朝鲜蓟组培快繁技术规程VIP

182 朝鲜蓟组培快繁技术规程 吴亚飞 1 王中美1 2 张平喜1 王 桢1 李树举1 周 娟1 刘小兵1 刘会桃1 1 常德市农林科学研究院 湖南 常德 415000 2 湖南农业大学 湖南 长沙 410038 摘 要 规程规定朝鲜蓟组培快繁的主要仪器设备 生产环境及设备消毒灭菌 组培育苗和档案管理等 关键词 朝鲜蓟 组织培养 繁殖 技术规程 朝鲜蓟 Cynara scolymus L 是菊科 Comopsite 菜蓟属中 1 种多年生草本宿根植物 1 起源于地中海 沿岸国家 2 栽培历史悠久 3 因其营养丰富且植株 内含有可观的洋蓟素和绿原酸等功能性成分 4 而被 人们当作 1 种药食同源的蔬菜 在全世界享有 蔬菜 之王 的美称 5 6 在生产上 朝鲜蓟主要以宿根留兜 分株 扦插 等无性繁殖为主 但长期的无性繁殖导致病毒病发生 严重 7 而且 在亚热带季风气候的国家 植株无法 越夏 不能留兜也无法生产出种子 8 因此 利用组 织培养技术繁殖朝鲜蓟 不仅可以大量生产无病毒 苗 而且成本较低 9 本规程利用朝鲜蓟易分蘖的特 点 直接通过茎尖产生不定芽 对外植体消毒方式 基本培养基筛选和不定芽的初代培养 继代增殖以及 生根等进行研究 于 2012 年获得成功 通过近几年 的优化试验结合大田的试验示范 总结出一套可行的 技术方案 为了大力推广应用朝鲜蓟组培快繁技术 进一步规范朝鲜蓟组培育苗技术 起草了该规程 并 通过湖南省质量技术监督局发布实施 该规程的制订与发布实施 有利于提升朝鲜蓟组 织培养技术水平 为广大蓟农提供优质实惠的组培 苗 减少生产成本 切实增加农民收入 有利于发展 现代农业 建设社会主义新农村及推进朝鲜蓟组培快 繁技术的规范化 标准化 1 主要内容与适用范围 1 1 主要内容 本标准规定了朝鲜蓟组培快繁的主要仪器设备 生产环境及设备消毒灭菌 组培育苗和档案管理等 内容 1 2 适用范围 本标准适用于朝鲜蓟的组培快繁技术标准管理的 全过程 第一作者简介 吴亚飞 1967 女 农艺师 主要从事 朝鲜蓟 马铃薯等作物的组织培养研究 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是 注日期的版本适用本文件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改单 适用于本文件 GB 4285 农药安全使用标准 GB T 8321 农药合理使用准则 所有部分 NY T 496 肥料合理使用准则 通则 3 主要仪器设备 3 1 灭菌设备 高压蒸汽灭菌锅 器械消毒器 紫外灯 烘干 箱等 3 2 接种设备 超净工作台 镊子 剪刀 解剖刀 钢丝架 酒 精灯等 3 3 培养设备 250 ml 培养容器瓶 罐头瓶 培养架 空调 照明灯管 3 4 试验设备 电子天平 0 01 mg 冰箱 pH 5 0 7 0 精 密试纸或酸度计 温湿度表 照度计 烧杯 试剂 瓶 量筒 容量瓶 移液枪或移液管等 4 生产环境及设备消毒灭菌 4 1 接种室消毒灭菌 每月用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸 薰蒸时 房间 关闭紧密 用甲醛 10 ml m3 和高锰酸钾 5 g m3 熏蒸 2 3 d 通风无味后 2 3 d 人员方可进入 接种前用紫外灯照射 30 min 4 2 培养室消毒灭菌 每月用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸 方法同 4 1 4 3 超净工作台的消毒灭菌 接种前用紫外灯照射 30 min 并用 75 酒精擦 拭台面 定期清洗超净工作台过滤膜 4 4 接种器具的消毒灭菌 使用前将镊子 解剖剪 接种纸 解剖刀进行高 温蒸汽消毒 接种过程中采用酒精灯灼烧消毒 183 中国园艺文摘 2018 年第 1 期 5 组培育苗 5 1 培养基制备 5 1 1 母液配制及保存 选用化学纯或分析纯的 化学药品 根据 MS 培养基配方 分别配制大量元素 20 倍 微量元素 100 倍 铁盐 100 倍 有机物 100 倍 植物生长调节物质 0 1 0 5 mg ml 等 化合物的母液 参见附录 A 和附录 B 将母液保存 在 4 的冰箱里 5 1 2 培养基配制 根据培养基配方需求 每 1 L 培养基中分别加入琼脂粉 5 5 g 白糖 40 g 和各 类母液 依次溶解于蒸馏水 定容后用 0 1 moL L HCl 或 0 1 moL L NaOH 溶液调节 pH 值 5 6 定 量分装至培养瓶中并封口 制备成培养基 备用 5 1 3 培养基灭菌 瓶装培养基在10 h内完成灭菌 灭菌方式采用高压蒸汽灭菌 在压力 0 105 MPa 温度 121 条件下灭菌 20 30 min 锅内的灭菌物 以不超过锅的容量 3 4 为宜 高压灭菌时锅内使用蒸 馏水 5 1 4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室 常温条件下 7 