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文档简介

HMWDNA的抽提 一 药品的配制 NIB nucleiisolationbuffer 10mMTris HCl pH8 010mMEDTA pH8 0100mMKCl0 5M蔗糖4mM亚精胺1mM精胺NIBT NIB 10 Triton X 100 NIBM NIB 0 1 巯基乙醇 用NIB配制1 低熔点琼脂糖 蛋白酶K溶液 0 5MEDTA 1 月桂酰肌胺酸 用NaOH调节pH到9 2 使用之前加蛋白酶K到1mg mL 50mM苯甲基磺酰氟 溶于乙醇 TE 10mMTris HCl pH8 01mMEDTA pH8 0T10E10 10mMTris HCl pH8 010mMEDTA pH8 0 二 实验步骤 将 80 保存的样品浸泡在NIB中解冻并切成小片 取9克解冻的样品于研钵中磨碎 样品预先用40mlNIB浸泡 再向研钵中加入50mLNIB 冰上放置15min 期间不时轻轻摇动 用四层纱布 一层mira布 纱布在上 过滤 滤液转移至三角瓶中 再用一层mira布过滤一次 滤液在冰上放置15min 不时轻轻摇动 将滤液转入2个50mL离心管 2000g4 离心15min 倒掉上清液 留少许上清在管底 轻敲离心管重悬沉淀 合并2管的重悬物到1个管中 加入50mLNIBMT混匀 2000g4 离心15min 若第一次离心的沉淀很难重悬 此次离心可适当降低速度 去上清 用0 5mLNIB重悬沉淀 45 温育5min 向悬液中加入等体积的1 低熔点琼脂糖 在45 中温育 并混匀 将混合物用移液器转移到模具里 并把模具放在冰上放置30min 选取2个模块 plug 转入2mL离心管中 加入2mL蛋白酶K溶液 50 酶解24h 更换蛋白酶K溶液再酶解24h T10E10 含
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