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药物含量测定概述 第一节概述药品的含量测定是指准确测定药品有效成分或指标性成分的含量 含量测定是评价药品质量 判断药物优劣和保证药品疗效的重要手段 含量测定需在鉴别无误和杂质检查符合规定的基础上进行 除个别品种不收载含量测定外 原则上均按药品质量标准进行含量测定 应根据所测成分的物理化学性质选择相应的测定方法 测定药物含量的方法 1 容量分析法 仪器设备简单 易于操作 不需要使用化学对照品 成本低 速度较快 其准确度和精密度都较高 2 仪器分析法 当组分复杂 干扰成分较多难于用容量分析法测定含量时 选用专属性较高的仪器分析方法 第二节原料药的含量测定 一 选用原则 根据药物的化学结构 理化性质和使用该药物生产制剂剂量等特点综合考虑适宜的含量测定法 选用的含量测定法应能准确测试有效成分的含量 并应具有一定的分辨力 专属性 稳定性和灵敏度 其准确度和精密度均高 二 常用方法 一 容量分析法 首选 1 非水溶液滴定法和酸碱滴定法 如氨基酸类 有机碱及其盐类2 醇溶液或水溶液中的银量法 如胆茶碱 泛影酸 氯化钠 异戊巴比妥钠 苯巴比妥等原料药 3 碘量法 如维生素C 安乃近等4 亚硝酸钠法 如对氨基水杨酸钠 盐酸普鲁卡因 苯佐卡因等 5 铈量法和高锰酸钾法 如硝苯地平 尼群地平的含量测定选用铈量法 硫酸亚铁 亚硝酸钠等选用高锰酸钾法 6 配位滴定法 如葡萄糖酸钙 泛酸钙 硫糖铝等 7 碘酸钾法 碘化钠 碘化钾 卡托普利的含量测定 二 其它化学分析法 次选1 重量分析法 如顺铂的含量测定和磺溴酞钠中硫的含量测定 2 氮测定法 如尿素 扑米酮 吡嗪酰胺等原料药的含量测定 三 仪器分析方法1 紫外 可见分光光度法 UV 用于分子结构中含有共轭体系结构 苯环或杂环的药物在紫外光区有特征吸收光谱 可在近紫外光区进行分光光度分析 有色药物或与显色剂反应后在可见区有特征吸收的药物 可选用可见分光光度法测定含量 2 色谱法 1 高效液相色谱法 HPLC 用于杂质或干扰因素较多的品种的含量测定 优点 分离效能高 分离速度快 应用范围广 流出组分容易收集 2 气相色谱法 GC 如维生素E的含量测定 5 含量测定法应能适用于含量均匀度和溶出度的共同应用 三种测定尽可能用相同的溶剂 6 2000年版药典规定复方制剂的含量测定 若不能直接采用吸收系数法 而又无其它适宜方法时 也可用合适的计算分光光度法 对于含三个或三个以上组分的制品不宜选用此法 2010年版药典规定 计算分光光度法一般不宜用作含量测定 7 对于所含杂质或赋形剂干扰含量测定 需先经繁杂的分离才能测定 或各成分间互相干扰的制剂或复方制剂 可选用HPLC法 2010年版药典大量采用了HPLC法 第三节制剂的含量测定 一 选用原则 1 可能时应选用与原料药相同的测定方法 一般首选容量分析法 2 共存药物 辅料 附加剂有干扰时 可考虑增加预处理或改进方法 排除干扰后用原料药的测定方法 3 制剂生产中新出现的降解产物有干扰时 可选用专属性较高的方法 4 主药含量很小的制剂可选用灵敏度较高的方法 可用UV法或HPLC法 但用UV法时应避免溶剂或降解产物的干扰 选用的波长应具有合适的峰形和吸收 吸收系数在100以上 应尽量减少使用有机溶剂 尤其避免使用有毒害作用的溶剂 二 共存成分无干扰时常用的含量测定方法 当共存成分无干扰时 应选用与原料药相同的测定方法 测定之前必须对制剂进行处理 用物理方法将辅料除去 如片剂可先溶解 滤过 取续滤液进行实验 或将滤液蒸干 用溶剂溶解后 再测定 