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分光光度法测定甜蜜素2011年第3期总第36卷中国调味品CHINACONDIMENT分析检测分光光度法测定甜蜜素桑宏庆,王丽,王光新(安徽科技学院,安徽凤阳233100)摘要:目的:探讨分光光度法测定甜蜜素的方法.方法:将甜蜜素中的氮转化为铵,在碱性条件下与水杨酸钠一次氯酸钠反应生成蓝色物质,用分光光度法测定吸光度进行定量.结果:吸光值与甜蜜素的含量在一定浓度范围内成正比,最大吸收波长为658nm,甜蜜素在O16/xg/mL范围内符合比耳定律,相对标准偏差2.743.94,平均回收率为94.1296.O4.结论:方法准确可靠,易于掌握,适宜饮料,蜜饯等食品的测定.关键词:甜蜜素;水杨酸钠;次氯酸钠;分光光度法中图分类号:TS202.3文献标识码:B文章编号:1000-9973(2011)030105-04DeterminationofsodiumcyclamatebyspectrophotometrySANGHongqing,WANGLi,WANGGuangxin(AnhuiScienceandTechnologyUniversity,Fengyang233100,China)Abstract:Objective:Toexplorethedeterminationmethodofsaccharininfoodbyspectrophotometry.Methods:Thenitrogeninthesodiumcyclamatewastransformedintoammoniumionbybeingdigested,andthenitreactedwithsodiumsalicylate-sodiumhypochloriteunderthealkalinityconditions.Thebluematerialthatwasproducedinthisreactionwasdeterminedbyspectrophotometry.Results:Theabsorbanceofsamplesolutionwasproportionalwiththeconcentrationofcyclamateinacertainrange.Themaximumabsorptionwavelengthliedat658am.BeerSLawwasobeyedintheconcentrationofthesodiumcyclamaterangefrom016/g/mL,andtherelativestandarddeviationwas2.74%3.94,theaveragerecoverieswereinrangeof94.1296.04.Conclusion:Themethodwasaccu-rateandreliable,easytograsp,andwassuitableforbeveragesanddryfruitsdetermination.Keyword:sodiumcyclamate;sodiumsalicylate;sodiumhypochlorite;spectrophotometry甜蜜素的化学名为环己基氨基磺酸钠,是目前较为常用甜味剂,甜度为蔗糖的30-40倍.目前,国内甜蜜素的测定方法主要采用气相色谱法,比色法和薄层层析法,高效液相色谱法引,离子色谱法4f5,单扫描极谱法63等.本文将样品提取液用硫酸消化,然后采用分光光度计测定,与标准法(盐酸萘乙二胺法)相比结果满意.1材料与方法1.1主要仪器和试剂仪器:722E分光光度计上海光谱有限公司;FA2004分析天平上海精科天平有限公司;DK-S28数显水浴锅上海精宏有限公司;KDN-04消化炉上海新嘉电子有限公司.收稿日期;2O1O一1215基金项目z安徽科技学院自然科学课题资助项目(ZRC20o7156)作者简介:桑宏庆(1971一),男,硕士,副教授,主要从事食品分析与检验教学和研究工作.?