乌灵胶囊功效.pdf

表1 AED8801对NMDA所致分离的皮层神经细胞内 Ca2 i变化的影响 x s n 4 组 别 剂量 mol L 1 Ca2 i mol L 1 静息态NMDA Ca2 i增加幅度 对照组187 4 15 4236 7 18 4 1 26 4 4 2 AED88011227 3 49 0264 0 57 416 5 9 0 10226 4 48 9251 7 55 511 4 7 7 2 100215 5 21 5224 6 18 44 4 2 3 3 注 与其自身静息态比较 1 P 0 01 与对照组比较 2 P 0 05 3 P 0 01 高K 以及NMDA刺激情况下 Ca2 i的影响情 况 目的探讨AED8801对脑缺血保护作用的机制是 否在于对钙离子的影响 以及这种影响的环节是通 过电压依赖的钙通道 还是通过受体依赖的钙通道 实验结果表明 AED8801对静息态 Ca2 i无明显的 影响 对高K 刺激引起去极化 进而细胞外钙通过 电压依赖性钙通道进入细胞内 造成 Ca2 i增加 的影响也不明显 只是 对NMDA刺 激 引 起 的 Ca2 i增加有明显的降低作用 说明AED8801对电 压依赖性钙通道无明显的阻断作用 对受体依赖性 钙通道有阻断作用 细胞内钙离子浓度增高 可使 一些依赖Ca2 的酶的活性如NO合成酶 磷脂酶 蛋白水解酶及核酸酶增加 通过 瀑布 式链锁反应 终使神经细胞线粒体功能衰竭 质膜破损 微管破坏 直至神经细胞死亡 AED8801通过阻断受体依赖性 钙离子通道 可使 Ca2 i降低 最终保护脑缺血引 起的损伤 这可能是其发挥脑缺血保护作用的关键 机制所在 上述实验是在外钙存在的情况下进行 神经细胞 Ca2 i增高除外钙内流因素外 尚有内 钙释放参与 那么我们下一步的工作是研究其对内 钙释放有无作用 参考文献 1王迪 孙光春 陶成 等 3 42二氯苯丙烯酰另丁胺抗脂质过氧 化作用与对大鼠脑缺血的保护作用 中国药学杂志 1999 34 1 20 2李明 王峻峰 韩济生 等 应用Fura22 AM检测分离的神经细 胞内游离钙及其变化 药学学报 1991 26 12 890 3Dildy J E Leslie SW Ethanol inhibits NMDA2induced increase in free intracellular Ca2 in dissociated brain cells Brain Res 1989 499 383 4张均田 李锡明 石成章 等 用Fura22 AM测定细胞内游离钙 浓度的方法 中国药学杂志 1991 26 11 655 收稿 19972112 27 乌灵菌粉的镇静作用及其机理研究 马志章 左萍萍1 陈宛如 唐利军1 沈琦1 孙晓华 沈云 杭州310028杭州大学西溪校区生命科学学院 1北京 100005中国医学科学院基础研究所 摘要 目的 研究真菌中药乌灵菌粉对小鼠的镇静安眼作用及其机制 方法 以常规的药理试验方法检测本药在戊巴比妥钠 协同下对小鼠睡眠的影响 以同位素掺入法研究作用机理 结果 乌灵菌粉在戊巴比妥钠协同下有明显的促睡眠作用 并使 自主活动减少 同时服药小鼠脑内谷氨酸 Glu 和 2氨基丁酸 GABA 的含量及GABA受体的结合活性均高于对照 药物还 能提高谷氨酸脱羧酶 GAD 的活性 结论 乌灵菌粉可能是通过促使Glu GABA进入脑内 提高GAD活性及激活GABA受 体而实现其镇静作用 关键词 乌灵菌粉 镇静安眠 谷氨酸 2氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 Studies on the sedative and sleeping effects of Wuling mycelia and its pharmacological mechanism Ma Zhizhang Ma ZZ Zuo Pingping Zuo PP Chen Wanru Chen WR et al College of Life Science Zhejiang University Hangzhou310028 Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Beijing100005 ABSTRACT OBJECTIVE To reveal the sedative and sleeping effcets of Wuling mycelia a Chinese medicine and the mechanism involved METHODS By using the routine pharmacological methods the synergistically sedative and sleeping effectsof Wuling mycelia and nembutal sodium were detected in mice while the mechanism involved was investigated by isotope incorporation assay RESULTS Powdered Wuling mycelia in combination with nembutal sodium couldpromote