抗生素对双歧杆菌影响的观察.doc

抗生素对双歧杆菌影响的观察 提要本文观察了双歧杆菌对临床常用杭生素的敏感性及其L型形成和抗生素对动物体内双歧杆菌的影响，发现双妓杆菌对多种杭生素耐药或易形成L型。动物口服双歧杆菌同时给杭生素,6天后其龚便中仍有大量双歧杆菌或双歧杆菌L型存在，表明双歧杆菌可通过多种机制逃避杭生素的作用，在机体肠道内长期存在。关键词双歧杆菌杭生素细菌L型 双歧杆菌是人类肠道中的正常菌群，其能合成人体必需的某些营养物质，调整肠道菌群平衡，拮抗多种肠道病原菌进入肠道定植，具有抗感染，抗癌以及益寿延年等作用，而成为微生态制剂的主要菌群，。通常认为服用微生态制剂同时使用抗生素，将影响双歧杆菌在机体肠道内的生存。但在服用微生态制剂的同时若发生其他感染则导致治疗困难或担心使用抗生素后双歧杆菌不能在机体内继续生存。我们通过体外和体内实验观察了临床常用的某些抗生素对双歧杆菌的影响，现报道如下:1. 3药敏纸片:杭州微生物研究所提供。 1.4实验动物:小白鼠，昆明种，501材料与方法 1. 1菌种 青春双歧杆菌，贵阳科福药业中心提供。接种PG液z 37 C振摇培养24小时备用。 1. 2培养基 1.2.1双歧杆菌培养基:10%脱纤维羊血布氏肉汤琼脂平板。 1. 2. 2 L型平板:含NaCI浓度分别为2%或5%的LEMo只雌雄各半，体重25-30克，贵阳医学院实验动物中心提洪。 1. a诱导剂:青霉素G5万/ml ,梭节青霉素30mg; ml，按文献cap制成抗生素纸片。 1. 6抗生素:麦迪.霉素、四环素，经氨节青霉素，乙酞螺旋霉素口服剂。 1. 7实验方法 1.7.1药敏试验 取双歧杆菌菌液0. lml接种双歧杆菌培养基平板并徐布均匀，放药敏纸片后置厌氧罐(化学产气法)内37培养24小时观察结果。 1.7.2细菌L型的诱导和药敏试验 取双歧杆菌菌液0. lml分别接种2%或50 0NaCI LEM平板，涂布均匀，放置诱导剂纸片，置:烛缸内37培养。每日显微镜低倍镜下观察L型菌落。L型生长后，取L型菌落(原代)作琼脂扩散法药物敏感试验。中国微生态学杂志1996年第8卷第1期 1.7.3动物实验 50只动物随机分为5组，分别标记麦迪霉素、乙酸螺旋霉素、四环素、轻氨节青霉素和对照组。按文献c稀释抗生素并喂饲动物，每日上午服双歧杆菌菌液0. 5m1/只，下午服抗生素。对照组只给菌液，不给抗生素。 1.7.4粪便双歧杆菌的检查 给药前和给药后第4天、第6天分别取各组小鼠粪便，用灭菌生理盐水稀释粪便至10-5 (mg/ml)，取0. lml接种双歧杆菌培养基，置厌氧罐内37培养48小时观察结果。 1.7.5粪便L型的检查 取用药第6天的轻氨节青霉素组和对照组小鼠粪便稀释至，j 10-5(mg/ml),取0. lmi接种5 jIvacl LEM平板，涂布均匀，置烛缸内37 C培养。若有L型生长，取L型菌落接种LEM传代返祖后根据形态、培养及糖发酵特征鉴定菌种。2结果 2. 1双歧杆菌药物敏感性 培养24小时测量各药敏纸片周围抑菌圈直径，可见双歧杆菌对氯霉素、四环素、乙酸螺旋霉素、洁霉素、麦迪霉素、经氨节青霉素、红霉素敏感，对氨节青霉素、庆大霉素、先锋霉素5、痢特灵、多粘菌素B、丁胺卡那霉素、青霉素G、新霉素、环丙沙星、链霉素、复方新诺明、苯哇青霉素耐药。 2. 2双歧杆菌L型形成及药物敏感性 培养48小时后，不同N aCl浓度的LEM平板上可见两种抗生素纸片周围抑菌圈内密布典型的油煎蛋样菌落。L型原代对庆大霉素、四环素、洁霉素、麦迪霉素、氟嗦酸、复方新诺明敏感，对多粘菌素B、链霉素、青霉素G耐药。传5代的双歧杆菌L型对庆大霉素、四环素、洁霉素、多粘菌素B、麦迪霉素、氟嗓酸、复方新诺明、链霉素敏感，对青霉素G耐药。 2. 3动物粪便中双歧杆菌含量 用药前各组动物粪便中未检出双歧杆菌。