“黄鳝性逆转调控和苗种人工生态繁育与养殖技术研究”

“黄鳝性逆转调控和苗种人工生态繁育与养殖技术研究”总 结 报 告华中农业大学黄鳝性逆转调控课题组摘要：使用较低蛋白质含量为10%35%的饲料喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到21.06%36.51%,比适宜蛋白质含量为40%的雄性转化率提高了15.72%31.17%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。使用较高蛋白质含量为45%50%的饲料喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到87.18%95.21%,比适宜蛋白质含量为40%的雌性保持率提高了9.87%17.90%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了68%，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了高怀卵量的雌鳝。饲料中使用60mg80mg/kg戊酸雌二醇喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到78.62%80.24%,比对照组雌性保持率提高了23.79%26.34%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了71%，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了高怀卵量的雌鳝。饲料中使用80mg100mg/kg丙酸睾酮喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到61.34%69.38%,比对照组雄性转化率提高了782.59%898.27%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。网箱养殖条件下，雌性黄鳝初次性成熟年龄为1年左右。通过性逆转调控技术，可获得大批量繁殖雌雄鳝亲本。采用全网箱繁殖、孵化和育苗。网箱面积12m2，雌雄性比3:2/m2。经近千个网箱试验，平均每尾雌鳝获苗种125尾，最高达到200尾。苗种体重约2535g，体长约22.1130.12cm。采用人工苗种养殖商品鳝，成活率提高80100%（野生鳝最低为0%，一般为60%）。每平方米可获投入产出重量比1:6（kg），产值420元，利润168元。 关键词：性逆转调控；苗种人工生态繁育；人工生态养殖技术；黄鳝Abstract：The present studies showed that low dietary protein level 10%-35% could promote sex reversal in rice field eel at age 1, the conversion rate of male was 21.06%-36.51%, and improved 15.72% -31.17% compared with the conversion rate of male of female eel fed appropriate protein content 40%, promote the role of eel sex reversal, and the same batch of fish and eels spawn naturally fertilized females, obtained with functional male eel. The high dietary protein level 45%-50% could delay sex reversal in rice field eel at age 1, the retention rate of female was 87.18%-95.21%, and improved 9.87%-17.90% compared with the retention rate of male of female eel fed appropriate protein content 40%, delay the role of eel sex reversal, the brood amount increased 68%, and obtained the high brood amount female eel by naturally fertilized in the same batch of fish and females spawn. The