益气活血方对冠心病心气虚证大鼠模型血浆环磷酸腺苷含量的影响_马月香_邱丽芬_孔春.pdf

实验研究 DOI 10 13192 j issn 1000 1719 2015 11 064 益气活血方对冠心病心气虚证大鼠模型 血浆环磷酸腺苷含量的影响 马月香1 邱丽芬2 孔春明3 1 山东中医药大学基础医学院 山东 济南 250355 2 江西省樟树市中医院内科心脑血管科 江西 樟树 331200 3 山东中医药大学 2013 级硕士研究生 山东 济南 250355 摘要 目的 探讨益气活血方对经冠状动脉结扎联合左旋硝基精氨酸灌服建立的冠心病心气虚证病证结合大鼠模 型血浆环磷酸腺苷含量变化的影响及意义 方法 将大鼠随机分为空白组 假手术组 模型组 西药组和益气活血方低 中 高剂量组 西药组在造模后行盐酸地尔硫卓治疗 中药组行不同浓度的益气活血方治疗 所有大鼠最后取腹主动脉 血检测血浆环磷酸腺苷含量 结果 与模型组比较 益气活血方组血浆环磷酸腺苷含量明显降低 P 0 05 其中益气 活血方高剂量组差异最大 P 0 01 西药组血浆环磷酸腺苷含量比模型组降低 但降低幅度较小 P 0 05 结论 益气活血方能降低冠心病心气虚证大鼠血浆环磷酸腺苷含量 比盐酸地尔硫卓影响更大 降低大鼠环磷酸腺苷含量可能 是其作用机制之一 关键词 益气活血方 冠心病 环磷酸腺苷 中图分类号 285 5文献标志码 A 文章编号 1000 1719 2015 11 2216 03 Yiqi Huoxue Formula on Plasma Cyclic Adenosine Monophosphate cAMP for Coronary Heart Disease CHD Heart Qi Deficiency Syndrome ats Model MA Yuexiang1 QIU Lifen2 KONG Chunming3 1 Basic Medical College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine Ji nan 250355 Shandong China 2 Jiangxi zhangshu Traditional Chinese hospital internal medicine of heart head blood vessel Zhang shu 331200 Jiangxi China 3 Postgraduate Student in Shandong University of Traditional Chinese Medicine Ji nan 250355 Shandong China Abstract Objective To discuss Yiqi Huoxue Formula on plasma cyclic adenosine monophosphate cAMP of the coronary heart disease CHD heart qi deficiency syndrome rats model by coronary artery ligation combined sinistral nitro arginine irriga tion suits Methods ats were randomly divided into blank group and control group model group and western medicine group and Yiqi Huoxue Formula high medium and low dose groups Western medicine group used diltiazem hydrochloride and Chinese medi cine groups were given different concentrations of Yiqi Huoxue Formula Take abdominal aorta of rats blood to detect plasma aden osine phosphate content esults Compared with model group