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文档简介

脊髓涂片制作及运动神经元观察实验的改进育才中学 陈维琳在中学生物实验过程中，学生观察得越深入，思维就越活跃，兴趣就越浓厚，操作技能形成的速度就越快；反之，如果学生在实验中不能有所发现，或者实验老是失败的话，他们就会越来越不喜欢实验，甚至对生物学产生厌恶情绪。因此，提高实验的成功率，让学生能够从实验中充分的体会到生命科学的奇妙，从而对生物学产生浓厚兴趣，且进一步从实验中培养学生的各种能力，那将是能让学生受益匪浅的。脊髓动物运动神经元的观察不仅让学生了解细胞形态的多样性，并且了解神经细胞的细胞体大都分布在中枢神经的灰质部分，而且学会涂片的操作技能。本实验是实验3.2观察植物细胞和动物细胞的第二部分：备制牛蛙脊髓灰质涂片。教材的实验指导要求，从牛蛙椎管中取出脊髓后用镊子挑取少许脊髓灰质放在载玻片中央，用解剖针将其涂成一薄层（书P49图3-14）。自然晾干后，滴加数滴甲基蓝染液染色12分钟，盖上盖玻片，覆以两层吸水纸，用拇指轻压，使成一层细胞的薄层，在低倍镜下观察。在低倍镜下可见到具有多个突起的神经细胞（运动神经元），如使用高倍镜可观察到更清晰的细胞结构，神经元有一个大而染色浅的细胞核，核仁清晰，染色深。通过实际操作后，发现实验方法的问题主要集中在以下几点：1 牛蛙脊髓嬉笑，挑取灰质时：常使灰质和白纸混合一起，运动神经元细胞体少，不宜观察。2 用解剖针转动将所取灰质涂成一薄层，技术含量要求太高，很难使得细胞薄成一层。但是如果不成一薄层的话，会影响后续的观察。3 神经细胞用甲基蓝染色很快就能染上蓝色，如果时间太长会使染色太深，显微镜下深蓝色一片，影响观察。建议用龙胆紫染色后立刻用清水引流几次。4 盖上盖玻片，并用拇指轻压着部并不必要，如果压片技术不好，甚至会带来负面效果，因此把盖上盖玻片并压片这部省略，吸干水后把载玻片直接放到显微镜下观察即可。修改后的实验方案：将实验材料由牛蛙脊髓改为猪脊髓，主脊髓不但容易得到，而且其直径有68mm，灰质部分清晰可见。制备猪脊髓灰质图片：为了看清骨髓灰质，可提前购买，放置冰箱中冷冻。经过冷冻后的脊髓灰质与白质两部分极易区分（图1）。在猪脊髓上找到灰质的位置，在脊髓灰质的后跟处用镊子夹取少许，贴着载玻片快速的一划而过（或者把灰质放在载玻片上，手拿盖玻片推动灰质在载玻片上移动一段距离，如图2所示）留下浅浅的痕迹即可。自然晾干后，滴加12滴甲基蓝（或龙胆紫），30秒左右用吸水纸稍微吸取染液，在一侧滴加清水，在另一侧用吸水纸引流12次，然后在低倍镜下观察。在低倍镜下可见到具有多个突起的神经细胞（运动神经元），如使用高倍镜可观察到更清晰的细胞结构，神经元有一个大而染色浅的细胞核，核仁清晰，染色深。修改之后，制作的涂片没有原方案那样要求较高的技术量，推片时只要用力均匀，角度保持不变，能把灰质推得非常均匀。染色时只要稍加注意，也不会出现一片蓝色的情况，
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