sleep and decrease autonomic locomotions of mice Af2 ter administration of Wuling mycelia the contentsof glutamic acid Glu and 2 aminobutyric acid GABA and the binding affinity of GABA receptors in the brain were found to be augmented as compared with those of controls Further the activity of glutamate decar2 boxylase GAD could also be elevated CONCLUSION The data suggested that Wuling mycelia possesses the ability to facilitate the entry of Glu and GABA into the brain to activate the receptorsof GABA and thus to exert its sedative and sleep2promoting properties 473 Chin Pharm J 1999 June Vol 34 No 6 中国药学杂志1999年6月第34卷第6期 1995 2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co Ltd All rights reserved KEY WORDS Wuling mycelia sedative and sleeping Glu GABA GAD 乌灵参 Xylaria sp 是生长在土栖白蚁巢中的 一种真菌的菌核 主要成分有蛋白质 多糖 无机元 素 维生素 核苷类等 据四川中药志 1 记载 乌灵 参具有利尿 补心神 治失眠 吐血及产后失血等药 用价值 由于该真菌生长在地下深处 采掘困难 所 以产量十分有限 经过多年研究 我们采用深层发 酵技术培养乌灵参菌丝体已获得成功 经加工制成 乌灵菌粉 本实验就乌灵菌粉的镇静作用及其机制 进行了研究 现将结果报道如下 1 材料与方法 1 1 材料 1 1 1 药物 乌灵菌粉 浙江佐力药业公司 用5 g L 1羧甲基纤维素钠盐 CMC2 Na 配成混悬液 1 1 2 动物 ICR小鼠 供药效试验 和昆明系小 鼠 供药效机理研究 体重 20 2 1 1 g 各 半 分别由浙江省实验动物中心和北京医科大学动 物部提供 1 1 3 同位素标记物 3H2DL2 Glu 谷氨酸 放射 比活度2 0TBq mmol 1 3H2GABA 2氨基丁酸 放射比活度0 96TBq mmol 1 中国科学院上海原 子能 研 究 所 14 C2Glu 放 射 比 活 度2 15GBq mmol 1 3H2Muscimol 蝇蕈醇 英国Amersham公 司 1 1 4 仪器 低温高速离心机 Tomy RS220型 日 本产 液闪计数仪 LS 29800型 美国Beckman公 司 药理生理实验多用仪 YSD24G型 蚌埠无线 电二厂 1 2 药效试验方法 1 2 1 延长戊巴比妥钠睡眠时间试验 按药物的 3种剂量设组 每组10只 po 每天1次 分别给药 1 4 8d 于最后1天给药后0 5h ip 50mg kg 1戊 巴比妥钠 然后以翻正反射消失和恢复为指标 记录 每只小鼠入睡时间和睡眠持续时间 数据统计处理 采用Student s检验 1 2 2 戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验 小鼠分组 按1 2 1 每组14只 选连续灌服药物7d 最后1 次给药后0 5h ip戊巴比妥钠 30mg kg 1 阈下催 眠剂量 30min内小鼠翻正反射消失达1min以上 者记为阳性 表明已进入睡眠 统计学处理 采用两 组X2检验2四格表法进行统计分析 1 2 3 对小鼠自主活动的影响 连续灌服药物 8d 于最后1d给药后0 5h 将小鼠置于药理生理实 验多用仪的活动笼内 记录5min内自主活动数 统 计与1 2 1相同 以上药理实验按 药理实验方法学 2 一书介 绍的有关方法进行 1 3 药效机理试验方法 1 3 1 小鼠脑组织摄取Glu和GABA试验 给小 鼠po药物6d后断食16h 于最后1次服药3h后将 小鼠固定 尾静脉注入3H2Glu 33 mol 另设相同处 置后的小鼠注入3H2GABA 38 mol 注入量为0 1 ml 30min后断头处死 迅速取脑秤取湿重 放入测 试杯中 加体积分数为70 过氯酸和29 过氧化氢 于70 水浴中消化60min 加甲苯闪烁液和适量无 水乙醇 用液闪仪测每克脑组织的放射活性 1 3 2 谷氨酸脱羧酶 GAD 活性测定 反应小瓶 为特制的微量孵育装置 带有通气孔和注射孔 中空 玻璃盖内放入15mm 8mm的吸附滤纸 用0 1ml 海胺浸润 以吸附反应产物14CO2 向反应小瓶中加 入反应液 含磷酸钾缓冲液 磷酸吡哆醛和10mmol L 114 C2Glu等 50 l 加入小鼠脑组织匀浆和体积 分数为50 的乙醇提取的乌灵菌粉稀释液各40 l 经通气孔通入氮气1min 