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文档简介
实验四 NK细胞活性测定 MTT比色法 脾脏是重要的免疫器官 内含T细胞 B细胞 NK细胞及巨噬细胞等多种免疫细胞 NK细胞在杀伤靶细胞时既不需要特异性抗体参与 也不需要抗原预先致敏的淋巴细胞 在抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用 原理 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶使外源性黄色的MTT还原成蓝紫色的Formazan结晶 并沉积在细胞里 而死细胞无此功能 处死小鼠 消毒取脾 去除结缔组织和脂肪组织 放入平皿 3mlHanks液 轻轻拉碎脾组织 制成脾细胞悬液 过200目滤网制成单细胞悬液 离心 1500转 分5min 弃去上清 用Hanks液洗涤2次 加入3mlHanks液 混匀 1500转 分5min 去上清 最后一次吸尽上清 加入1ml1640培养液 混匀 细胞计数 取细胞悬液20微升 加到含有380微升白细胞稀释液的Eppendorf管中 混匀 取适量细胞悬液 加入计数板中 在显微镜下计数 根据p53公示计算细胞数量 根据细胞数量 用1640完全培养基配成2 106 ml浓度的细胞悬液 1 小鼠脾细胞悬液的制备 2 靶细胞的制备 实验员准备 取对数生长期YAC 1细胞 Hanks液洗涤2次 计数 调整至2 105 ml 3 细胞毒试验 4 孵育二氧化碳培养箱孵育2小时 加10 lMTT 继续孵育2 3小时 5 测OD值弃上清 加150 l二甲亚砜 振荡10min 测OD值 1 实验组OD值 效应细胞对照
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