化学发光分析.docx

1.下列说法中错误的是()A荧光和磷光都是发射光谱B磷光发射发生在三重态C磷光强度IP与浓度C的关系与荧光一致D磷光光谱与最低激发三重态的吸收带之间存在着镜像关系2.分子荧光分析中，含重原子（如Br和I）的分子易发生：()ID:1291A振动弛豫B内部转换C体系间窜跃D荧光发射3.三线态的电子排布应为()ID:1303A全充满B半充满CD4.下列说法正确的是()ID:1307A分子的刚性平面有利于荧光的产生B磷光辐射的波长比荧光短C磷光比荧光的寿命短D荧光猝灭是指荧光完全消失5.分子荧光与化学发光均为第一激发态的最低振动能级跃至基态中各振动能级产生的光辐射，他们的主要区别在于()A分子的电子层不同B跃至基态中的振动能级不同C产生光辐射的能源不同D无辐射弛豫的途径不同6.根据下列化合物的结构，判断哪种物质的荧光效率最大()ID:1310A苯B联苯C对联三苯D9苯基蒽7.欲测定污水中痕量三价铬与六价铬应选用哪种方法()ID:1312A原子发射光谱法B原子吸收光谱法C荧光光度法D化学发光法8.若需要测定生物试样中的伟良氨基酸应选用哪种分析方法()ID:1315A荧光光度法B化学发光法C磷光光度法DX荧光光谱法9.若需检测尿液中的对硝基苯酚刻采用哪种方法()ID:1319A荧光光度法B化学发光法C磷光光度法DX荧光光谱法10.若需测定生物体中的磷酸三腺甙（ATP），其浓度为时，应采用下述哪种方法()ID:1326AX荧光光谱法B荧光光度法C磷光光度法D化学发光法DCDACDDACD第五章分子发光分析法填空题测试1.分子荧光分析法试根据物质的_进行定性，以_进行定量的一种分析方法。分子荧光光谱荧光强度2.分子的外层电子在辐射能的照射下，吸收能量跃迁至激发态，再以无辐射弛豫转入最低三重态，然后跃回基态的各个振动能级，并产生光辐射。这种发光现象应称为_。ID:1334分子磷光3._类型的化学反应可以产生化学发光，化学发光反应自由能的变化（G）一般应在_（kJ/mol）。ID:1337氧化还原1703004._溶剂对荧光的光谱干扰最小，荧光光谱分析中的主要干扰是_。ID:1339极性溶剂产生的散射光5.在极稀的溶液中，荧光物质的浓度_，荧光强度_，在高浓度时荧光物质的浓度增加，荧光强度_。ID:1340增加增加减小6.溶剂极性增强使物质的荧光波长_移；温度降低，荧光效率_，荧光强度_。红增大增大7._基团能使单线态转入三线态。ID:1343重原子8._状态下易于产生磷光。ID:1345玻璃体9.由三重态到_的跃迁而产生的辐射称为磷光，观测磷光时通常要用液氮冷冻的方法。ID:1346基态10.分子共轭键大，则荧光发射强，荧光峰向_波方向移动；给电子取代基将使荧光强度_（加强或减弱）；得电子取代基将使荧光强度_（加强或减弱）。ID:1348长增强减弱1. 试比较分子荧光与化学发光。答：分子荧光是由于分子的外层电子在辐射能的照射下，吸收能量跃迁至激发态，再以无辐射弛豫转入第一电子激发态的最低振动能级，然后跃迁回基态的各个振动能级，并产生辐射。化学发光是由于分子的外层电子在化学能的作用下使分子处于激发态，再以无辐射弛豫转入第一电子激发态的最低振动能级，然后跃迁回基态的各个振动能级，并产生辐射。它们的区别在于能源不同，前者是辐射能，后者是化学能。它们均为分子外层电子跃迁，产生的光辐射为紫外或可见光。2. 发生化学发光要满足那些条件。答：一个化学反应要产生化学发光现象,必须满足以下条件:第一是该反应必须提供足够的激发能,并由某一步骤单独提供,因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光;第二是要有有利的反应过程,使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态;第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子,或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。