retention ration of female could up to 78.62%-80.24% when the female eel fed the dietary with added 60-80 mg kg-1estradiol at age 1, improved 23.79%-26.34% compared with the retention ration of female of the eel fed the control dietary, delay the role of eel sex reversal, the brood amount increased 71%, and obtained the high brood amount female eel by naturally fertilized in the same batch of fish and females spawn. The conversion ration of male could up to 61.34%-69.38% when the female eel fed the dietary with added 80mg-100 mg kg-1 sterandryl at age 1, improved 782.59%-898.27% compared with the conversion ration of male of the eel fed the control dietary, promote the role of eel sex reversal, and the same batch of fish and eels spawn naturally fertilized females, obtained with functional male eel. The age of sex maturity of the eel was about 1 under the cage culture condition. A large quantity of eel breeding male and female parents had obtained by sex reversal regulation technology, and the breeding, hatching and cultivating in all-cage. Cage area was 1-2 m2, sex ratio was 3:2 per m2. We obtained the 125 female eel average after test in thousand cages, up to 200. Average weight about 25g to 35g, body length 22.11cm to 30.12cm. The survival rate of eel increased 80-100% by artificial breeding technique (wild eel 0%-60%). The input-output ratio of weight could up to 1:6 (kg) per square meter, the output value 420 yuan, profit 168 yuan. Key words: sex reversal regulation; artificial-ecological breeding techniques; artificial-ecological culture technology; Monopterus albus黄鳝（Monopterus albus Zuiew）俗称鳝鱼、田鳗，隶属于硬骨鱼纲、合鳃目、合鳃科、黄鳝属，在我国仅产一种。黄鳝是一种淡水穴居性鱼类，广泛分布于我国的江河、湖泊、平原性水库、沼泽、沟渠以及稻田中，生活在水体的底层。黄鳝补血、补气、除风湿等，具有一定药用价值。黄鳝体表光滑无鳞、无鳍，无鳔、无肌间刺，肉质鲜美，营养丰富，食用价值高。黄鳝具有特殊的呼吸功能，很能耐饥饿，有利于长途高密度活体运输，食用、加工很方便，是我国重要的养殖鱼类之一，目前，已出口到美国、韩国和日本等，经济价值高。近些年来，黄鳝栖息的自然生态环境随着工业废水、生活污水和人工使用农药、化肥、饲料等的污染，其野生资源逐渐减少。在资源不足的严峻情况下，黄鳝的市场价格上扬又刺激了人们滥捕加剧。加上人工养殖的鳝种95%以上来源于天然捕捞，故目前黄鳝的野生资源濒临枯竭。黄鳝肉嫩昧鲜，营养价值高，尤其是肉中含丰富的 DHA 和卵磷脂，经常食用具有补脑健身的功效。