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文档简介

钙离子成像 一、 实验目的钙是人体的重要组成成份，它广泛分布于全身各组织器官中，正常人体的钙占体重的1.5%-2.0%。在人体中的含量居第五位。钙离子与神经递质的释放、肌肉收缩以及凝血过程等生理过程都有重要关系，因此钙离子的检测对人体了解相关的生理活动非常的重要。二、 实验仪器硬件设备： 1.Olympus 倒置显微镜 IX71 2. TILL单光仪 3.EM-CCD（HAMAMATSU C9100） 4.Computer软件模块：SimplePCI 6.5三、 实验原理测量钙离子的合成指示剂分为单波长激发指示剂、双波长激发指示剂和双波长发射指示剂3种。 波长激发指示剂：Quin-2是第1代荧光指示剂，在340 nm处激发，505nm处可观察到结合Ca2+的发射峰强度的增加。用于测定静息状态或接近静息状态下的细胞内Ca2+的浓度，无法检测 1M以上的Ca2+浓度 双波长激发指示剂：Fura-2Fura-2是第2代荧光指示剂，当介质中无钙时，Fura-2的激发峰为380nm；当与钙结合后，激发峰向短波方向移至340nm，所以采用激发比例荧光测量。进入细胞的Fura-2随时间推移将泄漏到细胞外，所以应尽量缩短测定时间。 双波长发射指示剂：Indo-1Indo-1为单波长激发(340nm)和双波长发射(405和506nm)指示剂，其优点与Fura-2相同。Indo-1已经在流式细胞研究中广泛使用。测量340nm和380nm激发下的发射荧光强度： F340和F380 R= F340/ F380 校准 Ca2+i=Kd(R-Rmin)/(Rmax-R)(nmol/L) Rmax是加入0.1%的TritonX-100破坏细胞膜后所得到的最大荧光强度比值；Rmin为加入5M的螯合剂EGTA后测得的最小荧光强度比值。K
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