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文档简介
实验八丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用【目的】验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。【原理】琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸,脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝(MB)作为受氢体,亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白(MBH2)。丙二酸与琥珀酸分子结构相似,能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色消退的程度,可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制程度。【器材】试管及试管架、滴管、剪刀、研钵或20ml匀浆器、电热恒温水浴箱。【试剂】1. 0.1mol/L磷酸缓冲液(PH7.4)取0.1mol/L Na2HPO4溶液19ml和0.1mol/L NaH2PO4溶液81ml混合即可。2. 1.5% 琥珀酸钠溶液3. 1% 丙二酸钠溶液4. 0.02% 亚甲蓝溶液5.液状石蜡【操作】1. 取新鲜动物肌肉或肝5g左右,放入研钵,用剪刀将组织剪碎,然后加入10ml在冰箱中保存的PH7.4的磷酸缓冲液充分研磨均匀(或在匀浆器内进行匀浆,制备成20%匀浆液)。2. 取4支试管,编号,按下表操作:表3-11 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用加入物(滴)1234匀浆1010101.5%琥珀酸钠溶液101010201%丙二酸钠溶液101010蒸馏水2010200.02%亚甲蓝溶液101010103. 各管混匀后,各加少量液状石蜡覆盖在液体上,置37水浴中保温,随时观察各管颜色变化,并记录各管亚甲蓝褪色时间。【结果及分析】比较各管亚甲蓝褪色情况,并对实验结果进行分析。【思考题】1. 什么是竞争性抑制作用,
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