其价格近几年来一直在 5O元/kg左右的高位徘徊，高峰时达 80100 元/kg，具有很高的经济价值。目前，限制黄鳝产业发展的瓶颈问题主要是苗种供应短缺的问题。据调查和有关资料报道，国内外对商品黄鳝的需求量为300万吨以上，全国黄鳝苗种缺口在200亿尾以上。有些地区因苗种短缺，黄鳝养殖面积逐步萎缩。野生鳝苗经捕捞、储存、运输，其养殖成活率最低为0%，最高为60%，极不稳定。而解决苗种问题必须首先攻克其性逆转问题。黄鳝是典型的由雌经1年以上变为间性再转雄的性逆转鱼类，所以，雌性小，怀卵量少，雄性大，繁殖成本高，因此，黄鳝的苗种繁育一直没有过关。如果解决了黄鳝的性逆转问题，雌性个体变大，怀卵量大大提高，雄性个体变小，繁殖成本大大降低，200亿尾苗种短缺的问题和300万吨成鳝的市场供应问题就会迎刃而解了。本项目对黄鳝性逆转调控技术、苗种人工生态繁育技术和商品鳝人工生态养殖技术进行了较为详细的研究，旨在为解决黄鳝产业发展瓶颈问题和黄鳝产业进一步向纵深发展提供科学参考资料。1. 材料与方法1.1 试验地点与池塘1.1.1 试验地点试验在湖北省汉川市汈汊湖渔场、沙洋县沙洋新世纪水产科技有限公司、仙桃市强龙水产专业合作社、监利县两湖渔业专业合作社和仙桃市大善水产有限公司的池塘中进行。1.1.2试验池塘池塘大小为415亩。要求水源充足，水质清新，符合国家渔业养殖水质标准，通信与交通方便，周边环境安静。使用前，首先对池塘进行清整和清淤，清淤后的池塘，淤泥深度平均在1030cm左右。池塘通过整理、清淤后，将池底曝晒23周，于4月上、中旬注水 15 cm左右，用生石灰 85125kg亩进行清塘，清塘后1周左右，开始在池塘中设置网箱并将水花生放入网箱中，同时向池塘中放养适量的滤食性鱼类和银鲫、彭泽鲫等底层鱼类，不放养鲤、青鱼等易将底泥搅拌混浊的底层鱼类。1.2 网箱设置 1.2.1网箱设计选用聚乙烯无结节网片，网目大小2a为4目/cm左右，网箱上、下纲采用直径为810mm的聚乙烯绳索，性逆转调控网箱规格长宽高为2.0m1.0m1.5m，苗种人工生态繁育网箱规格长宽高为2.0m1.0m1.5m或 1.0m1.0m1.5 m或1.0m0.5m1.5m或0.5m0.5m1.5m，孵化网箱规格长宽高为14142cm， 养殖网箱规格长宽高为2.0m3.0m1.2m，无盖敞开式。1.2.2 网箱设置网箱成“一”字形平行排列，行距2m，箱距 0.5 m左右。行距上端用钢丝固定，沿钢丝再用木桩或竹桩固定。箱体高出水面40 cm，入水 80 cm，箱底距池底 40 cm。网箱至少要在鳝苗入箱前 2030d设置好，一方面便于网衣在水中附着藻类，使网衣呈现柔软性，避免鳝苗擦伤；另一方面要待水草生长茂盛后鳝苗才有栖身之处，提高鳝苗的成活率。 1.3 水草选择 用于黄鳝遮光、栖息的水草最好是水花生，一般不用水葫芦。水花生用二氧化氯等进行消毒后再移栽到网箱中，要及时施肥，如施叶面肥等。水花生生长后的覆盖面积占网箱面积的 90左右，方能将鳝种放入网箱内。1.4 性逆转调控1.4.1饲料中较低蛋白质含量对促进黄鳝性逆转的影响试验共设5个组，每组饲料的蛋白质含量分别为10%、15%、20%、25%和40%（对照组），试验黄鳝均为1龄雌鳝（下同）。试验周期为1年。主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。1.4.2饲料中较高蛋白质含量对延缓黄鳝性逆转的影响试验共设3个组，每组饲料的蛋白质含量分别为35%、45%、55%，试验周期为1年。主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。1.4.3饲料中雌二醇含量对黄鳝性逆转的影响试验共设6个剂量组，每组设3个平行，每组饲料中雌二醇（法国先灵Schering SA公司产品）含量分别为0，20，40，60，80 和100 mg/kg，其中0组为对照组。主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。1.4.4饲料中丙酸睾酮含量对黄鳝性逆转的影响试验设置5个不同梯度的丙酸睾酮添加到黄鳝饲料中，然后进行投喂。对照组为不含丙酸睾酮，试验组的添加量分别为0mg/kg（T0）、20mg/kg（T20）、40mg/kg（T40）、60mg/kg（T60）、80mg/kg（T80）和100mg/kg（T100）。主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。1.5 全网箱人工苗种繁育雌雄性比3:2/m2，苗种培育使用轮虫、桡足类和枝角类无节幼体、水蚯蚓、丰年虫等。1.6 商品鳝网箱养殖1.6.1 人工繁育鳝种密度比较试验4月下旬，放养3种密度的人工繁育鳝种，即1kg/m2（29尾/m2）、1.3kg/m2（37尾/m2）、1.6kg/m2（46尾/m2）。