卵巢肿瘤的超声造影与微血管密度的相关性研究.doc

卵巢肿瘤的超声造影与微血管密度的相关性研究作者：宋丹阳,史鹏丽,史铁梅,李红光单位：1.辽宁省沈阳市妇婴医院 超声科,110014；2.中国医科大学附属盛京医院 超声科,辽宁 沈阳 110013；3.辽宁省妇婴医院 超声科，辽宁 沈阳,110013【摘要】 目的 探讨卵巢肿瘤超声造影时间强度曲线定量参数与微血管密度（MVD）的相关性。方法 应用编码相位反转显像（CodePI）技术对23例常规超声检查发现的附件区囊实混合性肿物或实性肿物行超声造影检查，通过声学定量软件分析时间-强度曲线定量参数；利用免疫组化法分析卵巢肿瘤的微血管密度，比较卵巢肿瘤超声造影定量参数与微血管密度之间的相关性。结果 （1）卵巢肿瘤良性组与恶性组微血管密度（MVD）差异较大，卵巢肿瘤恶性组微血管密度（MVD）大于良性组（P<0.05）。（2）卵巢肿瘤超声造影时间强度曲线各参数与MVD相关性分析：峰值强度与MVD呈显著性正相关，而峰值时间与MVD呈显著性负相关，相关系数分别为0.756、-0.710（P<0.05）。始增时间和始增强度与MVD无显著性相关（P>0.05）。结论 卵巢肿瘤超声造影时间强度曲线定量参数峰值强度、峰值时间与MVD之间存在相关性，提示超声造影定量分析可用于术前活体评价卵巢肿瘤血管生成情况。 【关键词】 卵巢肿瘤； 超声造影； 血管生成； 微血管密度Contrastenhanced sonography of ovarian tumors and the correlation with microvessel density SONG Danyang，SHI Pengli，SHI Tiemei，et al.（Shenyang Maternity and Infant Health Hospital,Liaoning 110014,China） 【bstract】 Objects To investigate the correlation between the parameters of timeintensity curve and microvessel density (MVD).Methods 23 women with suspected complex adnexal masses underwent contrastenhanced ultrasound (CEUS) examination by use of the Code PI mode，with parameters of timeintensity curve (TIC) of contrastenhanced ultrasound analyzed by the TIC soft. Immunohistochemistry was performed to evaluate the level of MVD in ovarian tumors. The relationship between the parameters of timeintensity and the level of MVD was then analyzed.Results （1）The MVD of malignant group was higher than that of benign group. The difference between them was significant（P<0.05）.（2）The peak intensity and the peak time of timeintensity curve were correlated with MVD,and the correlation coefficients were 0.756 and -0.710 respectively(P<0.05). There was no relationship between basic time, basic intensity and MVD(P>0.05). onclusion The peak time and the peak intensity of CEUS timeintensity curve of ovarian tumors were correlated to MVD, which indicates the parameters of CEUS timeintensity curve obtained before operation can evaluate angiogenesis of tumors. 【Key words】 Ovarian tumors; Contrastenhanced sonography; Angiogenesis; Microvessel density 超声造影(contrast enhanced ultrasound, CEUS)是当前最新的显示血管灌注的方法，超声造影的发展使医学超声开始进入人体微循环系统诊断及疾病治疗的新阶段。微血管密度（microvessel density,MVD）即平均每平方毫米肿瘤面积内的血管数，这一病理学指标被认为是评价肿瘤血管生成的“金标准” 。CD34是目前提供的较敏感的血管内皮标记物，应用CD34对肿瘤组织切片进行免疫组化染色并测量是目前常用的评价肿瘤血管生成情况的方法。本课题探讨卵巢肿瘤超声造影时间强度曲线定量参数与MVD的相关性及临床价值。 1 对象与方法1.1 对象 本组23例为2007年1月2007年12月就诊于中国医科大学附属盛京医院常规超声检查发现附件区囊实混合性肿物或实性肿物患者，年龄1870岁，平均年龄48岁。23例患者均在超声造影检查1周内行开腹或腹腔镜手术治疗并获得病理诊断。 1.2 方法 1.2.1 仪器与试剂 采用美国GE公司LOGIQ9彩色超声诊断仪，造影探头为4C凸阵探头，频率24 MHz，超声造影采用编码相位反转技术和声学定量时间-强度曲线（TIC）分析软件。能量输出设置为4%-5%，机械指数（MI）设置为0.080.10。超声造影剂：采用意大利Bracco公司生产的第二代新型超声微泡对比剂声诺维（SonoVue）。研究中所使用SP超敏免疫组化试剂盒及鼠源性CD34内皮细胞标记单克隆抗体为北京中山生物技术有限公司产品。 1.2.2 检查方法 （1 ）图像分析：由超声扫描仪内置的软件自动生成时间-强度曲线（TIC）。由TIC获得以下参数：始增时间、峰值时间、始增强度、峰值强度。（2 ）病理免疫组化染色及结果判定 。