以驱除瓶中氧气 于37 水浴中振荡孵育90min 再经注射孔注入12 5mol L 1硫酸 50 l终止反应 继续孵育30min 待滤纸充 分将反应中产生的14CO2吸附之后 取出滤纸放入 甲苯闪烁液中测其放射活性 1 3 3 GABA受体结合试验 受体蛋白制备 各组 动物给药7d后断头取脑 迅速分离大脑皮层 用 50mol L 1Tris2citrate 缓冲液 pH7 4 匀浆 48 000 g离心20min 再次悬浮 离心 反复洗3次 沉淀的 受体蛋白置 20 冷冻保存待用 受体结合试验 用GABA受体的特异性激动剂3H2Muscimol为配 基 与受体蛋白 100 g 200 g 在2 反应30min 反应总体积为0 3ml 非特异性结合管加入10 5 mol L 1 GABA 0 1ml 反应后的样品抽滤于纤维 滤膜上 用冷缓冲液冲洗3次 加闪烁液后测放射 活性 GABA受体的特异性结合是以每管dpm值 减去10 5mol L 1 GABA存在下的dpm值 以每管 毫克蛋白所结合的配基克分子数表示 以上实验按 参考文献 3 5 进行 2 结 果 2 1 乌灵菌粉在戊巴比妥钠协同下的促睡眠作用 2 1 1 对小鼠戊巴比妥钠睡眠作用的影响 小鼠 573 中国药学杂志1999年6月第34卷第6期 Chin Pharm J 1999 June Vol 34 No 6 1995 2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co Ltd All rights reserved 连续给药8d后 中剂量 0 8g kg 1 和高剂量 1 3g kg 1 能显著地缩短戊巴比妥钠入睡时间和延长 睡眠持续时间 低剂量组效果不显著 结果见表1 表1 乌灵菌粉对小鼠戊巴比妥钠睡眠作用的影响 n 10 组 别剂量 g kg 1入睡时间 min睡眠持续时间 min 对照 CMC2 Na 5 9 1 77 2 3 9 乌灵菌粉0 44 8 1 211 2 6 0 0 84 6 1 1 1 13 7 4 7 1 1 33 9 1 0 1 16 5 10 0 1 注 与对照组相比 1 P 0 05 2 1 2 对小鼠戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响 本实验采用戊巴比妥钠阈下剂量 30mg kg 1 预 试 使92 9 的小鼠未进入睡眠 但是在口服乌灵 菌粉后 再接受阈下剂量戊巴比妥钠 进入睡眠的小 鼠只数明显增多 其中高剂量组和中剂量组与对照 组相比差异显著 低剂量组则差异不显著 结果见 表2 表2 乌灵菌粉对小鼠戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响 n 14 组 别剂量 g kg 1阳性数 发生睡眠 只 对照 CMC2 Na 1 乌灵菌粉0 4 2 0 8 7 1 1 3 11 2 注 与对照组相比 1 P 0 05 2 P 0 01 2 2 乌灵菌粉对小鼠自主活动的影响 小鼠连续给药8d后 乌灵菌粉的中 高剂量能 显著地减少自主活动数量 低剂量则无此作用 结果 见表3 表3 乌灵菌粉对小鼠自主活动的影响 x s n 12 组 别剂量 g kg 1自主活动次数 对照 CMC2 Na 1298 413 乌灵菌粉0 41236 350 0 8947 162 1 1 3743 132 2 注 与对照组相比 1 P 0 05 2 0 01 2 3 乌灵菌粉药效机制研究 2 3 1 对小鼠脑组织摄取Glu GABA的影响 采 用同位素掺入的方法发现 经灌服乌灵菌粉的各组 小鼠 脑内3H2Glu含量均比对照组明显增高 P 0 01 其中高剂量组升高最显著 但高剂量组对3C2 GABA被摄取入脑的量未见明显变化 而中 低剂量 组则明显增多 P 0 01 见表4 2 3 2 对小鼠脑匀浆GAD活性的影响 谷氨酸 Glu 在GAD作 用 下 可 转 化 为 2氨 基 丁 酸 GABA 并产生CO2 14C2Glu 作为GAD的底物 14 C2CO2数量的增多即代表了GAD的活性 结果 显示 乌灵菌粉1 mg ml 1浓度可明显增加脑内 GAD的活性 并呈量效关系 见表5 表4 乌灵菌粉对小鼠脑组织摄取3H2Glu 3H2GABA的影 响 x s n 6 组 别剂量 g kg 1 3H2Glu 3H2GABA nmol gw wnmol gw w 对照 CMC2 Na 168 345 33 0 99 乌灵菌粉 0 4262 27 1 10 29 1 00 1 0 8284 13 1 10 47 1 31 1 1 3660 213 1 5 78 1 10 注 与对照组相比 1 P 0 01 表5 乌灵菌粉对小鼠脑匀浆GAD活性的影响 x s n 6 组 别剂量 g kg 1 GAD活性 nmol14CO2 mg 1蛋白质 h 1 对照 缓冲液 44 9 9 4 乌灵菌粉0 2548 6 5 3 0 5050 2 5 1 1 0055 3 7 6 1 注 与对照组相比 1 P 0 05 表6同 2 3 3 对小鼠脑内GABA受体活性的影响 小鼠 连续服用中高剂量乌灵菌粉7d后 大脑皮层受体蛋 白与配基的结合明显增强 表明GABA受体结合活 性得到提高 低剂量组虽未见明显差异 但仍可见 增加趋势 结果见表6 表6 