每尾平均体长30.12cm，每尾平均体重35g。每种密度分别为20个网箱，共60个网箱。1.6.2人工繁育鳝种规格比较试验4月下旬，放养3种规格的人工繁育鳝种，即每尾平均体长 32.45cm，每尾平均体重45g；每尾平均体长30.12cm，每尾平均体重35g；每尾平均体长 22.11cm，每尾平均体重25g；密度均为1kg/m2，每种规格分别为20个网箱，共60个网箱。1.6.3人工繁育鳝种放养时间比较试验 将同一密度、同一规格的人工繁育鳝种进行3种放养时间试验，即4月下旬、6月下旬和8月下旬。放养密度均为1kg/m2，放养规格为每尾平均体长 30.12cm，每尾平均体重35g。1.6.4人工繁育鳝种生产性试验经过人工繁育鳝种密度、规格和放养时间的对比试验，筛选出密度为1kg/m2、规格为35g/尾和放养时间为4月下旬作为生产性试验的指标比较合适。1.6.5 野生鳝种与人工鳝种比较试验1.6.5.1 野生鳝种要求鳝种体质健康、无病无伤、活动敏捷。鳝种由于长途运输，可能造成体质下降，在运输过程中，可用电解多维、金维他、生姜片等增强体质，以防应激反应和感冒。 1.6.5.2 人工鳝种要求装箱后迅速起运，如果路程较远，在运输过程中，可用电解多维、金维他、生姜片等增强体质，以防应激反应和感冒。 1.7 训食1.7.1 人工鳝种人工鳝种除了运输工具等消毒外，在入箱前一般不需要消毒，可直接投入到网箱中。人工鳝种也不需要训食，可直接按重量比投喂商品饲料。1.7.2 野生鳝种鳝种入箱前用百万分之十五的聚维酮碘溶液浸泡1015 min左右，入网箱后第 3天开始选用新鲜蚯蚓或新鲜野杂鱼按体重的3%进行投喂，以后每天加入适量的配合饲料，l5d后，直至配合饲料与蚯蚓或新鲜野杂鱼的比例为 70% ：30%为止。经过半个月的驯食，野生鳝种基本上可养成良好的摄食习性。 1.7.3 投饵“四定” 黄鳝养殖一定要遵守投饵“四定 ”原则。每天17：30左右投喂1次，投饵率为 3一5左右，以 12 h吃完为宜。第二天清晨清除残饲，依据残饲多少适当调整投饵率。1.7.4 巡塘检查坚持早晚巡塘，以夜间巡塘为主，检查黄鳝的吃食、活动与疾病情况。 1.8 疾病防治 鳝种入箱前用百万分之十五的聚维酮碘溶液浸泡1015 min左右，并在网箱水体中加入 35 mg/l抗应激灵，防治鳝苗因长途运输及机械损伤而引发的细菌性病、发狂病、应激等。鳝苗人箱后 15 d以及之后每 15d用生石灰 150225kghm2或二氧化氯、聚维酮碘等消毒药物对养殖水体进行泼洒消毒1次；每月交替内服抗肠炎药、鳝肠清和万士菌毒克 1个疗程（23 d）。在黄鳝饵料中不定期添加复合维生素、鱼肝油、板蓝根等物质，增强黄鳝的抗病力；同时每月内服 1次无残留的纯中草药成分的保肝药鳝舒灵，以促生长。 2结果2.1 使用较低蛋白质含量为10%35%的饲料喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到21.06%36.51%,比适宜蛋白质含量为40%的雄性转化率提高了15.72%31.17%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。2.2 使用较高蛋白质含量为45%50%的饲料喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到87.18%95.21%,比适宜蛋白质含量为40%的雌性保持率提高了9.87%17.90%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了68%，获得了较高怀卵量的雌鳝，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精。2.3 饲料中使用60mg80mg/kg戊酸雌二醇喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到78.62%80.24%,比对照组雌性保持率提高了23.79%26.34%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了71%，获得了较高怀卵量的雌鳝，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精。2.4 饲料中使用80mg100mg/kg丙酸睾酮喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到61.34%69.38%,比对照组雄性转化率提高了782.59%898.27%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。