生物治疗提供了新的方法，寻找内源性的廊管生成抑制因子逐渐成为研究的热点。细胞外荜质是血管外周组织的主要成分它对胚胎形成、组织修复、伤口愈合、新生血管生成及肿瘤入侵都起着重要的作用。有研究。表明，细胞外摹质形态的改变对新牛血管形成和迁移的速度起着凋控作用。近砦年的研究一陆续发现了一系列内源性血管生成抑制因子，它们大多是细胞外基质中大分子蛋白的片段，其中有一大类来源于胶原蛋白，被称为胶原来源的抗血管生成因子( c o l l a g e n d e r i v e da n t i a n g i o g e n e s i sf a c t o r s ，C D A F s ) 。诸如源于型胶原的内皮抑素( e n d o s t a t i n ) ，源于V 型胶原的休眠蛋白( r e s t i n ) ，以及源于型胶原的a r r e s t e n d l ( I V ) N C I 、血管能抑素( c a n s t a t i n ) 以( ) N C l 和肿瘤抑素( t u m s t a t i n ) ( o r 3 ( )N C l ) 等。本文中介绍的h e x a s t a t i n a 6 ( ) N C l 同样来源于型胶原，研究表明它也是一种强有力的新生血管生成和肿瘤生长的抑制剂。1H e x a s t a t i n 的命名、结构及分布1 1H e x a s t a t i n 的命名H e x a s t a t i n 早在1 9 9 3 年便由Z h o u 等2 1 首先克隆发现，它是型胶原蛋白仅1 一面链中撕链的一部分。人们对型胶原蛋白的各条链都进行了结构、生物活性等方面的研究，但是早期研究的热点主要集中在仅1( I V ) 、a 2 ( ) 和d 3 ( ) 链E ，并陆续提出这些链的N C l 区结构域具有抑制新生血管生成和肿瘤生长的活性，分别将它们命名为a r r e s t e n 、c a n s t a t i n 和t u m s t a t i n ，而对于a 6 ( I V ) 链活性的研究相对较少。K a r a g i a n n i s 1 3 】和M u n d e l 等4 1 先后明确指出a 6 ( I V ) N C l 同样具有抑制新牛疵管生成和肿瘤生长的活性，并将其命名为h e x a s t a t i n 。1 2H e x a s t a t i n 的结构血管荩底膜的组装依赖于型胶原蛋一网络的聚集。编码I v 型胶原蛋F L l 的共有6 种不同的荩冈。这些基因以头头相连的方式在3 种不同的染色体上成对排列。其中C O I A A l 和C O I A A 2 位于染色体1 3 q 3 4 上，C O L 4 A 3 和C O L 4 A 4 位于染色体2 q 3 6 上，而C O I A A 5和C O L 4 A 6 位于性染色体x q 2 2 上1 1 5 。C O L 4 A 6 表达 基金项目 天津市自然科学基金资助项目( N o 0 4 3 6 1 0 2 1 1 ) 。S u p -p o r t e db yt h eN a t i o n a lN a t u r a lS c i e n c eF o u n d a t i o no fT i a n j i n ( N o 0 4 3 6 1 0 2 1 1 ) 作者简介温镭( 1 9 8 4 一) 女，四川乐山人，硕士研究生，主要从事肿瘤新，E 血管生成抑制剂的分子生物学研究通信作者( C o r r e s p o n d i n ga u t h o r ) 。E m a i l ：h a l i n 9 7 0 2 0 0 0 y a h o o c o l I Lc n万方数据- 5 3 8 中国肿瘤生物治疗杂志。2 0 0 9 年1 0 月，1 6 ( 5 )的面链单体由3 个区域组成：含2 1 个氨基酸残基的N 端7 s 区信号肽，14 1 7 个氨基酸的中间胶原区以及2 2 8 个氨基酸的C 端非胶原区N C l 。H e x a s t a t i n 便是d 6 ( ) 链的非胶原区N C l ，它的相对分子质量约为2 50 0 0 。通过与型胶原蛋白的其它链进行同源性比对后发现，H e x a s t a t i n 与a 2 ( I V ) N C I 及甜( I V ) N C l最具有相似性。另外，Z h o u 等1 16 J 指出面( ) 链在第4 2 7 、5 1 5 、5 1 6 、5 5 8 、9 4 5 和10 9 7 位氨基酸的位置，分别存在1 个R G D 、2 个G R D 及3 个G D R 序列，它们都很可能是细胞结合位点。1 3H e x a s t a t i n 的分布基底膜是由细胞外基质分子所形成的特殊网络，它对多细胞动物的发育起着重要作用。除了能提供结构支持，还具有调节细胞活动的作用。