缓冲液配制.doc

乙醇醋酸铵缓冲液(pH3.7) ：取5mol/L醋酸溶液15.0ml，加乙醇60ml和水20ml,用10mol/L氢氧化铵溶液调节pH值至3.7，用水稀释至1000ml，即得。三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0) ：取三羟甲基氨基甲烷12.14g,加水800ml,搅拌溶解，并稀释至1000ml,用6mol/L盐酸溶液调节pH值至8.0,即得。三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.1) ：取氯化钙0.294g,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液40ml使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.1，加水稀释至100ml，即得。三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)： 取三羟甲基氨基甲烷6.06g,加盐酸赖氨酸3.65g、氯化钠5.8g、乙二胺四醋酸二钠0.37g，再加水溶解使成1000ml，调节pH值至9.0，即得。乌洛托品缓冲液： 取乌洛托品75g，加水溶解后，加浓氨溶液4.2ml，再用水稀释至250ml,即得。巴比妥缓冲液(pH7.4)：取巴比妥钠4.42g,加水使溶解并稀释至400ml，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，滤过，即得。巴比妥缓冲液(pH8.6)：取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g,加水使溶解成2000ml，即得。巴比妥氯化钠缓冲液(pH7.8)： 取巴比妥钠5.05g,加氯化钠3.7g及水适量使溶解,另取明胶0.5g加水适量，加热溶解后并入上述溶液中。然后用0.2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8，再用水稀释至500ml，即得。甲酸钠缓冲液(pH3.3) ：取2mol/L甲酸溶液25ml，加酚酞指示液1滴，用2mol/L氢氧化钠溶液中和，再加入2mol/L甲酸溶液75ml,用水稀释至200ml,调节pH值至3.253.30,即得。邻苯二甲酸盐缓冲液(pH5.6)： 取邻苯二甲酸氢钾10g，加水900ml,搅拌使溶解，用氢氧化钠试液(必要时用稀盐酸)调节pH值至5.6,加水稀释至1000ml，混匀，即得。枸橼酸盐缓冲液： 取枸橼酸4.2g,加1mol/L的20乙醇制氢氧化钠溶液40ml使溶解,再用20乙醇稀释至100ml，即得。枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)： 取2.1枸橼酸水溶液，用50氢氧化钠溶液调节pH值至6.2，即得。枸橼酸磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)：甲液取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml，置冰箱内保存。乙液取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml混合，摇匀，即得。氨氯化铵缓冲液(pH8.0) ：取氯化铵1.07g，加水使溶解成100ml，再加稀氨溶液(130)调节pH值至8.0，即得。氨氯化铵缓冲液(pH10.0)： 取氯化铵5.4g，加水20ml溶解后，加浓氯溶液35ml，再加水稀释至100ml，即得。硼砂氯化钙缓冲液(pH8.0)： 取硼砂0.572g与氯化钙2.94g，加水约800ml溶解后,用1mol/L盐酸溶液约2.5ml调节pH值至8.0，加水稀释至1000ml，即得。硼砂碳酸钠缓冲液(pH10.811.2)： 取无水碳酸钠5.30g,加水使溶解成1000ml；另取硼砂1.91g，加水使溶解成100ml。临用前取碳酸钠溶液973ml 与硼砂溶液27ml，混匀，即得。硼酸氯化钾缓冲液(pH9.0)： 取硼酸3.09g,加0.1mol/L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol/L氢氧化钠溶液210ml，即得。醋酸盐缓冲液(pH3.5)： 取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示),用水稀释至100ml,即得。醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)： 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氢氧化锂调节pH值至3.0，再加水稀释至1000ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.6) ：取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.7)：取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸6080ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH3.8)：取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.5)： 取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH4.6)： 取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得。醋酸醋酸钠缓冲液(pH6.0)： 取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。醋酸醋酸钾缓冲液(pH4.3) ：取醋酸钾14g，加冰醋酸20.5ml，再加水稀释至1000ml，即得。醋酸醋酸铵缓冲液(pH4.5)： 取醋酸铵7.7g，加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml，即得。醋酸醋酸铵缓冲液(pH6.0)： 取醋酸铵100g，加水300ml使溶解，加冰醋酸7ml,摇匀，即得。磷酸三乙胺缓冲液： 取磷酸约4ml与三乙胺约7ml，加50甲醇稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至3.2，即得。磷酸盐缓冲液： 取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。磷酸盐缓冲液(pH2.0)： 甲液取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。乙液取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH2.5)： 取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。磷酸盐缓冲液(pH5.0)： 取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。