2.5 网箱养殖条件下，人工繁育的雌性黄鳝初次性成熟年龄为1年左右。通过性逆转调控技术，可获得大批量人工繁殖雌雄鳝亲本。2.6采用全网箱繁殖、孵化和育苗。网箱面积12m2，雌雄性比3:2/m2。经近千个网箱试验，平均每尾雌鳝获苗种125尾，最高达到200尾。体长达到22.1130.12cm，体重2535g。2.7 设置1980m2网箱采用人工苗种养殖商品鳝，成活率提高80100%（野生鳝最低为0%，一般为60%）。每平方米可获投入产出重量比1:6（kg），产值420元，利润168元。3. 讨论3.1 关于黄鳝性逆转调控问题中国科学院院士刘健康（1944）首次发现黄鳝存在着性逆转现象。他指出，黄鳝的性别与体长和年龄明显有关，中小个体主要为雌性，较大和大个体主要为雄性；之后，刘健康等（1951）又研究了黄鳝性逆转时生殖腺组织由雌性逐步向雄性的改变；1951年以后，国内外一些学者Chan和Phillips(1967)、刘修业等（1990）等诸多学者相继从性腺发育组织学进一步证实了黄鳝由雌性向雄性转变并不再逆转的事实。关于营养与黄鳝性逆转的关系，Liem(1963)提出黄鳝的性逆转可能与食物的丰欠有关，他认为周期性干旱、食物缺乏或长期饥饿黄鳝就会提前性逆转，但未进行实验来加以证实；石琼等（1998）研究了饥饿对黄鳝性逆转有促进作用，他指出：期雌鳝经6周饥饿后，雄性转化率达到57.14%，较对照组提高37.14%，期雌鳝经6周饥饿后，雄性转化率达到61.11%，较对照组提高37.58%，但未能进一步证实所获雄鳝是否具有繁殖性能。 关于外源激素与黄鳝性逆转的关系， Tang等(1974a；1974b)发现注射羊黄体生成素可以促进黄鳝的性逆转，但未能获得功能性雄鳝； Tao等(1993)注射鲑鱼促性腺激素释放激素类似物SGnRH-A成功地诱导黄鳝提前性逆转，也未能获得功能性雄鳝；Yueng等(1993)注射哺乳动物LH能诱导排卵后的黄鳝性逆转，但还是未能获得功能性雄鳝；陶亚雄等（1993，1994）研究表明，鲤鱼垂体匀浆、人绒毛膜促性腺激素、鲑鱼促性腺激素释放激素类似物均能增加雌雄黄鳝血清类固醇激素水平（人绒毛膜促性腺激素对雄鳝雌二醇无影响）；石琼等（1998）通过给期雌鳝注射外源性褪黑激素具有低剂量促进与高剂量抑制黄鳝性逆转的双重调节作用, 但均未能进一步证实所获黄鳝鳝是否具有繁殖性能。关于基因与黄鳝性逆转的关系，张勇等（2001）以人和鼠的SRY片断为探针与黄鳝基因组DNA进行杂交，认为黄鳝性别决定与SRY基因不相关；刘利等（2001）克隆了黄鳝Sox9基因，有利于对其基因组DNA和cDNA序列结构与转基因黄鳝的深入研究；Zhou等（2002）从黄鳝中分离出SRY相关基因,并且通过Southern杂交，证明了SRY相关基因Sox9和Sox17在进化上是保守的基因。戢福云等（2004）以大熊猫锌指蛋白基因Zf x 为探针,在黄鳝基因组DNA中检测到一条长约9.5kb的杂交带，克隆得到黄鳝锌指蛋白基因Zf a , 并运用FISH将其定位于黄鳝1号染色体，其上存在有真兽类哺乳动物X染色质同源的保守片段。认为应用哺乳动物X染色体连锁的其他基因在鱼类开展染色体比较定位研究,将有望促进脊椎动物性染色体进化的深入研究。吕道远等（2005）采用RNA反义探针原位杂交技术,对vasa基因在黄鳝自然性逆转过程中的表达情况进行了分析，认为黄鳝的雄性生殖细胞可能起源于雌性阶段卵巢被膜中的原始生殖细胞；彭茂宇（2005）通过PCR克隆的方法, 克隆了黄鳝DEAD-box家族PL10基因。商璇（2005，2006）采用高密点阵技术从黄鳝雄性性腺中克隆了核糖体蛋白基因，认为该基因可能参与包括性腺分化等过程的发育调控；后又研究了Nup93基因在性腺和肾中的表达远高于其他组织，并存在性别差异，可能与性腺发育有关；俞菊华等（2005）首次分离和克隆了雌雄同体鱼黄鳝卵巢中P450芳香化酶基因，认为该基因与卵巢的关系最近。李伟等（2009）克隆了黄鳝脑P450芳香化酶基因，认为该基因在黄鳝脑和精巢中有较高的表达。Jang等（2006）为了研究黄鳝性别决定的分子机制，以pIndigoBAC-5为载体，首次构建了黄鳝BAC文库，建立了有效和可靠的BAC文库构建方法。方平等（2007）首次运用RACE和RT-PCR方法,从黄鳝脑组织中克隆得到cGnRH- cDNA全序列, cGnRH-cDNA的蛋白编码区高度保守,而非编码区的保守性程度很低。认为cGnRH-在黄鳝的性腺发育和性逆转方面只起协调作用。综上所述，迄今为止关于营养、激素等各种因子对黄鳝性逆转的研究中，虽能获得由雌鳝转变的雄鳝，但未见有转变后的雄鳝与雌鳝自然产卵受精再获得黄鳝子代的报道；同样，虽能获得延缓性逆转后的雌鳝，但也未见有延缓性逆转后的雌鳝与雄鳝自然产卵受精再获得黄鳝子代的报道。