H e x a s t a t i n 不像o t l ( 1 V ) 和以( I V ) 链分布那样广泛，后者几乎出现在所有组织的基底膜中，H e x a s t a t i n 多与Q 5 ( ) 链形成 击( ) ：嘶( ) 三聚体，分布具有组织特异性。它主要分布在乳腺管及小叶基膜、皮肤表皮及皮肤附属物基膜、前列腺基膜、平滑肌细胞、膀胱上皮基膜以及消化道上皮基膜中捌1 。在正常人肾组织中，H e x a s t a t i n 的分布局限在某些部位，它不存在于肾小球基底膜中，而存在肾鲍氏囊基底膜中。而有趣的是击( ) 链却在肾小球基底膜中含量丰富，这表明了h e x a s t a t i n 和面( ) 链并不一定在所有组织中共同表达懈1 。2H e x a s t a t i n 的生物活性2 1 抑制血管生成内皮细胞的增殖和迁移对于新生血管的形成是至关重要的。增殖细胞表面受体整合素分子a 。B ，已在很多动物模型中被证实能调节新生血管生成，内皮细胞与特殊的仅。B ，结合位点之间的相互作用，对于体内的血管生成起到了调节作用。P e t i t c l e r c 等1 指出h e x -a s t a t i n 不是靠典型的R G D 三肽结构与d 。1 3 ，相识别，而是借助一种R G D 非依赖的仅。1 3 ，结合位点。H e x a s t a t i n能通过特殊的d ，B ，整合素依赖途径，调节内皮细胞的黏附和迁移，起到显著的抑制血管生成的作用。P e t i t c l e r c 在研究中用b F G F 刺激鸡胚绒毛膜的血管生成，2 4h 后注入定鼍的莺组h e x a s t a t i n 蛋白，结果发现h e x a s t a t i n 能抑制8 0 9 0 的血管形成。K a r a g i a n n i s等刮在研究h e x a s t a t i n 对人脐静脉内皮细胞迁移的影响中发现，相比加入V E G F 的对照组，H e x a s t a t i n 能抑制9 0 的细胞迁移，并且其活性呈现出双阶段的效应，在一个中间浓度时h e x a s t a t i n 的活性最高，以后随着浓度的升高，活性又逐渐降低。同样，在血管生成的过程中，内皮细胞的增殖也被认为是新生血管形成所必须的。M u n d e l 等4 1 发现，H e x a s t a t i n 能剂量依赖性地抑制内皮细胞的增殖，其抑制经1 0 血清刺激的小牛肺动脉内皮细胞的半数有效剂鼍( E D ) 为5 斗g m l ，人脐静脉内皮细胞的增殖也能被剂量依赖性抑制。另外，在正常C 5 7 8 1 6 小鼠中进行的M a t r i g e l 栓子试验中，在b F G F 存在的情况下，浓度为1m s k g 的h e x a s t a -t i n 使得血管的数量减少了5 0 。2 2 抑制肿瘤生长和转移在对h e x a s t a t i n 抑制实体瘤生长的研究中，P e t i t c l e r c 旧1 等将C S I 黑素瘤的单细胞悬液引入鸡胚绒毛膜，2 4h 后注入h e x a s t a t i n ，结果发现h e x a s t a t i n 能有力地( 大约6 0 ) 抑制C S l 黑素瘤细胞的生长。在已建立的肿瘤小鼠模型中，相比安慰剂而言，H e x a s t a t i n 能抑制小鼠肺癌移植瘤生长，这种肿瘤生长的抑制效应与肿瘤组织中微脉管密度的显著减少是相关的“。另外，研究羽。发现在癌细胞浸润过程中，a 6 ( I V ) 经常会在癌细胞巢穴周围的基底膜区域中缺失，而拍( I V ) 阴性的肿瘤患者比拍( I V ) 阳性患者的无瘤存活期及总存活期显著地缩短。B a b a 等指出，在胃黏膜下肿瘤中，仅6 ( ) 与击( I V ) 链的表达水平与肿瘤组织学上的非典型等级密切相关，a 6 ( I V ) 与d 5 ( ) 链的缺失与肿瘤细胞的生长活性存在重要的联系，可以作为胃黏膜下肿瘤发生癌变的诊断指标。另外，研究1 发现面( I V ) 与西( I V ) 链还可能作为判断食管鳞状上皮细胞癌患者肿瘤特征的有用指标，起到提前预警的作用。实验采用s i R N A 的方法，从转录水平下调了食管癌T E l 3 中a 6 ( I V ) 的表达量，结果发现肿瘤细胞的浸润量相比对照组有少量但不可忽略的增加。S k o v b j e r g 等1 在研究中发现，a 6 ( I V ) 在结肠癌组织中的m R N A 含量相比正常组织减少了5 倍，并认为面( ) 含量的下调可能是肿瘤组织获得浸润性的重要因素。3H e x a s t a t i n 的作用机制H e x a s t a t i n 的抗瘤活性部分是依赖其抗血管生成活性而完成的，然而有报道瞄1 称h e x a s t a t i n 也能直接作用于肿瘤细胞上，阻断肿瘤细胞中N C I 区的相互作用。