淀粉和脂肪含量的测定.doc

粗脂肪含量的测定-索氏抽提法一、目的脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中，测定脂肪的含量，可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。通过本实验的学习,掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。二、原 理本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。三、实验材料、主要仪器和试剂1实验材料油料作物种子、中速滤纸2仪器：（1）索氏脂肪抽提器（图1）或YG-型油分测定器（2）干燥器(直径1518cm，盛变色硅胶)（3）不锈钢镊子（长20cm）（4）培养皿（5）分析天平（感量0.001g）（6）称量瓶（7）恒温水浴（8）烘箱（9）样品筛（60 目）3试剂无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.）四、操作步骤1将滤纸切成8cm8cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入1052烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温。按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重（记作a）、称量时室内相对湿度必须低于70。2包装和干燥在上述已称重的滤纸包中装入3g 左右研细的样品，封好包口，放入1052的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷却至室温。按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b）。3抽提将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67 倍的无水乙醚，使样品包完全浸没在乙醚中。连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在7080之间，使冷凝下滴的乙醚成连珠状（120150 滴/min 或回流7次/h 以上），抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止（约需612h）。抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发（抽提室温以1225为宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。4称重待乙醚挥发之后，将滤纸包置于1052烘箱中干燥2h，放入干燥器冷却至恒重为止（记作c）。五、结果与计算式中：a：称量瓶加滤纸包重（g）b：称量瓶加滤纸包和烘干样重（g）c：称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重（g）六、附 注（1）测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理。这是因为：第一，抽提体系中有水，会使样品中的水溶性物质溶出，导致测定结果偏高；第二，抽提体系中有水，则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚，可饱和约2的水），从而影响抽提效率；第三，样品中有水，抽提溶剂不易渗入细胞组织内部，结果不易将脂肪抽提干净。（2）试样粗细度要适宜。试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。（3）索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长，如能将样品先回流12 次，然后浸泡在溶剂中过夜，次日再继续抽提，则可明显缩短抽提时间。（4）YG-型油分测定器容量大，适合于样品较多的选种鉴定工作使用，温度控制在70左右，8h 可提取完毕。（5）必须十分注意乙醚的安全使用。抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。乙醚中过氧化物的检查方法是：取适量乙醚，加入碘化钾溶液，用力摇动，放置1min，若出现黄色则表明存在过氧化物，应进行处理后方可使用。处理的方法是：将乙醚放入分液漏斗，先以1/5 乙醚量的稀KOH溶液洗涤23 次，以除去乙醇；然后用盐酸酸化，加入1/5 乙醚量的FeSO4 或Na2SO3 溶液，振摇，静置，分层后弃去下层水溶液，以除去过氧化物；最后用水洗至中性，用无水CaCl2 或无水Na2SO4 脱水，并进行重蒸馏。肉与肉制品总脂肪含量的测定原理试样与稀盐酸共同煮沸,游离出包含的和结合的脂类部分,过滤得到的物质,干燥,然后用正已烷或石油醚抽提留在滤器上的脂肪,除去溶剂,即得脂肪总量。 4试剂 所用试剂均为分析纯,所用水为蒸馏水或相当纯度的水。4.1抽提剂：正己烷或3060沸程石油醚。 4.2盐酸(GB 622): 2mol/L溶液。 4.3蓝石蕊试纸。4.4沸石。 5仪器和设备 5.1实验室常规仪器和设备。 5.2绞肉机：孔径不超过4mm。5.3索氏抽提器。 6试样6.1按GB 9695.19取样。6.2至少取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其均质化并混匀,试样必须封闭贮存于一完全盛满的容器中,防止其腐败和成分变化,并尽可能提早分析试样。 7分析步骤 7.1酸水解 称取试样35g,精确至0.001g,置250mL锥形瓶中,加入2mol/L盐酸溶液50mL,盖上小表面皿,于石棉网上用火加热至沸腾,继续用小火煮沸1h并不时振摇。取下,加入热水150 mL,混匀,过滤。锥形瓶和小表面皿用热水洗净,一并过滤。沉淀用热水洗至中性(用蓝石蕊试纸检验。将沉淀连同滤纸置于大表面皿上,连同锥形瓶和小表面皿一起于1032 干燥箱内干燥1h,冷却。 7.2抽提脂肪 将烘干的滤纸放入衬有脱脂棉的滤纸筒中,用抽提剂润湿的脱脂棉擦净锥形瓶、小表面皿和大表面皿上遗留的脂肪,放入滤纸筒中。将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内,连接内装少量沸石并已干燥至恒重的接收瓶,加入抽提剂至瓶内容积的2/3处,于水浴上加热,使抽提剂以每56min回流一次抽提4h。 7.3 称量 取下接收瓶,回收抽提剂,待瓶中抽提剂剩12mL时,在水浴上蒸干,于1032干燥 箱内干燥30min,置干燥器内冷却至室温,称重。重复以上烘干、冷却和称重过程,直到相继两次称量结果之差不超过试样质量的0.1。 7.4抽提完全程度验证用第二个内装沸石、已干燥至恒重的接收瓶,用新的抽提剂继续抽提1h,增量不得超过试样质量的0.1。 同一试样进行两次测定。 8分析结果的计算m2-m1 X () = 100 m 式中：X