也就是说，对促进和延缓黄鳝性逆转的问题还没有取得实质性进展。近7年来研究了营养与激素水平对黄鳝性逆转的影响，研究结果表明，使用较低蛋白质含量为10%35%的饲料喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到21.06%36.51%,比适宜蛋白质含量为40%的雄性转化率提高了15.72%31.17%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了小批量苗种；而使用较高蛋白质含量为45%50%的饲料喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到87.18%95.21%,比适宜蛋白质含量为40%的雌性保持率提高了9.87%17.90%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了68%，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了小批量苗种。饲料中使用60mg80mg/kg戊酸雌二醇喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到78.62%80.24%,比对照组雌性保持率提高了23.79%26.34%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了71%，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了高怀卵量的雌鳝；饲料中使用80mg100mg/kg丙酸睾酮喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到61.34%69.38%,比对照组雄性转化率提高了782.59%898.27%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝，获得了小批量人工黄鳝苗种。并成功进行了网箱黄鳝人工生态养殖试验，每平方米平均产量达到6kg/m2。已发表论文14篇，其中SCI论文2篇。申请国家专利4项，已授权国家发明专利2项和实用新型专利1项。在控制黄鳝性逆转方面处于世界领先地位。3.2 关于苗种人工生态繁育技术3.2.1 人工繁殖关于黄鳝人工繁殖催产药物的研究，各种不同外源激素的效应方式或是组合均有报道，赵云芳等（1990）结果表明HCG(2000 IU/kg)催产效果最好(催产率70%90%)、LRH-A(2040g/kg)次之(催产率50 %以上)、鲤脑垂体最差(反应小,一般不受精)。周定刚（1990）一次注射的催产效应表明均能诱导黄鳝排卵。其中以注射0.3g/g体重的效果最好，排卵率达100%，显著高于其他剂量，并且总剂量采用两针注射，其催产率显著高于一针注射方法。HCG诱导黄鳝排卵的效应，以3Iu/g体重的催产效果最佳，排卵率达100%。无论采用一次或二次注射方式，黄鳝排卵率均无显著差异。周定刚（1993）采用RES ( DA消竭剂)+LRH-A组合对黄鳝进行催产，结果表明，RES不具有显著提高LHRH-A诱导黄鳝排卵的作用；采用DOM和LRHA组合注射，与单独注射LRH-A的排卵率差异不显著，说明DOM不具有显著提高LRH-A诱导黄鳝排卵的作用。杨代勤（1999）用外源激素促黄体素释放激素类似物(LRH-A)、绒毛膜促性腺激素(HCG)和鲤鱼脑垂体(PG)分别催产黄鳝的效果。从催产效果看,使用LRHA两针注射,剂量为0.2g/g0.6g/g的效果最好;使用PG两针注射,剂量为12g/g18g/g的效果次之;使用HCG的催产效果较差。陈鹏飞等（2001）采用不同外源激素及组合对两批216尾黄鳝进行催产试验，研究发现，HWHO2是LRHA5的增效助产剂,与LR-A5混合使用可取代垂体,能显著地改善鱼类的性腺成熟度、助产效果。同时表明,使用两种以上的外源激素较之使用单一外源激素的诱导排卵效果好,但均不及加有多巴胺拮抗物(DOM)和对LRH-A5具有增效助产作用的HWHO-2的试验组效果明显,这与鲤科鱼类的催产诱导排卵效果是一致的。李建国（2001）认为LRH-A催产效果较好；陈德英（2002）认为HCG(2 000 IU/kg)效果较好;邴旭文等(2003)结果表明亲鳝繁殖前每尾注射LRH-A 12.5g催熟、7d后再注射DOM 0.5g或LRH-A+HCG(0.5g+500IU)催产效果最好。乔德亮(2006)用HCG一种药物注射,当剂量为3000IU/kg时,催产率高达95.6%,结果证明HCG对黄鳝进行人工催产是完全可行的。