Yiqi Huoxue Formula groups cAMP content was significantly de creased P 0 05 among which the most obvious difference was in Yiqi Huoxue Formula high dose group P 0 01 The western medicine group s cAMP content was lower than that of the model group but the reduce degree was the smallest P 0 05 Conclusion Yiqi Huoxue Formula can reduce cAMP content of qi deficiency syndrome in rats with coronary heart disease and has more influence than diltiazem hydrochloride educing rats cAMP levels may be one of its mechanisms Key words Yiqi Huoxue Formula coronary heart disease CHD cyclic adenosine phosphate 收稿日期 2015 04 28 基金项目 国家自然科学基金面上项目 81273625 作者简介 马月香 1964 女 山东阳谷县人 教授 硕士研究生导师 博士 研究方向 中医藏象理论 随着人口老龄化的加剧 心脑血管疾病发生率逐 渐增高 冠心病已经成为影响人们生存质量的重要疾 病之一 冠心病的基本病机为本虚标实 心气虚是冠 心病发生发展的最主要病理 本实验通过冠状动脉结 扎联合左旋硝基精氨酸灌服建立冠心病心气虚证病证 结合大鼠模型 运用益气活血方进行治疗 并设立盐酸 地尔硫卓治疗作为对照 以期探讨益气活血方对模型 大鼠血浆环磷酸腺苷 cAMP 含量的影响及意义 1材料与方法 1 1动物SPF 级雄性 Wistar 雄性大鼠 140 只 平均 体重 200 20 g 购于北京维通利华实验动物技术有 限公司 动物生产许可证号 SCXK 京 2012 0001 1 2中药人参 黄芪 丹参 川芎中药饮片 均由山 东中医药大学附属医院提供 1 3主要试剂和仪器大鼠 cAMP 试剂盒 南京建成 生物工程研究所提供 手术包 山东中医药大学附属医 院提供 酶标仪 深圳雷杜 ayto 公司 左旋硝基精氨 酸 L NNA Sigma 公司提供 盐酸地尔硫卓 天津田边 制药有限公司提供 1 4益气活血方汤剂的制备据益气活血方人参 黄 6122 辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 11 期 芪 丹参 川芎以 3 2 2 1 的比例称取各饮片 加水适 量 浸泡半小时以上 武火加热至药液沸腾后改为文火 保持微沸 20 min 过滤 药渣再加水适量 武火加热至 沸腾 文火保持微沸 15 min 过滤 合并两次煎液 浓 缩 放置室温 离心 上清液浓缩 定容至每毫升分别含 生药 0 9 g 1 8 g 2 7 g 置于 20 冰箱冻存备用 1 5大鼠模型建立方法参考文献 1 大鼠购置后适 应性喂养一周 手术组和假手术组大鼠术前禁食12 h 不禁水 大鼠称重后经 10 水合氯醛溶液 0 33 mL 100 g 腹腔麻醉 等待大鼠麻醉效果满意后将大鼠于仰 卧位固定于大鼠手术板上 暴露前胸 手术区备皮 碘 伏消毒手术区皮肤 铺无菌洞巾 于大鼠左胸壁三 四 肋间切开皮肤和筋膜 沿肌肉走行钝性分离各层肌肉 组织 显露肋骨和肋间肌后钝性分离并用开睑器撑开 胸壁 迅速暴露心脏 撕开心包膜 于冠状动脉左主干 处 肺动脉圆锥和左心耳之间 左心耳下方约 2 3 mm 处以左冠状动脉为标志 在冠状动脉左前降支约中下 部位处以 3 0 号手术缝合线结扎 从左心耳下缘中 点处进针 肺动脉圆锥底部靠冠状静脉缘出针 结扎后 可见左室壁显苍白色或紫黯色 同时活动减弱 心电 图显示 ST 段抬高 表明结扎成功 迅速将心脏置回入 胸腔 将肋间肌连续缝合 双手挤压大鼠胸壁迅速闭合 胸腔 