3. 荧光分析为什么比吸收光度法的灵敏度高。答：因为荧光分析是从入射光的直角方向检测，即采用垂直方式，能够消除透射光影响。荧光分析中有两个单色器，分别用于激发和发射。吸光光度法中有入射光的背景干扰，因而荧光分析法的灵敏度通常比子吸光光度法的要高24个数量级。一、 举出四类化学发光与生物发光反应，写出它们的发光反应机理，举例说明它们的应用。答：1.化学发光反应：举例：（1）液相化学发光：鲁米诺与H2O2的反应是一个自身化学发光反应。（2）气相化学发光：一氧化氮与臭氧的气相化学发光反应有较高的化学发光效率，其反应机理为：（3）非均相化学发光反应（4）固相化学发光反应应用：化学发光可用来测定无机金属离子，也可用于测定非金属离子及其衍生物。2.生物发光：根据发光的机理不同可分为四种（1）受激荧光，是指生物体在受到外界光辐射的作用时，体内固有的荧光物质或吸收的荧光标记物发光的现象。（2）发光生物发光。以萤火虫的闪光为代表。（3）化学发光。化学发光是在化学反应过程中(主要为氧化还原反应)发出可见光的现象。化学发光反应是由两个关键步骤组成：激发和发射。（4）生物超微弱发光。应用：（1）ATP生物荧光检测（2）利用生物发光蛋白测定细胞内游离Ca2+（3）应用在免疫检测中进行标记物的超灵敏检测。（4）微孔板上的生物发光（5）肿瘤研究等三、举出三种荧光标记物和化学发光标记物，阐明如何使用这些标记物实现化学发光免疫分析。答：1.荧光标记物：荧光素用荧光素标记已知抗体，再与组织或细胞中的相应抗原结合，在荧光显微镜下检测荧光素所发荧光，便可知抗原的分布部位，常用的荧光素有绿色荧光的异硫氰酸荧光素和红色荧光的罗达明B200等。酶用酶标记已知抗体，再与组织或细胞中的相应抗原结合，利用酶细胞化学方法显示该标记酶以达到显示抗原的目的。常用的标记酶如辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase）与其底物H2O2和氨基联苯胺相遇时，形成的棕色沉淀可在光镜下观察到，遇锇酸反应后形成锇黑电镜下呈高电子密度。铁蛋白将铁蛋白通过一种低分子的双功能试剂与抗体相结合，它既保留了抗体的免疫活性又具有显微镜下可见的高电子密度核心。2.化学发光标记物：（1）鲁米诺及其衍生物（2）吖啶磺酰胺内盐（3）光泽精吖啶类化合物应用于化学发光免疫分析（CLIA），通常采用的体系是Acridiniumester/H2O2系统。即用吖啶酯或吖啶磺酰胺标记抗原或抗体，用H2O2和NaOH作发光启动剂。在发光启动剂中，可加入发光增强剂以提高发光效率。四、1.化学发光分析法的优点及发挥：(l)灵敏度极高。例如.荧光素酶和三磷酸腺苷(ATP)的化学发光分析.最低可侧定2X10-17”molL-1的ATP，即可检测出一个细菌中的ATP含足。以没食子酸为发光试剂.测定CO2+时，检出限可达4xlo-4ugg-1，(2)仪器设备简单。自身发光，不需要额外光源、单色器和背景校正(无背景测盆)等装置.仪器大为简化。(3)发射光强度测掀无干扰。可直接侧盘试样的发射光强度。且无背景光、散射光等干扰。(4)线性范围宽、分析速度快。缺点及克服：（1）可供发光用的试剂少（2）发光反应效率低（大大低于生物体中的发光）（3）机理研究少2.生物发光分析法的特点：（1）生物发光的颜色范围很宽，可从红光到深蓝光；（2）氧是几乎所有生物发光系统中必须的因素；(3)生物发光是由“荧光素酶”与“荧光素”的化学反应所引起的；(4)所有的生物发光反应几乎都是酶-底物类型的反应，但复杂程度不同，某些生物发光反应涉及3种或4种底物，而另一些生物发光反应甚至需要3个或4个酶的体系。(5)高效率。在发光的同时，没有辐射热能的消耗，