前人研究黄鳝人工繁殖时催产药物种类、剂量不尽相同,是因为鱼类人工繁殖的催产率除了受注射药物的种类、剂量影响外,还与亲鱼的成熟度、水温、水质、注射次数等多种因素有关，最佳的激素种类组合和剂量有待进一步探究。关于黄鳝人工授精的研究，方法基本一致（徐宏发，1987；韩名竹，1987；赵云芳，1989；朱大军，1987；杨代勤，1999；赵云芳，1990；陈德英，1996；李明锋，1999；王光礼，1997）。即将检查选出的性成熟雌鳝取出，一手垫干毛巾握住前部，另一手由前向后挤压腹部，部分亲鳝即可顺利挤出卵。但多数亲鳝会出现泄殖腔堵塞现象，此时可用小剪刀在泄殖腔处向里剪开0.51cm，然后再行挤压，卵巢排出的卵一般均可挤出，连续35次，挤空为止。放卵容器可用玻璃缸或瓷盆，将卵挤入容器后，立即把雄鳝杀死，取出精巢(此时精巢一般呈乌黑色)，取一小部分放在400倍以上的显微镜下观察，如果精子活动正常，即可用剪刀把精巢剪碎，放入盛卵的培养皿中(雌雄配比为35:1)，然后加入任氏溶液，用羽毛轻轻搅拌，让卵与精巢碎片混合均匀。静止约lmin后，往培养皿中加入清水，约5min后，再加清水洗去精巢碎片和血污，用吸管吸除精巢碎片、血污、破卵等。3.2.2 生态繁殖人工养殖黄鳝时,可以通过设置生态环境，创造符合黄鳝繁殖的生态条件等手段进行强化培育,采用自然产卵受精、人工孵化的方法来实现以达到黄鳝自繁的目的。方文珍（1995）对黄鳝亲本人工催情后，雌雄个体在产卵池中自行产卵排精，完成受精的过程为自然受精。李明锋（1999）报道，在庭院或农田中建池自然繁殖。池深lm，铺设一层无结节网，网口高出池口30cm一40cm，并向内倾斜.用木桩固定.以防逃逸。池底网上铺泥土约40cm，并适量栽种慈姑等水生殖天以后可以放养，鳝种要规格一致，20g30g/尾为好，一次放足，一般35kg/m2。王松（1999）在繁殖池内投种鳝密度每平方米610条，池中泥堆上适当栽植一些较矮的草类植物进行黄鳝的自然繁殖。苏建国（2001）模拟黄鳝在田野中的产卵环境建造繁殖池或在饲养池中分割一块专做繁殖用。在繁殖池中还需建一个面积较小的护幼池,水能相通,幼鳝能从入,而亲鳝不能进入,以保护幼鳝。在繁殖池的四周(离池壁一定距离)和中间堆筑土埂,埂宽约20 cm,高出水面1015cm,埂上再栽些杂草。要在繁殖池和护幼池中扔些丝瓜筋、柳树根等柔软多须之物,以便鳝苗隐蔽、栖息,也便于人工收集移养。繁殖期寻找泡沫堆聚的产卵孵化巢,用瓢、密眼捞网或纱布将卵连同泡沫一起轻轻捞起,装在水桶内运回,放入小池、水缸等中进行静水孵化。尹绍武（2004）对黄鳝的自然繁殖的实验研究，在9个1m1m0.5m水泥培育池中进行的, 采用水葫芦作为水草, 课题组自行设计的人工鱼巢,池水深2030cm。通过不同亲鳝密度、性比、生态类型对黄鳝繁殖的影响，结果表明：三个因子中密度起主导作用,而性比、生态类型对亲鳝存活率的影响不如密度显著。鳝的性比应以13或12()，验尝试用人工巢代替泥土,其结果是可行的。王建美等（2004）用面积3亩的试验塘，长方形，池深1.2米进行黄鳝生态繁殖。选用水葫芦，水花生，水芹菜等水草构筑主体空间。分别于距池边80厘米处及池中心区域用聚乙烯绳固定间隔栽种水葫芦和水花生，距池边150250厘米处间种水芹菜，并在水面投放适量紫背浮萍，使鳝鱼繁殖池水草根系由中心向池边垂直方向呈梯度分布。鳝苗喜欢在草堆下潜居，故利用三角抄网抄捕采集，2003年10月30日清塘验收，总产鳝苗30.6万尾。胡宝林（2004）将亲鳝，集中在富含有机质壤土的池中越冬，待翌年春季自然产卵繁殖，取得不错的效果。邴旭文（2005）在镇江市丹徒水产养殖场选择16个800m2的稻田经改造，作为黄鳝的繁殖池，先人工催熟，再根据黄鳝的繁殖习性，模拟黄鳝自然条件下的产卵环境，在繁殖池四周和中间堆筑土埂，繁殖池内适当栽培较矮的草类植物或水葫芦，在稻田中自然繁殖。试验设计不同的放养密度，分别为每平方米1、2、3、4尾，并与人工催产作了比较，结果表明结果表明，在人工催产的黄鳝人工繁殖中，其受精率和孵化率均较低，分别为16%一22%和6% 12%；仿生态繁殖的受精率可达85%以上，白然孵化率可达82%一93 %；黄缮密度在每平方米2尾以内时，可以发现雌雄黄鳝的发情，产卵及吐泡营巢;而密度大于3尾时，黄鳝便不会产卵。段传胜（2006）在长30 m、宽20 m的稻田中,四周用稻田土壤堆成宽5060 cm的埂,田中开挖6080 cm宽的沟,沟中水深3540 cm,土埂高出水面1520cm,沟与沟相通,沟埂外围用水泥砖墙防逃防渗漏，在沟的上方架设木架,埂上种植黄瓜、豆角、丝瓜、扁豆等藤蔓植物或种植葡萄,在水沟中种植水葫莲,面积为水沟的1/3。