或经提取分离并经干燥后才进行测定 共存成分无干扰时常用的含量测定方法分三类 一 容量分析法 如阿司匹林片等含量测定选用测定原料药的酸碱滴定法 盐酸美西律片选用测定原料药的非水溶液滴定法 苯巴比妥片剂选用测定原料药的银量法 维生素C制剂含量测定选用原料药的碘量法 对氨基水杨酸钠制剂选用原料药的亚硝酸钠法永停法指示终点测定含量 右旋糖酐铁片剂与原料药一样采用高锰酸钾法测定含量 二 仪器分析法 中国药典 2010年版 二部 中制剂与原料药的含量测定选用同一种仪器分析法的药物很多 如酞丁安制剂 水杨酸镁制剂用UV法中的对照品比较法测定含量 与原料药一致 柳氮磺吡啶制剂 维生素B2制剂还是采用与其原料药一致的吸收系数法测定含量 维生素A胶丸 维生素AD胶丸 维生素AD制剂中维生素A的含量测定与原料药一样 均用三点校正法测定 头孢菌素类 青霉素类和维生素B6的制剂与原料药相同 均采用HPLC法测定含量 维生素E制剂与原料药一样选用GC法测定含量 三 其他分析法 如注射用顺铂 磺溴酞钠中注射液的含量测定与其原料药均选用重量法 扑米酮片剂的含量测定与原料药均选用氮测定法 当原料药未收载含量测定法时 其制剂可选用特有的物理性质进行测定 如谷氨酸钠 钾 的含量测定 右旋糖酐20 40 70 的含量测定选用旋光度测定法 三 共存成分有干扰时常用的含量测定方法当制剂的共存成分对药物的含量测定有干扰 不能沿用原料药的含量测定方法时 则应另选合适的测定方法 以消除共存成分的干扰 其主要方法有 第四节药物的含量计算 一 原料药的含量计算 一 计算公式原料 测得重 g 供试品重 g 100 mx ms 100 式中mx供试品的测得量 g ms供试品的质量 g 原料药的含量计算公式因所用方法不同而有区别 一 离子对双相滴定法 中国药典 2010年版 二部 中盐酸胺碘酮 盐酸苯海索 盐酸氯丙钠林 联苄唑和硝酸益康唑等5种药物的制剂辅料对非水溶液滴定法测定含量有干扰 改用离子对双相滴定法 二 辅料无吸收 主药有特征吸收的制剂选用UV法 UV法具有一定的专属性 其准确度和精密度均较高 当制剂测定不能选用原料药的化学测定方法 而该药物在紫外光区又有特征吸收时 则首选UV法 三 在紫外 可见区没有特征吸收峰的可选用HPLC法 对制剂中主药含量很少 又容易产生降解物 分离困难的品种 可选用HPLC法 先用色谱法进行分离 然后再进行测定 中国药典 2010年版 二部 中大量采用HPLC法测定制剂的含量 部分制剂应用二元梯度洗脱法 可同时测定样品中的多种成分 达到整体控制药品质量的目的 二 容量分析法 直接滴定法原料 TVF ms 100 F C实测浓度 mol l C规定浓度 mol l 式中T滴定度V滴定液的体积 mlms供试品的质量F所用滴定液的浓度与药典规定不同时的校正系数例题 非那西丁含量测定 精密称取本品 3630g加稀盐酸回流 h后 放冷 用亚硝酸钠液 1010mol L 滴定 用去 00ml 每1ml亚硝酸钠液 0 1mol L 相当于17 92mg的C10H13O2N 计算非那西丁的百分含量 剩余滴定法原料 T V0 V F msX100 或原料 T V V0 F msX100 例题 尼可刹米的含量测定 精密称取本品 g 加冰醋酸10ml与结晶紫指示液 滴 用高氯酸滴定液 0 1026mol L 滴定 至溶液显蓝绿色 消耗高氯酸滴定液8 31ml 并将结果用空白实验校正 空白实验消耗高氯酸滴定液0 05ml 每1ml高氯酸滴定液 0 1mol L 相当于17 82mg的C10H14N2O 计算尼可刹米的含量 三 紫外 可见分光光度法1 对照品比较法原料 CR