目前对h e x a s t a t i n 作用机制的研究在不断深入，已知的主要有以下几方面：( 1 ) H e x a s t a t i n 通过R G D 非依赖方式与细胞表面受体整合素分子a ，B ，结合发挥作用。整合素家族细胞表面受体主要介导细胞与细胞、细胞与胞外基质之间的相互黏附，并介导细胞与胞外基质之间的双向信号转导，对细胞的黏附、增殖、分化、转移和凋亡起着重要的调控作用。在血管生成阶段，内皮细胞必须互相黏附并与胞外摹质黏附以构成并扩充新生微血管，其间整合素分子起着重要的桥梁作用。H e x a s t a t i n 与整合素分子的结合可中断内皮细胞或肿万方数据温镭，等新型肿瘤血管生成抑制剂H e x a s t a t i n 的研究进展5 3 9 瘤细胞与基底膜之间的信息联系，引起内皮细胞或肿瘤细胞的凋亡，从而抑制新生血管的形成。有研究汹3 1 1 表明，肿瘤抑素 ( ) N C I 与a ，B ，的结合可抑制F A K 、P 1 3 K 、P K B A K T 信号通路的活化，H e x a s t a -t i n 是否也通过类似的分子机制发挥作用，目前仍需要实验证实。( 2 ) 基底膜的屏障作用。基底膜能作为一个阻挡上皮癌细胞入侵的生理屏障，基底膜结构的破坏被认为是癌细胞入侵和转移的第一步。在基底膜结构中含有西( I V ) a 6 ( I V ) 链，它们在癌细胞巢穴周围形成了一个生理屏障，阻挡癌细胞的浸润。由于击( I V ) a 6 ( I V ) 链被认为与基底膜的机械压力及张力密切相关，具有稳定基底膜结构中型胶原网络的作用，因此，面( I V ) 链的缺失使得基底膜成为了不稳定的屏障，从而导致癌细胞的早期浸润删。至于c t 6 ( ) 链在癌细胞巢穴周围基底膜中缺失的具体机制，现在仍无定论，有研究啪- 指出其基因启动子区域的超甲基化是导致o r 6 ( I V ) 链丢失，进而引起癌细胞浸润中基底膜重塑的重要原因，也有研究认为这是癌细胞调节作用的结果。4H e x a s t a t i n 的应用前景F o l k m a n 一1 早在1 9 7 1 年便提出了实体瘤的抗血管疗法，通过抑制肿瘤新生血管生成，使肿瘤细胞因缺血、缺氧而大部分死亡。近些年来，人们将研究的热点集中在寻找安全有效的血管生成抑制剂上，成效也很突出，先后发现了内皮抑素、a r r e s t e n 、血管能抑素和肿瘤抑素等多种胶原来源的血管抑制剂，其中内皮抑素率先通过了临床研究，并于2 0 0 5 年9 月1 2 日在我国获准上市。H e x a s t a t i n 作为型胶原的c t 6 链的N C l区，同样已被研究证实具有抑制新生血管生成和抗肿瘤的活性。由于面链在多种实体瘤浸润早期都出现了丢失的情况，这使得有关研究较少，目前仍有许多需要进一步探究的问题，诸如其足否也像肿瘤抑素一样存在多个活性域，其抑制血管生成的具体分子机制足什么，以及它与其它同源的血管生成抑制剂活性大小有何差异等。相信随着研究的深入，人们会一步步揭开h e x a s t a t i n 的神秘面纱，为肿瘤的抗血管疗法提供新途径。 参考文献 1 F o l k m a nJ A n g i o g e n e s i si nc a n c e r ，v a s c u l a r ，r h e u m a t o i da n do t h e rd i s e a s e J N a tM e d ，1 9 9 5 ，1 ( 1 ) ：2 7 - 3 1 2 F o l k m a nJ A n g i o g e n e s i s d e p e n d e n td i s e a s e s J S e m i nO n c o l ，2 0 0 1 ，2 8 ( 6 ) ：5 3 6 - 5 4 2 3 C a r m e l i e tP ，J a i nR K A n g i o g e n e s i si nc a n c e ra n do t h e rd i s e a s e s J N a t u r e ，2 0 0 0 ，4 0 7 ( 6 8 0 1 ) ：2 4 9 - 2 5 7 4 J a i nR K ，C a r m e l i e tP F V e s s e l so fd e a t ho rl i f e J S c iA m ，2 0 0 1 ，2 8 5 ( 6 ) ：3 8 4 5 5 H a n n a hD ，W e i n b e r gR A 1 1 l eh a l l m a r k so fc a n c e r J c e n ，2 0 0 0 ，1 0 0 ( 1 ) ：5 7 - 7 0 6 V o l p e r tO V ，P i l iR ，S i k d e rH A 。