立白洗洁精诱发蚕豆根尖细胞微核试验的研究.docx

两种洗洁精诱发蚕豆根尖细胞的诱变作用温远香 08科六 20082501100（华南师范大学生命科学学院 广东广州 510631 ）摘要： 为研究洗洁精的遗传毒性和潜在的危害提供细胞遗传学依据，采用蚕豆根尖细胞微核技术,研究不同浓度立白以及雕牌洗洁精的细胞遗传学效应。结果表明, 实验组两种不同浓度洗洁精均能强烈诱发蚕豆根尖细胞产生染色体畸变和微核，同时处理组微核率以及染色体畸变率与对照组差异显著。在一定含量范围内，微核率随洗洁精含量的升高而增大；同时立白洗洁精的诱变性大于雕牌洗洁精。关键词：蚕豆 洗洁精 细胞微核 染色体畸变随着日用化学工业的发展和人民生活水平的提高, 各类洗涤剂相继问世,其使用范围越来越广，在人们的生活中占有越来越重要的位置。人工合成的洗涤剂成本低、去污力强、种类多，主要分为阳离子型、阴离子型和非离子型3 类(其中阴离子型表面活性剂使用频率最高) 1 。但是，洗涤剂可通过皮肤渗透到血液中,导致人体血液中Ca2 + 含量下降以及细胞染色体畸变2 。此外,含合成洗涤剂的废水排入水体后,将影响水生生物的生长,并致水体富营养化,从而破坏水环境质量和水生生态系统的平衡。蚕豆根尖微核技术是由Degrassi 等研究人员建立的。微核的形成是细胞受诱变剂作用后的一种遗传学终点3 。分析研究洗洁精可能存在的遗传危害, 评价其诱变活性已引起人们的重视. 本实验选用不同浓度的立白洗洁精溶液对蚕豆根尖进行染毒, 测定蚕豆根尖细胞中出现的微核. 以此分析洗涤剂和微核率的关系, 从而判断洗涤剂诱变活性的大小及两种洗涤剂危害的比较, 以期对洗涤剂的遗传安全性评价提供更可靠的资料.1. 材料与方法1.1实验材料：蚕豆种子1.2供试洗涤剂： 实验组的浓度分别为100mg/L、250mg/L、500 mg/L、1000 mg/L的立白和雕牌洗洁精溶液，调节酸碱度使其pH为7-85。以蒸馏水作为对照组。 1.3试验方法：处理方法：选取大小均一、籽粒饱满的蚕豆种子用清水浸泡在培养皿，置于27恒温箱中催芽,每隔6h换一次水；待蚕豆胚根长至1-1.5cm时选出，随机分为9组（每组5粒），分别浸泡在各实验组和对照组溶液中，置于25恒温培养箱中24h后，期间观察蚕豆颜色和根尖形态的变化，结束后水洗恢复培养24h。 制片及镜检：取根尖用卡诺氏固定液固定24h，用95%的酒精漂洗后，用蒸馏水漂洗3次，然后将根尖置于1N的盐酸60摄氏度的水浴中酸解10-15min；之后用蒸馏水漂洗3次，每一次2min，用改良品红染色1520min，压片；每组镜检5条根尖，每个根尖在高倍镜（10*40）下计数1000个左右的细胞。计数原则：镜检时将观察到细胞质中有独立于主核,直径小于主核1/201/3,完全与主核分开的圆形或椭圆形的微小核判断为微核。它可以是整条染色体,也可以是染色体断片,染色性与主核保持一致。该试验将未与主核完全分开但有分开趋势的微小核,以及细胞处在分裂期时未形成微核的染色体断片也按微核计算,具有双微核和多个微核的细胞则按单微核细胞计算。1.4 数据处理：微核细胞千分率/ = (样品检出的微核细胞数/ 样品检查的细胞数) 1000 染色体畸变率2 结果与分析2.1 洗洁精对蚕豆根尖染色体的影响 A.多微核 B.多桥（后期） C.落后染色体+微核（间期） D.微核+多桥 D.环状染色体+微核 E.微核（末期） F.多桥+染色体断片 图1 洗洁精对蚕豆根尖细胞染色体的影响不同含量、不同种类的洗洁精处理蚕豆根尖后,可以诱导染色体的变异，经过镜检可以观察到多种染色体异常的情况,主要包括有多桥、单桥，微核、落后染色体、染色体断片、多微核，镜检过程中可以知道微核出现在细胞有丝分裂的不同时期。2.2 洗洁精对根形态的影响不同含量、不同种类的洗洁精处理蚕豆根尖之后，蚕豆表皮以及根尖颜色和形态都发生了变化，蚕豆根尖变黑、变软的主要原因是经高含量洗洁精处理后,细胞发生脱水,从而导致根尖细胞死亡。蚕豆根尖细胞在低含量洗洁精中浸泡24h 后能够正常生长,并进行细胞有丝分裂,表明蚕豆根尖对洗洁精有一定的忍耐力。2.3 洗洁精对蚕豆根尖细胞微核率的影响表2 洗洁精对蚕豆根尖细胞微核率和有丝分裂指数的影响处理洗洁精的含量mgL-1观察的细胞数微核率/染色体畸变率%对照组010201.23.49立白10010308.34.65250102213.210613.51000108032.514.26雕牌10010084.32.4225010755.76.8550010326.97.24100010007.29.56从表格中可以知道不同含量、不同种类的洗洁精的微核率以及染色体畸变率明显高于对照组，说明1 刘雪伟,张江丽,王菲,等. 洗涤灵对蚕豆根尖细胞的遗传毒性J . 环境与健康杂志,2008 ,25 :241 - 243.2 许立红,陈加平. 用水