-105-2011年第3期总第36卷中国调味品CHINACONDIMENT分析检测试剂:硫酸铵储备液:称取预先干燥的硫酸铵0.3291g溶于水并稀释定溶于1000mL,此溶液每mL相当于1mg甜蜜素.硫酸铵标准工作液:取上述储备液稀释至相当于甜蜜素含量50g/mL作为工作液.水杨酸钠:将25g水杨酸钠和0.15g亚硝基铁氰化钠,溶于200mL水中,过滤溶至500mL.磷酸盐缓冲液;称取38g磷酸三钠,7.1g磷酸氢二钠和20g酒石酸钾钠,加入400mL水中溶解后过滤,称取35g氢氧化钠溶于400mL水中,冷至室温,缓慢地边搅拌边加入到磷酸盐溶液中,用水稀释至1000mL备用.次氯酸钠:吸取次氯酸钠溶液(含有效氯5.5,氢氧化钠8)4mL,用水稀释至100mL.空白酸工作液:称取0.5g蔗糖,加入15mL浓硫酸及5g催化剂(无水硫酸钠和硫酸铜),处理消化后移人250mL容量瓶,加水至刻度.临用前吸取1OmL加水至100mL,摇匀做为工作液.乙醚,2moL/L盐酸,lO硫酸铜,4氢氧化钠.以上为分析纯,实验用水为重蒸元氨水.1.2方法原理将除去蛋白质等杂质的样品液用硫酸消化将甜蜜素中的氮转化为铵,然后在碱性条件下与次氯酸,水杨酸反应生成蓝色物质,该蓝色物质在658nm波长处的吸光值与甜蜜素的含量在一定范围内成线性关系.1.3实验方法吸取硫酸铵标准液(相当于甜蜜素的含量是50/g/mL)10mL于100mL的容量瓶中,加入2mL的空白酸液,5.5mL的磷酸盐缓冲液,5mL的水杨酸钠溶液,于35的水浴锅中放置15min,再加入6mL次氯酸钠溶液,摇匀后在35的水浴锅中加热15min,取出加水至刻度线.用1am的比色皿,以试剂空白为参比,在620700rim范围进行波长扫描,找到最大吸收波长().在处,分别测定空白和标准系列的吸光度值A,以A.C绘制标准曲线.用标准曲线法测定样液中甜蜜素含量.2结果与分析2.1吸收光谱按实验方法操作得吸收光谱见图1,由图1可知一106一最大吸收波长为658nm.图1吸收曲线Fig.1Absorptionspectra2.2实验条件的选择2.2.1反应时间与温度的选择按照1.3实验方法,固定反应时间改变温度,得出适合的反应温度,然后再依此结果固定反应温度改变反应时间,得出适合的反应时间.实验结果表明,本文反应时间在35,反应时间为15min吸光度A可以达到最大值,故本实验选取显色温度为35,反应时间15min.2.2.2磷酸缓冲液用量的影响按照1.3实验方法,磷酸缓冲液用量的影响如图2所示.图2磷酸缓冲液用量的影响Fig.2Effectofphosphoricacidbufrsolutionquantity从图2可以看出磷酸缓冲液为5.5mL出现最大吸光值,本实验选取的磷酸缓冲液的添加量为5.5mL.2.2.3水杨酸钠用量的影响按照1.3实验方法,水杨酸钠用量的影响如图3所示.由图3可知,水杨酸钠为4.06.5mL之间时,吸光度A基本上保持不变,本实验选取水杨酸钠的添2011年第3期总第36卷中国调味品CHINACoND玎衄NT分析检测加量为5mL做为最佳的试剂添加量.图3水杨酸钠用量的影响Fig.3Effectofsodiumsalicylatequantity2.2.4次氯酸钠用量的影响按照1.3实验方法,次氯酸钠用量的影响如图4所示.田4次氯酸钠用量的影响Fig.4Effectofsodiumsalicylatequantity由图4可知,次氯酸钠的加入量在510.5mL吸光值基本保持不变,本实验选取6mL做为实验的最佳添加量.2.2.5显色稳定性反应体系的显色稳定性如图5所示.图5稳定性测定Fig.5Determinationofstability由图5可知,反应体系显色稳定,易于进行光度分析.2.3共存离子的影响本文对饮料中常见的几种共存离子和物质进行了干扰实验.