e ta LI d lr e g u l a t e sa n g i o g e n e s i st h r o u g ht r a n s c r i p t i o n a lr e p r e s s i o no ft h r o m l x 镕p o n d i n l J C a n c e rC e l l ，2 0 0 2 ，2 ( 6 ) ：4 7 3 - 4 8 3 7 B e r g e r sG ，B e j a m i nL E T u m o r i g e n e s i sa n dt h ea n g l o g e n i cs w i t c h J N a tR e vC a n c e r ，2 0 0 3 ，3 ( 6 ) ：4 0 1 - 4 1 0 8 M u n d e lT M ，K a l l u r iR T y p eI Vc o l l a g e n d e r i v e da n g i o g e n e s i si n -h i b i t o m J M i c m v a s eR e s ，2 0 0 7 ，7 4 ( 2 - 3 ) ：8 5 - 8 9 9 F o l k m a nJ T u m o ra n g l o g e n e s i s ：t h e r a p e u t i ci m p l i c a t i o n s J NE n 垂JM e d ，1 9 7 1 ，2 8 5 ( 2 1 ) ：1 1 8 2 一1 1 8 6 1 0 B a u e rA L ，J k s o nT L ，J i a n gY T o p o g r a p h yo f e x t r a e e l l u l u rm a t r i xm e d i a t e sv a s e u l a rm o r p h o g e n e s i sa n dm i g r a t i o ns p e e d si na n g i o g e n -e s i s J P L o SC o m p u tB i o l ，2 0 0 9 ，5 ( 7 ) ：e 1 0 0 0 4 4 5 11 A s s a d i a nS ，T e e d o r eJ G R e g u l a t i o no fe o l l n g e n - d e r i v e da n t i a n g i o -g e n i ef a c t o r sb yp 5 3 J E x p e r tO r l i nB i o ln e r ，2 0 0 8 ，8 ( 7 ) ：9 4 l 一9 5 0 1 2 Z h o uJ ，M o c h i z u k iT ，S m e e t sH ，e ta 1 D e l e t i o no ft h ep a i r e da s( I V ) a n da 6 ( ) o o l l n g e ng e n e si ni n h e r i t e ds m o o t hm u s e l et u m o m J S c i e n c e ，1 9 9 3 ，2 6 1 ( 5 1 2 5 ) ：1 1 6 7 一1 1 6 9 1 3 K a r a g i a n n i sE D ，P o p e lA S I d e n t i f i c a t i o no fn o v e ls h o r tp e p t i d e sd e r i v e df r o mt h ea 4 ，硒，a n da 6f i b r i l so ft y p e1 Vc o l l a g e nw i t ha n t i a n g i o g e n i cp r o p e r t i e s J B i o c h e mB i o p h y sR e sC o m m u n ，2 0 0 7 ，3 5 4 ( 2 ) ：4 3 4 - 4 3 9 1 4 M u n d e lT M 。Y l i n i e m iA M ，M a e s h i m aY ，e td LT y p eI Vc o l l a g e na 6c h a i n d e r i v e dn o n c o l l n g e n o u sd o m a i nl ( 面( I V ) N C I ) i n h i b -i t sa n g i o g e n e s i sa n dt u m o rg r o w t h J I n tJC a n c e r ，2 0 0 8 ，1 2 2( 8 ) ：1 7 3 8 1 7 4 4 1 5 S u g i m o t oM ，O o h a s h iT ，N i n o m i aY 1 1 l eg e n e sC O L 4 A 5a n dC O I A A 6 