食用菌学实验项目一览表.doc

食用菌学实验项目一览表序号实验项目名称实验类型实验要求适用专业学时1母种培养基的配制与菌种分离与培养验证性必做农科类42原种与栽培种的制作验证性选做农科类43平菇与金针菇的栽培综合性必做农科类44食用菌栽培、加工现场参观综合性必做农科类8实验一 母种培养基的配制与菌种分离与培养实验1、本次实验的目的和要求学会母种培养基的配制方法，掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。2、实验内容或原理（1）母种培养基配制。工艺流程：培养基配方 培养基的配制 分装试管理 灭菌 摆斜面（2）菌种分离与培养（本实验以组织分离为例） 工艺流程：种菇的选择与消毒 组织块的切取 菌丝培养 3、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、解剖刀、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管、止水、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯。试剂：75%酒精、高锰酸钾、富尔马林、马铃薯、葡萄糖、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B、木屑、麸皮、石膏粉等。4、实验步骤（1）母种培养基配制a、培养基配方 以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg。b、培养基配制 首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200 g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。C、分装试管 培养基配制后应趁热分装。装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每10支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。D、灭菌 灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热,当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5 min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15 Kg/cm2时(灭菌所需压强)开始计时,继续维持该压强30min。灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀,排出锅内剩余蒸汽后,打开锅盖.注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽,以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞,造成以后菌种的污染.E、摆斜面 当培养基的温度降到60时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。(2)菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例）种菇的选择与消毒 选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。组织块的切取 将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后,再开始进入接种室内进行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面三刀半，在菌柄 和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织,将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。 菌丝培养 接种后置于25恒温箱中培养,2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝,此时每天要检查杂菌污染情况.培养7-10天后,菌丝即可长满斜面.观察记载详细观察比较母种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。 菌落的直径（mm）-菌种块直径(mm)试管内菌丝生长的速度=菌落生长的时间（d）观察母种菌丝的表面形态特征。通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。作业总结制作培养母种、原种及栽培种过程中应掌握哪些基本技能。如何获得优良的菌种？5教学方式 以分组的形式进行实验、讨论6考核要求 掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法，要求组织分离成功率在50%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。7实验的报告要求 要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。实验二 原种与栽培种制作实验1、本次实验的目的和要求学会原种与栽培种培养基的配制方法，掌握原种与栽培种的接种技术，了解食用菌原种与栽培种制作的工艺流程和制作的基本技能。2、实验内容或原理（1）原种与栽培种培养基配制工艺流程：培养基配料 装瓶（或装袋） 灭菌 冷却 接种（2）掌握原种与栽培种的接种操作技术 接种箱消毒 器械消毒 无菌接种 菌丝培养 3、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等。试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等。4、实验步骤a.配方：本实验以棉籽壳为主料培养基为例。配方为：棉籽壳78%，麦麸或米糠20%，过磷酸钙1%，蔗糖1%。b.拌料 先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量、混合，加水拌料。混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。c.含水量的测定 拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为62%-64%。d.装瓶 将拌好的培养料装入原种瓶或塑料袋中央，边装边压实（但不得过紧），一直装到瓶肩处为宜。e.擦瓶 将瓶口和瓶外粘的培养料擦掉，以免接种后污染杂菌。f.封口 用棉塞塞住瓶口或用透气膜包住瓶口，再包一层防潮纸（或牛皮纸），用线绳将瓶口扎好，准备灭菌。g.灭菌 灭菌方法同母种的灭菌方法，压强为1.4-1.5Kg/cm2,1.5-2.0hh.接种 挑取母种培养基一小块，置于原种或栽培种培养基中央孔边，随即按原样封口。i.菌丝培养 接种后的原种，置于25的培养室培养。3-5天后菌丝即可恢复生长。5-7天菌丝开始伸入培养基内。当菌丝长满瓶后，即可直接分移栽培种，栽培种菌丝长满面瓶后，需要养菌1-2周，以增加菌丝量及增强菌丝活力后，再用于生产。观察记载观察原种菌丝的表面形态特征。作业总结制作原种及栽培种过程中应掌握哪些基本技能。5教学方式 以分组的形式进行实验、讨论6考核要求 掌握原种与栽培种培养基的料水比例与高压、常压蒸汽灭菌方法，要求原种与栽培种成功率在90%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。7实验的报告要求要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。实验三 原种与栽培种制作实验1、本次实验的目的和要求学会平菇与金针菇栽培袋的的制作方法，掌握其出菇管理技术。2、实验内容或原理（1）平菇与金针菇栽培袋制作工艺流程：栽培原料配制 装袋 灭菌 冷却 搬入接种室 接种室消毒接种 适温培养菌丝（2）出菇管理 控温、调温、通风、采收、补水3、需用的仪器或试剂等仪器与设备：接种箱、高压灭菌锅或常压灭菌灶、接种铲、酒精灯。试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉等。4、实验步骤a.配方：本实验以棉籽壳为主料培养基为例。配方为：棉籽壳78%，麦麸或米糠20%，过磷酸钙1%，蔗糖1%。b.拌料 先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量、混合，加水拌料。混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中。拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。c.含水量的测定 拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为62%-64%。d.装袋 将拌好的培养料装入塑料袋中央，边装边压实（但不得过紧），一直装到2/3长为宜。e.套环 用双套环或纤维绳扎实袋口，准备灭菌。f.灭菌 灭菌方法同原种栽培种的灭菌方法。g.接种 挑取栽培种培养基一小块，置于栽培袋中，随即按原样封口。h.菌丝培养 接种后的栽培袋，置于培养室培养。3-5天后菌丝即可恢复生长。5-7天菌丝开始伸入培养基内。当菌丝长满袋后，移入菇房。i.出菇管理 控温、调温、通风、采收、补水5教学方式 以分组的形式进行实验、讨论6考核要求 掌握平菇与金针菇栽培袋的制作技术，要求制袋成功率在95%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及