皮肤剪开处对合捏起 间断缝合 待大鼠自主呼 吸稳定后拔出气管 移除呼吸机和四肢心电图电极 于切口处涂以青霉素溶液预防感染 并于术后 5 d 连 续注射青霉素 4 万单位每天预防感染 假手术组大鼠 以同样方式打开胸腔 暴露心脏 在找到左冠状动脉前 降支时只行左冠状动脉前降支穿线但不进行结扎 术后大鼠于常规喂养 1 周后 参考文献 2 手术组 以 15 mg kg d 左旋硝基精氨酸分两次腹腔注射 4 周 空白对照组和假手术组给予生理盐水1 mL 腹腔注 射 4 周 1 6造模后药物干预参考文献 3 造模成功后西药 组每日按体重以 30 mg kg 灌服盐酸地尔硫卓混悬液 1 6 mL 100 g 中药低 中 高剂量组分别灌服低 中 高不同浓度梯度的中药煎剂 1 6 mL 100 g 空白组 假 手术组 模型组以 1 6 mL 100 g 灌服生理盐水 周期 均为两周 1 7大鼠一般情况观察模型组大鼠饮食量减少 活 动量减少 缩肩拱背 遇刺激后反应不灵敏 喜卧 皮毛 黯淡枯槁毛糙蓬松 口鼻部润泽呈暗红色 舌色紫黯 舌下脉络扩张 青紫粗长 眼球 爪甲暗红 耳廓紫黯 尾根静脉青紫 益气活血方治疗组饮食量正常 活动 自如 遇刺激后反应灵敏 皮毛柔顺亮白 口鼻部润泽 呈粉红色 益气活血方高剂量组大鼠舌色红润 舌下脉 络清晰无明显增粗增长 眼球 爪甲红润 耳廓润泽 1 8大鼠各血浆指标的检测大鼠称重后经 10 水 合氯醛溶液 0 33 mL 100 g 腹腔麻醉 等待大鼠麻醉 效果满意后将大鼠于仰卧位固定于大鼠手术板上 剪 开腹部后找到腹主动脉 抽取腹主动脉血 4 mL 立即 低温高速离心 取上层血浆 进行 cAMP ELISA 试剂盒 检测 1 9统计学方法以 SPSS 17 0 软件进行统计分析 采用单因素方差分析 计量资料以珋x s 表示 P 0 01 为差异具有高度显著性 P 0 05 为差异具有显著性 2结果 2 1各组大鼠血浆环磷酸腺苷 cAMP 值比较见 表 1 表 1各组大鼠血浆环磷酸腺苷值比较 pmol L 珋 x s 检测项目空白组假手术组模型组西药组中药低剂量组中药中剂量组中药高剂量组 CAMP 值22 3 4 608 25 1 5 32430 71 10 451 29 080 6 48027 978 3 95627 8 6 36123 2 5 223 注 模型组与空白组比较 P 0 01 中药高剂量组与模型组比较 P 0 01 模型组与假手术组比较 P 0 05 如表 1 中可见 模型组大鼠血浆环磷酸腺苷值较 空白组显著升高 P 0 01 各中药组均能降低造模 后大鼠血浆环磷酸腺苷值 其中中药高剂量组最为显 著 与模型组比较有显著差异 P 0 01 模型组大鼠 血浆环磷酸腺苷值较假手术组有差异 P 0 05 3讨论 心气虚是冠心病发生发展的重要因素 心气亏虚 推动血行无力 气行则血行 气滞则血瘀 血瘀又进一 步耗伤心气 血瘀与心气虚相互影响 相互作用 互为 因果 冠心病心气虚证的治疗不仅要补气以行血 还 要活血化瘀以助血行 使血脉通利 环周不休 本实验通过对大鼠进行冠状动脉左前降支进行结 扎以阻断心肌血供模拟临床冠心病因冠脉狭窄造成的 病理损伤 并联合升压药物左旋硝基精氨酸灌服建立 持续性稳定性高血压以模拟冠心病的重要危险因素 高血压 以此建立冠心病心气虚证大鼠模型 心气虚 证临床主要表现为心悸胸闷 气短 自汗 疲乏无力动 则加重 舌淡 脉微细等证候群 4 实验中以量化的诊 断指标以替代临床四诊资料以平价动物模型的辨证 本实验造模后大鼠体重减轻 摄食量减少 抓取抵抗力 弱 蜷缩 毛色发黯无光泽 口鼻部黯红色 眼球 爪甲 黯红 耳廓紫黯 尾根静脉青紫 大鼠一般情况反映其 心功能有所下降 冠心病心气虚证模型建立成功 益 气活血方中人参用量最大 益气作用最强 人参对血管 和心肌有直接作用 增强心肌收缩力 主要成分人参皂 苷能够改善心肌缺血 对抗心肌缺血再灌注损伤 5 黄芪增加冠脉血流量 改善心肌缺血缺氧 通过抑制钙 调蛋白和磷酸二酯酶活性 增强心肌收缩力 改善心功 能 6 丹参扩张冠状动脉增加冠脉血流改善心功能的 同时不增加心肌耗氧量 7 川芎活血行气 增强心肌 收缩力 扩张血管 增加心 脑血供 通调血脉 减轻心 脏前后负荷 8 cAMP 具有舒张血管 正性肌力 营养心肌 