c o d i n gf o rt h eb a s e m e n tm e m b m n ec o l l a g e nc h a i n so L 5( ) a n da 6 ( 1 V ) ，a l o c a t e dh e a d t o h e a di ne l e s ep r o x i m i t yo nh u m a ne h r e m eX q 2 2a n dC O L 4 A 6i st r a n s c r i b e df r o mt w oa l t e r n a t i v ep r o m o t e r s J P r o cN a i lA e a dS c iUSA ，1 9 9 4 ，9 1( 2 4 ) ：1 1 6 7 9 一1 1 6 8 3 1 6 Z h o uJ ，D i n gM ，Z h a oZ H ，e ta C o m p l e t ep r i m a r ys t r u c t u r eo ft h es i x t hc h a i no fh u m a nb m s e m e n tm e m b r a n ec o l l a g e n 。a 6 ( I V ) I s o l a t i o no ft h ec D N A sf o ra 6 ( ) a n dc o m p a r i s o nw i t hf i v eo t h e rt y p eI Vc o l l a g e nc h a i n s J JB i o lC h e m 1 9 9 4 ，2 6 9 ( 1 8 ) ：1 3 1 9 3 一1 3 1 9 9 1 7 S i m o n e a uA ，H e r r i n g G i l l a mF E ，V a t h o nP H ，e ta 1 I d e n t i f i e a -t i o n ，d i s t r i b u t i o n ，a n dt i s s u l a ro r i g i no ft h e 击( I V ) a n da 6 ( I V )c o l l a g e nc h a i n si nt h ed e v e l o p i n gh u m a ni n t e s t i n e J D e vD y n ，1 9 9 8 ，2 1 2 ( 3 ) ：4 3 7 - 4 4 7 1 8 B o r z aD B ，B o n d a rO ，N i n o m i y aY ，e ta T h eN C Id o m a i no fc o l -l a g e nI Ve n c o d e san o v e ln e t w o r kc o m p o s e do ft h ea l ，a 2 ，西，a n da 6c h a i n si ns m o o t hm n s e l eb a s e m e n tm e m b r a n e s J JB i o lC h e m ，2 0 0 1 ，2 7 6 ( 3 0 ) ：2 8 5 3 2 - 2 8 5 4 0 1 9 S a t oH ，N a i t oI ，M o m o t aR ，e ta L ，1 1 I ed i f f e r e n t i a ld i s t r i b u t i o no ft y p eI Vc o l l a g e ndc h a i n si nt h es u b e p i t h e l i a lb a s e m e n tm e m b r a n eo ft h eh u m a na l i m e n t a r yc a n a l J A r c hH i s t o lC y t o l ，2 0 0 7 。7 0( 5 ) ：3 1 3 - 3 2 3 2 0 H a s e g a w aH ，N a i t oI ，N a k a n oK ，e ta n ed i s t r i b u t i o n so ft y p e万方数据中国肿瘤生物治疗杂志，2 0 0 9 年1 0 月，1 6 ( 5 )I Vc o l l a g e no tc h a i n si nb a s e m e n tm e m b m n e so fh u m a ne p i d e r m i sa n ds k i na p p e n d a g e s J A r c hH i s t o lC y t o l ，2 0 0 7 ，7 0 ( 4 ) ：2 5 5 2 6 5 2 1 O k aY ，N a i t oI ，M a n a l 】eK ，e ta C o l l a g e nt y p e1 Va n dh u m a nc o l o