磷酸盐缓冲液(pH5.8)： 取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH6.5)： 取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH6.6)： 取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)： 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH6.8)： 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.0)： 取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.2)： 取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.3) ：取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.4)： 取磷酸二氢钾1.36g， 加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。 磷酸盐缓冲液(pH7.6)： 取磷酸二氢钾27.22g，加水使溶解成1000ml，取50ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液42.4ml，再加水稀释至200ml，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.8)： 甲液取磷酸氢二钠35.9g，加水溶解，并稀释至500ml。乙液取磷酸二氢钠2.76g，加水溶解，并稀释至100ml。取上述甲液91.5ml与乙液8.5ml混合，摇匀，即得。磷酸盐缓冲液(pH7.88.0)： 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使溶解成1000ml，即得。30丙烯酰胺储存液：称Acr30g，Bis0.8g，加水至100ml，过滤后置棕色瓶内。1%TEMED：取TEMED1ml，加水至100ml，置棕色瓶内4贮存。10%过硫酸铵（AP）：称AP10g，加水100ml，置棕色瓶内4贮存。0.2mol/L pH7.2磷酸盐缓冲液：称 Na2HPO412H2O51.58g及NaH2PO42H2O8.74g，溶于水中并定容1L。分离胶缓冲液(15MTris-Cl缓冲液pH8.8)：Tris 18.17g，加水dH20约80ml用1M HCl调pH至8.8，定容至100ml浓缩胶缓冲液(1MTris-C1缓冲液pH68):Tris12.1g，加水约80ml用1MHCl调pH至6.8，定容至100ml染料饱和酒精溶液的配制配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。配制饱和酒精溶液，应先用少量95酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。附表1几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26)染料名称 溶100mL95酒精中的重量(g)美 蓝 1.48 结晶紫 13.87 龙胆紫 10.00碱性复红 3.20沙黄 3.412常用染色液的配制（）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。此染色液在密闭条件下可保存多年。若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。（）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。（）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。（）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。此液保存期以不超过4个月为宜。（）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。（）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。（）3盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。（）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。（）姬姆萨染色液取姬姆萨氏染料0.6g加于甘油50mL中，置5560水浴中1.52h后，加入甲醇50mL，静置1日以上，滤过即成姬姆萨染色液原液。临染色前，于每毫升蒸馏水中加人上述原液1滴，即成姬姆萨染色液。应当注意，所用蒸馏水必须为中性或微碱性，若蒸馏水偏酸，可于每l0mL左右蒸馏水加入1碳酸钾溶液l滴，使其变成微碱性。特殊染色法1荚膜染色法（）美蓝染色法：带负电荷的菌体与带正电荷的碱性染料结合成蓝色，而荚膜因不易着色而染成淡红色。抹片自然干燥，甲醇固定，以久储的多色性美蓝液作简单染色，荚膜呈淡红色，菌体呈蓝色。注：多色性美蓝即碱性美蓝，亦称骆氏美蓝。（）瑞氏染色法或姬姆萨染色法：抹片自然干燥，甲醇固定，以瑞氏染色液或姬姆萨染色液染色，荚膜呈淡紫色，菌体呈蓝色。（）节氏(Jasmin)荚膜染色法：取9mL含有0.5石炭酸的生理盐水，加入lmL无菌血清(各种动物的血清均可)混合后成为涂片稀释液。取此液一接种环置于载玻片上，又以接种环取细菌少许，均匀混悬其中，涂成薄层，任其自然干燥，在火焰上微微加热固定，然后置甲醇中处理，并立即取出，在火焰上烧去甲醇。以革兰氏染色液中的草酸铵结晶紫染色液染色0.5min，干燥后镜检。背景淡紫色，菌体深紫色，荚膜无色。2鞭毛染色法（）莱氏(Leifson)鞭毛荚膜染色法鞭毛宽一般约0.010.05微米，在普通光学显微镜下看不见，用特殊染色法在染料中加入明矾与鞣酸作媒染剂，让染料沉着于鞭毛上，使鞭毛增粗容易观察，染色时间愈长，鞭毛愈粗。染色液：钾明矾或明矾的饱和水溶液20mL、20鞣酸水溶液10mL、蒸馏水l0mL、95酒精15mL、碱性复红饱和酒精溶液3mL，依次序将各液混合，置于紧塞玻瓶中，其保存期为1个星期。染色剂：含染料90的美蓝0.1g、硼砂(Borax) 1.0g、蒸馏水100mL染色法：滴染色液于自然干燥的抹片上，在温暖处染色l0min，若不作荚膜染色，即可水洗，自然干燥后镜检。鞭毛呈红色；若作荚膜染色，可再滴加复染剂于抹片上，再染色5l0min，水洗，任其干燥后镜检。荚膜呈红色，菌体呈蓝色。（）刘荣标氏鞭毛染色法染色液：溶液一：5石炭酸溶液l0mL、鞣酸粉末2g、饱和钾明矾水溶液l0mL溶液二：饱和结晶紫或龙胆紫酒精溶液。用时取溶液一10份和溶液二l份，此混合液能在冰箱中保存7个月以上。染色法：取幼龄培养物制成抹片，干燥及固定后以溶液一和溶液二的混合液在室温中染色23min，水洗，干燥后镜检。菌体和鞭毛均呈紫色。（）卡-吉二氏(Casares-Cill)鞭毛染色法媒染剂：鞣酸10g、氯化铅(AICl36H20) 18g、氯化锌(ZnCl2) l0g、盐酸玫瑰色素(Rosanilline hydrochloride)或碱性复红1.5g、60酒精 40mL。先盛60酒精10mL于乳钵中，再以上列次序将各物置乳钵中研磨以加速其溶解，然后徐徐加入剩余的酒精。此溶液可在室温中保存数年。此法染假单胞菌更好。染色法：制片自然干燥后，将上述媒染剂作1：4稀释，滤纸过滤后滴于片上染2min。水洗后加石炭酸复红染5min，水洗，自然干燥，镜检。菌体与鞭毛均呈红色。3芽孢染色法（）复红美蓝染色法：细菌的芽孢外面有较厚的芽孢膜，能防止一般染料的渗入，如