以及 抗心律失常等作用 在体内能够增强心肌细胞抗缺血 缺氧以及抗损伤的能力 cAMP 可以通过激活依赖性 蛋白激酶 进而使细胞膜上的 L 型钙离子通道磷酸 化 使收缩期心肌细胞内钙离子内流增加并释放肌浆 网上的钙离子 促进兴奋收缩耦联 增强心肌收缩力 7122 辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 11 期 使心输出量增加 另一方面 cAMP 还能扩张外周血 管 降低心脏前后负荷 降低射血阻抗 使心排出量增 加 改善心功能 有关研究发现 细胞内 cAMP 含量降 低与心血管疾病的发生密切相关 补充外源性抗血小 板聚集物质或环磷酸腺苷能够提高细胞内 cAMP 含 量 从而减少血小板聚集 减轻心脏负荷 外源性 cAMP 进入体内后能够间接地激活蛋白激酶增加磷酸 化酶作用 可在缺氧条件下促使糖原分解以供能 使呼 吸链氧化酶活性增强 使心肌缺氧得以改善 9 10 本实验通过冠状动脉结扎联合左旋硝基精氨酸灌 服建立大鼠冠心病心气虚证病证结合模型 并采用盐 酸地尔硫卓和益气活血方低 中 高剂量灌服进行干预 治疗 结果显示益气活血方能够降低模型大鼠血浆 cAMP 含量 作用比盐酸地尔硫卓明显 尤其中药高剂 量组最为显著 说明益气活血方能够一定程度上降低 模型大鼠血浆 cAMP 值 其改善模型大鼠心功能的作 收稿日期 2015 04 30 基金项目 国 家 重 点 基 础 研 究 发 展 计 划 973 计 划 资 助 项 目 2013CB531703 作者简介 刘艳阳 1988 男 湖北利川人 硕士研究生 研究方向 中 医病证结合规律研究 通讯作者 李峰 1966 男 山西大同人 教授 博士研究生导师 博 士 研究方向 中医病证结合规律的研究 用可能在于其在一定程度上降低 CHD 心气虚证大鼠 血浆 cAMP 浓度 减轻或避免了蛋白激酶的过度激活 减轻磷酸化酶的作用 维持心肌兴奋收缩耦联的正常 降低心肌细胞耗氧量 改善心功能 参考文献 1 李贻奎 宁可永 梁嵘 等 大鼠冠状动脉结扎心肌缺血模型方法 的改进 J 中国新药杂志 2005 14 4 427 428 2 高连如 赵云涛 石湘云 等 左旋硝基精氨酸诱导大鼠持续性高 血压 J 基础医学与临床 2000 15 3 50 53 3 丁春梅 施俊晶 王寅 等 地尔硫卓治疗老年重症高血压的疗效 分析 J 西部医学 2013 25 4 536 537 4 许丽梅 赖仁奎 心气虚证与神经内分泌免疫调节关系探析 J 中华中医药学刊 2007 25 1 146 148 5 周光珍 人参治疗气虚欲脱证功效研究简况 J 实用中医内科杂 志 2014 28 2 177 178 6 张蔷 高文远 满淑丽 黄芪中有效成分药理活性的研究进展 J 中国中药杂志 2012 31 21 3203 3205 7 王德序 丹参对高血压心室重构患者的影响研究 J 实用心脑肺 血管病杂志 2012 20 5 853 854 8 徐彤彤 莫碧文 阳耀忠 等 川芎素对冠心病血浆脂质过氧化物 及血流动力学影响 J 华夏医学 2001 14 6 775 776 9 王茜 林焕冰 徐江平 等 cAMP 信号分子在缺血后适应心肌保护 机制中的作用 J 中国病理生理杂志 2011 27 8 1496 1501 10 彭应心 单江 薛浩 等 儿茶酚胺 B 受体 cAMP 系统在高血 压 左室重构中的生物学作用 J 中国病理生理杂志 2003 19 5 699 701 DOI 10 13192 j issn 1000 1719 2015 11 065 内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型的建立 刘艳阳 李峰 刘晶 马捷 吴凤芝 杨茜 刘燕 北京中医药大学 北京 100029 摘要 目的 探讨内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型的建立方法并进行模型的评价 方法 运用 2 蔗糖溶液灌胃并复合小平台站立法制作内脏敏感增高型功能性消化不良脾虚证动物模型 通过观察大鼠的一般情 况 运用 ELISA 试剂盒检测血清乳酸脱氢酶 血清 D 木糖排泄率 血清胃动素的含量 对此模型进行评价