结果表明,在测定浓度为0.08g/L的甜蜜素含量时,相对误差控制在5之内,2000倍量的Na,1300倍量的K|+,1500倍量的SO4,30倍量的Cuz不干扰测定;500倍的苯甲酸,450倍的柠檬酸不干扰测定;柠檬黄,日落黄,苋某红,胭脂红等不溶于乙醚7,它们在样液经盐酸酸化处理后再用乙醚提取环己基氨基磺酸时可溶于水层而被除去;糖精钠经酸化后转化为糖精,在较长时间加热的条件下逐渐分解成苯甲酸,与样品中原有的苯甲酸一起经水蒸气蒸馏可消除其干扰日2.4标准曲线及精密度检验标准曲线如图6所示.图6标准曲线Fig.6StadardCurve从图6可以看出,甜蜜素的浓度为016/.tg/mL范围内,其浓度与测得吸光度的差值A呈良好的线性关系,线性回归方程为A=0.0564X+0.029,相关系数为r=0.9958.按1I3实验方法测定,其中经换算后相当于甜蜜素浓度为1.010一,3.010肚g/L,重复测定11次,平均相对标准偏差(RSD)分别为1.579,6,2.459,5.实验结果表明,本法测定11次试剂空白溶液的吸光度值(Ao)的标准偏差(Sb),根据公式D一3S/K(K为回归方程斜率)计算方法检出限为0.1/g/mL.3样品分析3.1样品中甜蜜素的测定样品处理参考文献Elo3进行.取上述乙醚提取液i0蝴入50mL凯氏烧瓶中,在水浴中加热蒸干乙醚,加入5mL浓硫酸,1g左右硫酸钾和0.25g左右的硫酸铜,在微火上消化,至微黑色后再加入5mL浓硫酸消化至澄清.冷却后,移人100mL容量瓶中,定容至刻度.再从其中取10mL于100mL容量瓶中定容至刻度,作为测定样液,然后按照1.3实验方法测定吸光度.一】072011年第3期总第36卷中国调味品CHINACoNDIMENT分析检测裹1样品中甜蜜素的测定结果(n:6)TablelDeterminationresultsofsodiumcyclamateinsamples样品本法测定值(Ilg/mL)盐酸萘乙二胺法澍定值(mL)相对偏差(9i)从表2可知,本法与标准法(盐酸萘乙二胺法)相比相对偏差较小,具有较高的准确度.4结论在本文所确定的实验条件下,本法用于饮料中甜蜜素含量的测定,实验温度为35,反应时间为15min,最大吸收波长为658nm,线性范围为016g/mL,样品测定的相对标准偏差为2.743.94,平均回收率为94.1296.O4,测定结果与标准法(盐酸奈乙二胺法)较为相近.参考文献:1GB2760,食品添加剂使用卫生标准Is.2王敏,郭德华,韩丽,等.HPLC法快速分离和检测食品中微量甜蜜素含量J.中国卫生检验杂志,2007,17(8):14211422.3郑玲,李丽华,郭蔚,等.高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素J.化学分析计量,2005,14(3):5051.4钟志雄,梁春穗,姚敬,等.离子色谱法钡I定食品中的甜蜜索和苯甲酸J.中国卫生检验杂志,2005,15(9):1062-1064.5郭莹莹,朱岩,叶明立.淋洗液发生器离子色谱抑制电导法澳绽甜味剂口.浙江大学(理学版),2004,31(4):435437.6钱桂平,余建中.单扫描极谱法测定食品中的甜蜜素J.中国卫生检验杂志,2000,10(6):692694.7靳敏,夏玉宁.食品检验技术M.北京:化学工业出版社,2003:105.8郝利平,夏延斌,陈水泉,等.食品添加剂M.北京:中国农业大学出版社,2002:44-45.9天津轻工业学院.食品添加剂(2版)M.北京:中国轻工业出版社,1985:233.1O桑宏庆,于秋生.紫外分光光度法测定甜蜜素口.饮料工业,2006,9(11):27?29.(上接第104页)3SimpsonGIC,JacksonYA.Comparisonofthechemicalcom-positionofEastIndian,JamaicanandotherWestIndianessentialoilsofMyristicalfragransHouttJ.JEssentOilRes,2002,14(1):6-9.4SinghG.Antimicrob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