r e c t a lc a n c e r D i s t r i b u t i o no fc o l l a g e nt y p eI Vc d - 6c h a i n si nh u m a nn o r m a lc o l o r e c t u ma n dc o l o r e c t a lc a n c e rd e m o n s t r a t e db yi m m u n o f l u o r e s c e n e es t a i n i n gu s i n gc h a i n - s p e c i f i ce p i t o p e - d e f i n e dm o n o c l o n a la n t i b f M i e s J JG a s t r o e n t e r o lH e p a t o l ，2 0 0 2 ，1 7( 9 ) ：9 8 0 - 9 8 6 2 2 P e i s s e lB ，G e n gL ，K a l l u r i R ，e ta 1 C o m p a r a t i v ed i s t r i b u t i o no ft h ea l ( I V ) ，a 5 ( ) ，a n da 6 ( 1 V ) c o l l a g e nc h a i n si nn o r m a lh u m a na d u l ta m lf e t a lt i s s u e sa n di nk i d n e y sf r o mX l i n k e da l p o r ts y n d r o m ep a t i e n t s J JC l i nI n v e s t ，1 9 9 5 ，9 6 ( 4 ) ：1 9 4 8 1 9 5 7 2 3 P e t i t c l e r eE ，B o u t a u dA ，P r e s t a y k oA ，e ta 1 N e wf u n c t i o n sf o rn o n - c o U a g e n o u sd o m a i n so fh u m a nc o l l a g e n ：t y p eI Vn o v e li n t e g r i nl i g a n d si n h i h i t i n ga n g i o g e n e s i sa n dt u m o rg r o w t hi nv i v o J JB i o lC h e m ，2 0 0 0 ，2 7 5 ( 1 1 ) ：8 0 5 1 - 8 0 6 1 2 4 B a b aY ，I y a m aK ，I k e d aK ，e ta 1 D i f f e r e n t i a le x p r e s s i o no fb a s e m e n tm e m b r a n et y p eI Vc o l l a g e ndc h a i n si ng a s t r i ci n t r a m u c e s a ln e o p l a s t i cl e s i o n s J JG a s t r o e n t e r o l ，2 0 0 7 ，4 2 ( 1 1 ) ：8 7 4 8 8 0 2 5 B a b aY ，I y a m aK ，I k e d aK ，e ta 1 r 1 1 1 ee x p r e s s i o no f t y p eI Ve o l l a -g e na 6c h a i ni sr e l a t e dt ot h ep r o g n o s i si np a t i e n t sw i t he s o p h a g e a ll u a m o u sc e l lc a r c i n o m a J A n nS u r gO n c o l ，2 0 0 8 ，1 5 ( 2 ) ：5 5 5 - 5 6 5 2 6 I k e d aK ，l y a m aK ，l s h i k a w aN ，e t0 2 k o fe x p r e s s i o no ft y p eI Vc o l l a g e n 晒a n d 面c h a i n si nc o l o r e c t a lc a n c e ra s s o c i a t e d w i t ht h eh y p e r m e t h y l a t i o no ft h e i rp r o m o t e rr e g i o n J A mJP a t h o l ，2 0 0 6 ，1 6 8 ( 3 ) ：8 5 6 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