共计孵化黄鳝苗约113万尾，黄鳝的产卵率达98%,受精率达85%,孵化率在90%以上,鳝苗的成活率在87.8%以上。周文宗（2007）在室内外成功实现了黄鳝的浅水无土半人工繁殖。在室内用水族箱（140cm*50cm *25cm）进行试验，水族箱内没有投放水草和鱼巢；在室外，按照静水无土养殖要求设计建造繁殖池,面积18m2,水草种类包括水葫芦(Eichhornia crassipesSolm.)、水花生(Alternanthera philoxeroidesGriseb)、水浮莲(Pistia stratiotes)、狭叶香蒲(Typha angustifolia)、金鱼藻(Ceratophyllum demersum )等，每平方米繁殖池放养亲鳝10尾，雌雄比为6：4。李育陪（2007）报道，根据黄鳝的繁殖习性,模仿黄鳝在自然条件下的产卵环境, 将稻田改造成繁殖池（20*30m），在繁殖池中间和四周堆筑土埂, 埂上可种植南瓜、丝瓜等藤蔓植物，在沟中种植水葫芦。在土埂上用比黄鳝身体略大的木棍横向打入相当于放养黄鳝数量3倍的洞穴,再竖向打上2 倍于黄鳝数量洞穴进行生态繁殖。3.2.3黄鳝受精卵孵化根据黄鳝受精卵孵化的环境，大体可分分为自然孵化和人工孵化。有关黄鳝受精卵自然孵化的试验研究报道较多，大多设计黄鳝繁殖池和孵化池合一的繁殖方式，在繁殖池种种植水生植物等，鳝苗隐蔽、栖息,也便于人工收集移养。王松（1999）采用繁殖池中采用细纱布做成的小网捞鳝苗培育池养殖。邴旭文（2003）要在繁殖池和护幼池中扔些丝瓜筋、柳树根等柔软多须之物,以便鳝苗隐蔽、栖息,也便于人工收集移养。王建美（2004）在繁殖池中采取了“亲鳝+鱼苗+抱卵虾”的放养模式，适时进行“母婴”分离，把亲鳝与幼鳝分离，繁殖的大量青虾蚤状幼体为鳝苗提供了充足的生物饵料大大提高了鳝苗的成活率。关于黄鳝受精卵人工孵化，区别与自然繁殖，其受精卵孵化是在受精后，将受精卵移开繁殖池，选择在孵化池中进行，也有解剖盘或培养皿、玻璃缸、瓷盆、水族箱、微流水孵化器等孵化器具中。苏建国（2001）用瓢、密眼捞网或纱布将卵连同泡沫一起轻轻捞起,装在水桶内运回,放入小池、水缸等中进行静水孵化。苟兴能（2004）从野外收集两批黄鳝卵共计粒，用平底瓷盘孵化。段传胜（2006）将收集的受精卵用曝气的井水清洗,放于直径40cm、高80cm的锥形孵化桶中,采用从桶底注水的方式孵化。李育培（2007）在长、宽各5m 的小型水泥池的孵化池采用微流水孵化。由于人工孵化的各种不同的孵化设备，相对应就存在各种不同的孵化方式，基本可以分为静水孵化、流水孵化，基底铺沙滴水孵化。用静水孵化，一般选用玻璃缸、瓷盆、水族箱等器皿，采用换水方式孵化受精卵，由于换水次数限制，孵化水体溶氧有限，受精卵在孵化过程中耗氧增加，水质容易变坏，其孵化率极低。流水孵化方式相对而言，孵化水体溶氧比静水孵化方式高，孵化率也都高于静水孵化方式。流水孵化一般采用孵化池、微流水孵化器等，苟兴能（2004）设计流水孵化方式，在水深0.20.4cm,覆盖湿纱布、光线较暗的方式孵化，试验研究结果为孵化率达84.1%。周秋白（2006）通过特制了黄鳝专用孵化器 ,采用微流水解决氧气不足问题进而做了不同水深、光照对黄鳝卵孵化效果比较试验，水深2cm时获得了孵化率高达93.2%。基底铺沙滴水孵化的具体方法是: 在培养皿底部均匀铺上一层经过暴晒、洗淘处理的细沙，将受精卵移至铺有细沙的培养皿中，进行滴水孵化。根据情况适当增加滴度，要随孵化时间的延长而加快水滴速度，以保证胚胎发育所需的溶氧，并抑制水霉生长。控制滴速10滴30滴，直至孵出幼苗。邹记兴（1996）通过滴水孵化，得到平均孵化率为89.5%。本项目采用全网箱人工生态繁殖、孵化和育苗。网箱面积12m2，雌雄性比3:2/m2。经近千个网箱试验，平均每尾雌鳝获苗种125尾，最高达到200尾。3.3 商品鳝人工生态养殖技术关于黄鳝网箱养殖技术，王西享等(2011)、周军（2010）、程国华（2009）、黄小华等（2008）、王应祥（2007）、吴云发等（2006）、赵志坚（2004）、李建伟（2003）、徐建中等（2002）、卫华强（2000）、朱水法（1999）等进行过野生黄鳝苗种养成商品鳝的报道，但对人工繁殖的黄鳝苗种进行商品鳝网箱养殖技术未见报道，本项目首次对人工繁殖的黄鳝苗种进行商品鳝网箱养殖密度、规格、放养时间、防病、饲料、管理等技术进行详细报道。研究结果表明，采用人工苗种养殖商品鳝，成活率提高80100%（野生鳝最低为0%，一般为60%）。每平方米可获投入产出重量比1:6（kg），产值420元，利润168元。参考文献1 毕庶万，毕文胜黄鳝生物学和增养殖技术现代渔业信息，1998，13（50）：16-19 2 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