免疫组化方法：收集术后肿瘤组织标本蜡块, 各制备厚4 μm 切片, 采用SP( 链霉素抗生物蛋白过氧化酶)免疫组织化法染色。以PBS（磷酸盐缓冲剂）代替第一抗体作阴性对照，阳性对照采用已知的阳性切片。血管判断标准：一抗以鼠抗人CD34单克隆抗体行免疫组化染色，将与邻近肿瘤细胞和结缔组织分离的被染成棕色的内皮细胞、内皮细胞簇或分支血管结构视为一个微血管，凡有明显肌层的血管、硬化区的血管和管腔大于8个红细胞的血管均不计数在内。微血管密度测定：Weider等报道的方法进行, 先在低倍镜（X100）下扫查整个切片, 寻找3 个血管高密度区即“热点”，再在高倍镜下（X400）计数这3 个视野被染成棕色的微血管数, 取3个数值的平均值作为MVD值。 1.3 统计学方法 数据采用SPSS11.0软件进行分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，样本中两均数的比较采用t检验，两变量资料相关分析用Spearman相关分析。P<0.05为差异具有显著意义。 2 结果 2.1 卵巢良/恶性肿瘤MVD的关系 卵巢肿瘤良性组与恶性组MVD差异较大，卵巢肿瘤恶性组MVD33.82±8.24大于良性组14.46±6.52（P<0.05），见表1，图1图2。表1 卵巢良恶性肿瘤的MVD、峰值强度、峰值时间比较注：与良性组比较，*P<0.05 2.2 卵巢肿瘤时间强度曲线各参数与MVD相关性分析 卵巢肿瘤CEUS时间强度曲线峰值强度与MVD呈显著性正相关，而峰值时间与MVD呈显著性负相关，相关系数分别为0.756、0.710(P<0.05)。卵巢肿瘤CEUS时间强度曲线始增时间、始增强度与MVD无显著性相关（P>0.05)，见表2，图3图6。表2 卵巢肿瘤超声造影时间强度曲线参数与MVD的相关性 3 讨论 上世纪70年代，Folkman等提出“肿瘤生长和转移都依赖于新生血管的形成”的观点。肿瘤血管生成是指在原有微血管网的基础上通过内皮细胞的“芽生”方式形成新生血管的过程。实体瘤的生长可分为血管前期和血管期两个阶段。近年研究表明，肿瘤（包括血液系统肿瘤）生长和转移需要新生血管的持续生长2。正如其它实体性肿瘤一样，卵巢肿瘤的进行性生长依赖瘤细胞诱导产生的新生血管网的建立，以满足瘤体不断增殖的营养和代谢需要，同时还不断地向宿主输出肿瘤细胞，导致恶性肿瘤的生长和转移。 微血管密度（MVD）是评价肿瘤血管生成的“金标准”。Weidner 等3曾证实瘤内微血管密度是早期乳腺癌的一项独立的预后因素，微血管密度越大，术后发生转移的几率越高，生存期越短。因此肿瘤内血管数量的多寡，在一定程度上反映着肿瘤的某些生物学特性，包括增殖、分裂、浸润、转移等。已证实恶性肿瘤内微血管密度随临床期别增加而增加，与细胞分化亦相关，细胞分化程度低则MVD高。本研究用CD34染色测定卵巢肿瘤组织中MVD，结果显示恶性肿瘤内的平均MVD（33.82±8.24）明显高于良性肿瘤平均MVD（14.46±6.52），二者差异具有显著性，与Oree4等报道相一致。这提示MVD参与卵巢恶性肿瘤的演变过程，肿瘤内MVD差异是鉴别卵巢肿瘤良恶性的基础。 近年来，国内外学者对某些肿瘤的超声造影所得的灌注参数与免疫组化所获得MVD值之间进行了许多相关性研究取得了一定的进展57。本研究应用超声造影时间强度曲线提供的定量参数和组织学MVD进行相关分析。结果表明，卵巢肿瘤CEUS峰值时间与MVD呈显著性负相关（r=-0.710,<0.05），即CEUS峰值时间随微血管密度下降而延长。峰值强度与MVD呈显著性正相关（r=0.756,<0.05）,即峰值强度随微血管密度增加而增强。肿瘤血管生成活性越高，新生微血管越多，即微血管密度越大，供应其血流的小动脉、小静脉也越多，因而进入肿瘤血管床的微泡灌注量大，表现在超声造影峰值强度大，而且单位时间内的微泡流量大，即更短的时间内到达峰值强化，表现在超声造影峰值时间短。因而超声造影的峰值时间、峰值强度在一定程度准确地反映了肿瘤的MVD数值。本次研究与超声造影在其它肿瘤中的研究结果一致。付文生等8研究肝细胞癌超声造影峰值时间与微血管密度相关性，认为超声造影的峰值时间与微血管密度呈显著性负相关。D’Onofrio等9对比分析了超声造影与螺旋CT对胰腺癌中血管生成的评估，发现超声造影与胰腺癌中的血管生成具有显著相关性，而且相关程度优于螺旋CT与血管生成的相关性。超声造影由于可以反映组织血流灌注情况，所以在检测肿瘤血管生成方面具有很大的潜力，其通过检测超声造影定量参数对活体内肿瘤组织的微血管生成情况进行判定，进一步推测肿瘤的生长、浸润、转移等生物学活性。也证明灰阶超声造影成像检查使得临床医师在术前或无法获得肿瘤标本的情况下可以较准确地获得肿瘤微血管信息，从而为临床医师判断病人的转移、预后提供有力的依据。【参考文献】1 Laforga JB，Aranda FI. Angiogenic index: a new method for assessing microvascularity in breast carcinoma with possible prognostic implicationsJ.Brest J,2000,6(2):1031072 Kerbel RS.Tumor angiogenesis: past ,present and the near future.Carcinogenesis, 2002,21(3):505515.3 Weidner N , Folkman J , Pozza F, et al. Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early stage of breast carcinoma. Journal of the National Cancer Institute, 1992, 84(5):187518864 Orre M , Rogers PA. Macrophages and microvessel density in tumors of the ovary. Gyneco ncol, 1999,73(1):47.5 Forberg F,Dicker AP,Thakur ML,et al.Comparing contrastenhanced ultrasound to immunohisochemical markers of angiogenesis in a human melanoma xenograft model:preliminary resultsJ. Ultrasound Med Biol,2002,28(4):4454