Ax AR DV msX100 式中CR对照品溶液的浓度 AX供试品溶液的吸光度 AR对照品溶液的吸光度 D稀释倍数V溶液体积 2 吸收系数法原料 A 1 E L DV ms 100 式中A吸光度E吸收系数L液层厚度 1cm例题 卡比马唑的含量测定 精密称取本品0 0512g 置500ml的容量瓶中 加水使溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取10 0ml 置100ml的容量瓶中 加盐酸溶液 9 1000 10ml 用水稀释至刻度 摇匀 照紫外 可见分光光度法 在292nm波长处测得吸光度为0 555 按C7H10N2O2S的吸收系数 E 为557 计算卡比马唑的含量 四 色谱法 GC法和HPLC法 内标法加校正因子法 1 系统适用性试验理论板数n 5 54 tR Wh 2 2分离度R 2 tR2 tR1 W1 W2 校正因子f As Cs AR CR 含量测定原料 f Cs Ax As Cx 100 例题 按 中国药典 2010年版 二部 的规定测维生素E 做系统适用性实验时的数据为 物质tR minWh 2 minW min对照品8 880 250 6内标物5 740 61 2取维生素E对照品20 80mg 98 0 精密加入浓度为1 044mg ml的内标物 正三十二烷 溶液10 00ml溶解 取 ul注入气相色谱仪 对照峰面积为481763 内标物峰面积为238787 求维生素E的理论板数 维生素E与内标物的分离度和校正因子各为少 再精密称取维生素E供试品22 68mg 内标物28 00mg 用气相色谱法测得供试品峰面积为529887 内标物峰面积为644911 计算供试品中维生素E的含量 例题 贝诺酯的含量测定 精密称取本品0 07495g 置100ml容量瓶中 加无水乙醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量1 0ml 置另一100ml容量瓶中 加无水乙醇稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 照紫外 可见分光光度法 在240nm的波长处测得吸光度为0 473 另取经105 干燥2h的贝诺酯对照品0 03667g 置100ml容瓶中 加无水乙醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取1 0ml 置50ml容量瓶中 加无水乙醇稀释至刻度 摇匀 测得吸光度为0 462 计算贝诺酯的含量 2 外标法原料 CRAx AR CxX100 例题 用高效液相色谱法外标法测定头孢拉定含量时 取头孢拉定为94 1 和头孢氨苄为2 3 的对照品35 35mg溶解定容为50ml 取10ul注入高相色谱仪 测得头孢拉定峰面积为13842558 头孢氨苄的峰面积为354934 另称取头孢拉定供试品35 88mg 溶解定容为50ml 取10ul注入高相色谱仪 测得头孢拉定峰面积为14158286 头孢氨苄的峰面积为472368 按供试品的总量分别计算头孢拉定和头孢氨苄的百分含量 3 面积归一化法A总 Ai A1 A2 An Ai A总 100 例题7用气相色谱法检查大豆油的脂肪酸组成 相应于棕榈酸 硬酯酸 油酸 亚油酸和亚麻酸的峰面积分别为129758 43286 296522 654868 92570 按峰面积归一化法 计算上述脂肪酸的百分含量 二 制剂的含量计算制剂的含量按标示百分含量表示 主要讨论片剂和注射剂的含量测定 标示量 实测含量 标示量 100