服药后不同时间各组动物粪便中双歧杆菌平均菌落数分别为，麦迪霉素:第4天15 X 10个/g，第6天9X10，个/8，无显著差异(P0. 05);四环素:第4天12 X 10，个/g，第6天9X10个旭，无显著差异(0. 05);经氨节青霉素:第4天11 X 10个/g，第6天6X10，个/g，有显著差异P0. 02;乙酸螺旋霉素:第4天10X10，个/g，第6天29X10个i，无显著差异( 0. 05);对照组:第4天13X10个/g，第6天2=! X 10个/g，无显著差异(0. 05)。用药6天后轻氨节青霉素组和麦迪霉素组细菌数较对照组细菌数明显减少，具有显著差异(P0. 05)。 2. 4粪便中细菌L型 对照组未见L型菌落。轻氨节青霉素组可见大量颗粒样和油煎蛋样L型菌落，返祖菌鉴定为双歧杆菌。 3讨论 微生态制剂是以活的有益微生物及其代谢产物为主要成分，故认为不宜与抗生素同时使用，否则将杀灭微生态制剂中的有益微生物而难以获得疗效。但由于细菌具有变异性，其可通过发生耐药性变异或细胞壁缺陷变异等机制逃避抗生素的杀伤作用。本文结果表明，双歧杆菌对多种抗生素形成了耐药性，以致中国微生态学杂志19ss年第a卷第1期这些抗生素不能影响双歧杆菌的生存。虽然用双歧杆菌敏感的抗生素给动物喂饲，亦不能影响动物体内双歧杆菌的生存。可能同口服的双歧杆菌数量较大，药物进入机体后被稀释以致不能有效杀灭双歧杆菌有关。 细菌L型是细菌受日内酞胺抗生素作用后最常见的变异生存形式。L型的形成使细菌能逃避某些抗生素的杀伤而得以保留和菌种延续。受抗生素作用后双歧杆菌形成了L型而对日内酞胺抗生素不敏感，因此能够在动物肠道内生存。这些L型在常规细菌学检查中通常漏诊，成为轻氨节青霉素组细菌型检查数量减少的原因。当机体内抗生素浓度降低后，双歧杆菌L型重新合成细胞壁而返祖，其经过一段时间的生长繁殖，可重新建立正常优势菌群。因此我们认为.临床常用剂量的抗生素短时期使用不会对肠道内双歧杆菌的生存产生显著的影响，双歧杆菌可通过多种机制逃避抗生素的作用而在体内长期存在。在检查肠道菌群时，还应当考虑到细菌L型的存在形式。参考文献幻麦光大等。青春双歧杆菌及其酸乳剂型研 制。中国微生学杂志，1993;5(3):9-12.2王和，等。用非高渗透压培养基从慢性胆 囊炎胆囊分离细菌L型。中华医学检验杂 志,1994;17(5):263-265.r3王和。L型鸡蛋培养基的制备和细菌L型 的诱导。贵阳医学院学报，1988;13(i):q2_ 4JC4)药理学实验编写组。药理学实验。第土版， 北京:人民卫生出版社,19a5:z4o, (收稿日期95-9-13)OBSERVATION ON THE EFFECT OF ANTIBIOTICS UPON BIFOBACTERIiChere Gheeghtmy，et al. Deartraeul of microbiology， Gri. 3-asag Medical College. Ghi 3a.g 550001Abstract It was found that the Bifidobacteria adolescentis was resistant to many kindsof antibiotics and would be induced into L-forms enormously when exposed to some an-tibiotics in vivo. Both a great deal of Bifidobacterium and the L-forms derived from thebacterium could be isolated untill six days after the animals being given Bifidobacteriumand antibiotics simultaneously. This showed