微生物标准操作规程六3.doc

XXX人民医院检验科微生物室标准操作文件文件编号：WSW-SOP-007版本号：2007 第1次修改编写者：XXX XXX审核者：XXX修订日期：2012年1月15日页码：第 1 页 共 2 页呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程1目的规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。2适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。3标本3.1 标本类型 痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。3.2 标本采集3.2.1 采集时间 以晨痰为好；支气管扩张症病人，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。3.2.2 自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐人无菌容3.2.3 气管镜下采集法 在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。3 24 气管穿刺法 在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。3.2.5 棉拭采集法 用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。3.3 标本拒收标准3.3.1 申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。3.3.2 痰标本呈水样或唾液样。3.3.3 痰涂片白细胞25低倍视野。3.3.4 标本容器溢漏，无瓶盖。3.3.5 痰标本留取放置时间太长，超过2小时。3.3.6 未用指定的无菌容器留痰作细菌培养。3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2小时。4试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATH板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。5细菌鉴定和药敏质控参见质量管理程序。6检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。6.1 肉眼观察 包括颜色、黏度、有无血丝或脓。6.2 涂片检查 可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定(表5-29)。并可初步判定是否有病原菌存在。表5-29痰标本镜下分类注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合格，应重新留标本6.2.1 一般细菌涂片 挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，革兰染色后镜检。6.2.2 结核分枝杆菌涂片 参见分枝杆菌属检验标准操作规程。6.2.3 放线菌及诺卡菌涂片 将痰液用生理盐水洗涤数次，如含血液，则加水溶解红细胞，然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻片上，覆以盖玻片，轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构，如见中央为交织的菌丝，末端呈放线状排列，则揭去盖玻片，干燥后作革兰及萋一尼染色镜检。如查见中间部分的菌丝为革兰阳性，而四周放射的末端为革兰阴性，萋一尼染色为非抗酸性者，可报告为“找到革兰阳性杆菌疑似放线菌”。萋尼染色弱阳性则报告“找到革兰阳性杆菌疑似诺卡菌”。6.3 分离培养6.3.1 培养标本的选择 应选择黏液脓痰作涂片，排除不合格标本。6.3.2 痰标本培养前处理 用无菌盐水将痰洗涤或加入等量的1胰酶溶液，使痰液均质化后备用。6.3.3 接种 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB、中国蓝)琼脂平板，置510CO2环境中，35 培养1824小时。6.3.4 根据菌落及形态特点，作出初步判断，然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同时作药物敏感试验。6.3.5 结核分枝杆菌培养：参见分枝杆菌属7.操作流程痰或咽拭肉眼观察 消化液或生理盐水处理 涂片染色血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板，5%10%CO2,35培养18-24h观察菌落特征及涂片、染色发出报告8.结果报告8.1 报告的各菌种可注明各自所占比例情况,可分为纯培养、大量、中等量、少量。8.2 未检出致病菌时应报告“正常菌群”。9.注意事项9.1 痰标本一般不可采用肉汤或高选择性培养基进行增菌培养。9.2 草绿色链球菌为口腔和鼻咽部的正常菌群，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部损伤而侵入血流，可引起亚急性细菌性心内膜炎等感染，故从血液中分离出草绿色链球菌有临床意义。9.3 咳痰标本不做厌氧菌培养。10.临床意义上呼吸道标本培养的细菌是否与疾病有关，需各方面综合分析，排除常居菌后，才可作出正确的判断。下呼吸道的痰液应是无菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从病人痰标本中查出致病菌或条件致病菌，提示可能有呼吸道细菌感染。肺炎链球菌是肺炎常见的致病菌。儿童细菌性肺炎多为流感嗜血杆菌所致。医院获得性肺炎的常见病原菌是革兰阴性杆菌，主要有肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌属和肠杆菌属细菌等。肺结核由结核分枝杆菌引起的。嗜肺军团菌引起军团菌病，肺部厌氧感染大多是脆弱类杆菌及梭杆菌属的细