d 内使用 2 4 条件下 14 d 内使用 培养基应保存于洁净环境中 注意避光和防尘 5 2 外植体接种 5 2 1 外植体的选择 选择农艺性状好 无病毒的 朝鲜蓟分蘖芽 采样时间选择晴天或露水干后采集 5 2 2 外植体消毒 将外植体用流水冲洗干净 用 刀片削去茎尖周围的叶片和组织 留取 3 4 cm 的 芽备用 将备用芽用 75 酒精消毒 10 s 再用 0 1 HgCl2 每1 000 ml该溶液加2滴吐温80 浸泡8 min 最后用无菌水冲洗 5 6 次 5 2 3 外植体切割 将表面消毒后的外植体切割 留取 0 5 cm 接入培养基中 茎在接种前用手术剪 刀剪去两端 长 1 0 2 0 cm 5 2 4 外植体接种 操作时 先将培养瓶的封口膜 取下 放在一边 将培养瓶口在酒精灯外焰上旋转灼 烧消毒 将枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后 将外植体接种到培养基中 每个培养瓶放 3 个外植 体 接种后盖上封口膜 并标注日期 5 3 组培苗培养条件 培养室的温度为 23 27 相对空气湿度为 70 75 光照强度为 2 000 3 000 Lx 光照 时间为 16 h d 5 4 诱导分化与增殖 5 4 1 丛生芽的诱导 备用芽段上下两端各去掉 少许部分 留取 0 5 cm 左右的茎尖 按照正常生长 方向接入在 EM1 培养基 参见附录 C 中诱导丛生 芽 培养过程中培养基消耗过多或褐化严重可以转接 1 次 培养基不变 外植体接种 3 5 d 后 切口处膨大 茎尖开始 变绿 伸长 10 15 d 后 腋芽开始萌发 伸长 30 d 后 形成至少 8 个叶片的幼苗 5 4 2 丛生芽的增殖 将 5 4 1 诱导出的 2 cm 长 的丛生芽从基部切割成带 2 3 片叶的芽块 剔除褐 化的组织 并转入增殖培养基 EM2 参见附录 C 培 养基中扩繁 接种 7 d 左右 腋芽开始分化 15 d 左右 既 可以形成丛生芽 平均 20 d 继代 1 次 增殖系数为 4 5 左右 5 5 壮苗生根 将朝鲜蓟丛生芽块中 1 5 cm 以上芽切割下来 转入生根培养基 EM3 参见附录 C 中进行壮苗生根 培养 接种7 d左右 茎段基部根原基突起 15 d左右 从根原基长出不定根 平均每株 3 5 条 平均长度 1 5 cm 生根率 80 左右 5 6 炼苗 5 6 1 炼苗标准 当幼苗发育到 2 3 片叶 3 5 条根 叶片长约 1 2 cm 根长 0 5 1 cm 时 即可进行炼苗处理 5 6 2 组培苗驯化 将装组培苗的培养瓶从培养架 上取下 转移到日光温室中 自然散射光下炼苗 温 度控制在 23 27 每天中午在培养瓶周围喷洒雾 水 以保湿降温 封口炼苗 1 2 d 5 6 3 开瓶锻炼 封口炼苗后打开瓶口 向瓶内注 入超过培养基表面 0 5 cm 高的自来水 温度控制在 23 27 2 4 d 后即可移栽 5 7 移栽 5 7 1 基质准备 栽培基质采用蛭石 珍珠岩 细 沙按 1 1 1 的混合物 新基质不需要消毒 使用过 的基质用 2 000 倍高锰酸钾溶液浸泡 12 h 使用 128 孔盘种植幼苗 5 7 2 移栽种植 移栽前 用自来水把根系上的培 养基冲洗干净 用 1 000 倍甲基托布津或多菌灵浸泡 组培苗根部 放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白 变软 再栽入已准备好的基质中 栽后将基质浇透水 随即拱膜保湿 7 l0 d 后揭膜通风炼苗 5 8 病虫害防治 苗期立枯病育苗前使用 0 05 炭疽福美作药土 防治 或 50 多菌灵 70 甲基硫菌灵等作药土防 184 治 每 1 m2用药 8 9 g 幼苗发病前期喷药防治 选用 70 土菌消 恶霉灵 可湿性粉 1 000 倍液 或 70 甲基硫菌灵可湿性粉剂 800 倍液喷雾防治 隔 周喷施 共喷 2 次 蚂蚁防治在育苗床周边撒 1 圈 百虫灵等驱蚁药即可 农药使用应符合 GB 4285 和 GB T 8321 所有部分 的规定 5 9 大田移栽标准 当苗高 8 10 cm 叶片数 3 4 片时 带基质 移栽到大田 肥料使用应符合 NY T 496 的规定 参考文献 1 韩嘉义 袁唯 韩曙 名优西菜朝鲜蓟的引种栽培与开发 J 云南农业科技 1995 5 11 13 2 张学才 施立聪 张作焕等 朝鲜蓟引种栽培初报 J 中 国蔬菜 1994 1 45 46 3 张红梅 朝鲜蓟及其栽培技术 J 吉林蔬菜 1997 2 23 24 4 Gebhardt R Inhibition of cholesterol biosynthesis in HepG2 cells by artichoke extracts is reinforced by glucosidase pretreatment J Phytother Res 2002 16 4 368 372 5 白雪 张建丽 何洪巨 朝鲜蓟的营养与保健功能 J 中 国食物与营养 2005 11 47 4