乌灵菌粉对小鼠脑内GABA受体结合活性的影响 x s n 10 组 别剂量 g kg 1 GABA活性 pmol mg 1蛋白质 h 1 对照 CMC2 Na 13 33 0 27 乌灵菌粉0 413 40 0 40 0 813 80 0 50 1 1 314 80 0 65 1 3 讨 论 3种药理试验结果表明 乌灵菌粉具有良好的 镇静安眠作用 实验曾观察了其促睡眠作用的时间 效应 小鼠若仅给药1d或连续给药4d 则中 高剂 量组均有缩短入睡时间和延长睡眠时间的倾向 但 与对照相比差异不显著 可见乌灵菌粉药效的发挥 要在连续给药多天 7 8d 以后 其作用温和 有累 加现象 给药小鼠睡眠醒后2h进行观察 活动自 如 自主活动数量与对照无显著差别 无明显副作用 产生 乌灵菌粉含有丰富的氨基酸 维生素和各种营 养物质 氨基酸组成中以谷氨酸 Glu 含量最高 Glu不仅参与能量代谢和蛋白质合成 在生理浓度 下 还参与神经突触间兴奋性信息的传导 与长时程 突触增强现象 L TP 密切相关 从而促进学习记忆 形成 Glu经GAD的作用又能生成抑制递质GA2 BA 乌灵菌粉含有大量Glu和小量GABA 为探讨 菌粉对中枢神经的作用 我们在给小鼠连续服用菌 粉后用同位素示踪法观察了3H2Glu 3H2GABA的脑 673 Chin Pharm J 1999 June Vol 34 No 6 中国药学杂志1999年6月第34卷第6期 1995 2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co Ltd All rights reserved 内含量 发现注入同位素30min后 二者含量均明显 增加 表明乌灵菌粉中某些有效成分可能改变了脑 组织对Glu和GABA的通透性 有选择性的增加对 其摄取量 从而达到调节中枢神经系统功能的作用 体外试验还表明 乌灵菌粉所含Glu基质和维生素 B6可明显增强GAD的活性 从而增加脑内GABA 的合成 在体试验进一步表明 连续服用该药可激 活GABA抑制性受体 使GABA更好地发挥抑制性 神经介质的作用 这些均可能是乌灵菌粉镇静作用 的机理所在 参考文献 1四川省中医中药研究所主编 四川中药志 第2册 成都 四川 人民出版社 1960 1434 2徐叔云 卞如濂 陈修主编 药理实验方法学 第2版 北京 人 民卫生出版社 1991 657 658 3夏宗勤主编 实验核医学与核药学 上海 同济大学出版社 1989 255 4Kimura H Kuriyama K A new microassay method for L2glutamic acid decarboxylase GAD activity Jpn J Pharmacol 1975 25 189 5徐叔云主编 中药临床药理 北京 华夏出版社 1997 1217 1218 收稿 19982122 26 齐墩果酸对肝损伤小鼠血清及肝细胞培养液转氨酶作用的研究 3 王晓峰 李继尧1 于吉人1 贵阳550004贵阳医学院生理教研室 1北京100083北京医科大学生理系 摘要 目的 观察齐墩果酸 OLA 对小鼠肝内谷丙转氨酶 AL T 及谷草转氨酶 AST 的直接作用 方法 利用醋氨酚在整体 小鼠肝脏及原代培养的小鼠肝细胞造成损害以取得AL T及AST样品 随后用不同浓度的OLA混悬液分别与AL T及AST样 品作用 并测定作用前后这两种酶活性的变化 结果 OLA对AL T具有直接的抑制作用 而对AST则没有类似作用 结论 本实验结果提示 在对OLA的肝保护机制进行研究时以及临床应用OLA治疗肝炎时 应慎用AL T作为判定肝损害的指标 关键词 齐墩果酸 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 酶活性 Effects of oleanolic acid on the activity of aminotransferases in the serum of liver injury mice and the culture fluid of mice s damaged liver cells Wang Xiaofeng Wang XF Li Jiyao Li J Y Yu Jiren Yu JR Physiology Department Guiyang Medical College Guiyang550004 ABSTRACT OBJECTIVE To observe the effects of oleanolic acid OLA on the activity of alanine aminotransferase AL T and as2 partate aminotransferase AST in mouse liver METHODS Mouse liver damage and primarily cultured mouse hepatocyte injury were induced by acetaminophen AAP to get the AL T and AST samples Then OLA with different concentrations reacted with the AL T and AST samples The act