广西地方标准《病死猪无害化处理堆肥技术操作规程》（征求意见稿）

ICS11.220B41DB 45广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准DB 45/T XXXXX2017病死猪无害化处理堆肥技术操作规程Operating procedure of dead swine by composting technology（征求意见稿）2017 - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施广 西 壮 族 自 治 区 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB45/ XXXXX2017I目 次前言 .II1 范围 .12 术语和定义 .13 病死猪无害化堆肥技术前期准备 .14 堆肥工艺 .15 堆肥时间控制 .26 无害化判定 .27 注意事项 .2附录 A .3附录 B（规范性附录） 菌株及培养基要求 .4附录 C .5DB45/T XXXXX2017前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区水产畜牧兽医局提出。本标准起草单位：广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、广西农垦永新畜牧集团良圻原种猪场、贺州市动物疫病预防控制中心、南宁市武鸣区动物疫病预防控制中心、河池市动物疫病预防控制中心、桂林市动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区兽医研究所。本标准主要起草人：熊 毅、伍少钦、颜健华、冯淑萍、李军、郭建刚、胡巧云、何奇松、胡丽萍、张浩、于俊勇、王孝德、凌丹、韦建华、韦达有、杨威、彭昊、陈泽祥。DB45/ XXXXX20171病死猪无害化处理堆肥技术操作规程1范围本标准规定了病死猪无害化处理的堆肥前期准备、堆肥过程中影响因素控制、无害化判定。本标准适用于病死猪无害化堆肥处理。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1病死猪指饲养在养殖场（户）内因病原微生物或不明原因引起发病而导致的淘汰猪或死亡猪。2.2无害化处理指将养殖废弃物（病死猪等）内生物性有害物质杀灭或降解成无害物质、消除其危害的一种技术。3病死猪无害化堆肥技术前期准备3.1堆肥地点选择3.1.1堆肥地点要求地形平坦，地势稍高，利于排水，3.1.2应距离居民区、生活饮用水源地、公路及铁路等主要交通干线 1000m 以上，距离养殖区 500m以上，并应位于居民区和公共建筑群常年主导风向的下风向。3.2堆肥房要求3.2.1堆肥房选址堆肥房选址应符合动物防疫条件要求，应建在相对独立的隔离地方，净、污通道分离，进、出口分开并安装有消毒装置，场面硬化、平滑易于清洁消毒。3.2.2堆肥房要求 堆肥间建于防雨棚内，棚屋檐高应不少于2.5米，通风良好。堆肥间应不少于4间，每间长、宽、高分别为6.04.02.0m,“U”型布局，即三面围墙，一面开口，场面和墙面用水泥砂浆硬化。3.2.3堆肥原料准备堆肥主料为甘蔗渣或木屑，辅料可选择畜禽粪便、氮肥、豆渣、微生物菌剂等。DB45/T XXXXX20174堆肥工艺4.1在地面上铺一层甘蔗渣或木屑做主料，厚约 20cm。4.2主料上放置病死猪，对死亡的基础公母猪和育肥大猪，应预先进行碎尸处理后再堆放（离墙壁20 cm），大猪尸体、尸块每个间隔 15cm。4.3在猪尸体、尸块上铺一层 20cm25cm 湿度为 60%的甘蔗渣或木屑，甘蔗渣或木屑中可添加一定量的辅料。以此类推，层层堆放，可堆放到 1.5m 高，最后一层甘蔗渣或木屑厚度为 30cm40cm，在自然通气状态下进行发酵。4.4用专用温度计测定堆体 40cm、80cm、120cm 处温度，必须保证堆体内物料的温度要达到 55以上、并持续 10d 以上。5堆肥时间控制5.1一期堆肥经过60d90d，堆肥温度下降45以下，首次热循环结束。此时病死猪尸体基本被化制，但降解还不够完全。5.2二期堆肥温度下降后将一期堆肥所有的残余物转移到另一个空的堆肥房，确保所有的残余物都被覆盖。二期堆制过程需要60d90d，经过60d90d，温度再次下降至45以下，结束堆肥。6无害化判定以大肠杆菌10 9CFUg的浓度接种于封闭有新鲜肉的呢绒袋（孔径50 m以下）或密封于含培养基的2mL塑料管内，分别置于堆肥的上、中、下层，堆肥期到期的前一周取出进行细菌分离培养，符合总大肠菌数量小于1000CFUg干重的目标要求即为无害化处理合格。无害化合格的化尸堆可以用于农作物施肥，也可以与新的甘蔗渣或木屑混合作为下一次堆肥处理中的碳基础层。7注意事项7.1堆肥过程中注意水分控制。堆肥的起始含水率一般为 50%65%，含水量不足，影响发酵速度，补入适量水分。过于潮湿，即用手挤压时有水分流出，则添加更多甘蔗渣或木屑。7.2因重大动物疫病及人畜共患病死亡的病死猪尸体不得使用此种方式进行处理。7.3发酵过程中，应做好防雨措施。DB45/ XXXXX20173附录A（资料性附录）实验室仪器设备配置A.1 主要仪器设备恒温摇床；电热恒温培养箱。A.2 实验工具水份测定仪；专用温度计；移液器；三角取样器；平板；接种环；酒精灯；10L、200 L吸头；天平；50mL量筒；1.5mL离心管。DB45/T XXXXX2017附录B（规范性附录）菌株及培养基要求B.1大肠杆菌 0157:H7三株转基因抗萘啶酮酸的大肠杆菌0157:H7(Escherichia coli0157:H7)菌株，均为实验室保存菌株，由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心提供。B.2药品及培养基萘啶酮酸；大肠杆菌O157免疫磁珠分离检测试剂盒；PBS缓冲液,即磷酸盐缓冲液；0.01%吐温80的PBS缓冲液；TSB培养基,即胰蛋白胨培养基；MacConkey琼脂培养基,即麦康凯琼脂培养基；CT-SMACnal琼脂培养基,即补充了0.05mg/L头孢克肟,2.5mg/L亚碲酸钾，50mg/L萘啶酮酸的山梨醇麦康凯培养基；mTSB培养基，即补充了20mg/L新生霉素，1.5g/L胆汁盐,1.5g/L磷酸二甲盐的TSB培养基。以上培养基按照生产厂家说明书进行配制，并按上述要求加入特殊物质。DB45/ XXXXX20175附录C （规范性附录）大肠杆菌E.coli0157:H7的接种和总大肠菌的检测C.1大肠杆菌的接种将三株抗萘啶酮酸的E.coliO157:H7(Escherichia coli0157:H7)菌株接种于10mL补充了50g/mL萘啶酮酸的TSB培养基中,于37培养6h，随后将三份培养液等体积混合,以备接种猪肉样品，所用猪肉样品经实验确定没有抗萘啶酮酸的E.coliO157:H7菌株存在，接种浓度约达10 9CFU/g干重。C.2样品的采集用三角形取样器采集样品进行总大肠菌检测。堆肥样品在采集后即冰上保存,并于6h内运送至实验室。C.3E.coli0157:H7 的检测采用平板计数法,将样品用 PBS 缓冲液 10 倍梯度稀释,并涂在 CT-SMACnal 平板培养基上,37过夜培养后计数,每个样品两个重复。每个平板上最多 3 个单克隆菌株。当平板计数检测不到E.coliO157:H7 时,2 个重复的 1g 样品被加入到 9mL 的 mTSB