提纯结核菌素.doc

提纯结核菌素（牛型）皮内变态反应试验操作方法牛结核病是由牛结核分枝杆菌引起的人、畜、禽共患的慢性传染病，世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。人与动物关系密切，人间结核有10%是由牛结核传染而来的，此外该病目前仍然是危害养牛业的主要传染病之一，消灭和预防该病的惟一办法是对牛群实施检疫净化，检疫出感染牛进行扑杀、无害化处理，最终建立无结核病牛群。 1实验所需材料试剂1.1 牛型提纯结核菌素（牛型结核分枝杆菌PPD ）1.2 游标卡尺（50分度精确度）1.3 1毫升蓝芯注射器1.4 记录档案本（畜主姓名、耳标号、注射时间、皮厚、72h后皮厚） 1.5 剃须刀(剃毛用)、5ml或10ml注射器、牛鼻钳、0.9%生理盐水、防护用品（手套、工作帽、防护服、胶鞋、口罩等）、洗涤精、回收废物箱、75%酒精棉球。2结核菌素使用前注意事项2.1检查有无异常使用前仔细检查外包装，如发现瓶破、瓶口、胶塞破损、瓶签不清，有异物，过期失效和未在规定温度(冷藏)下保存等异常情况，均禁止使用。检查是否真空：如果结核菌素瓶是真空的，由于外界压力大，生理盐水会自动吸入瓶内，为有效方可使用。2.2配制使用注意事项2.2.1配制结核菌素要无菌操作，生理盐水瓶塞与结核菌素瓶塞要用75%酒精棉球消毒。如溶解后菌素浑浊，有絮状物、异物等情况，一律不得使用。2.2.2结核菌素应28冷藏保存，一经稀释后应当天用完，不得留作再用。2.2.3由于生产厂家不同，每瓶所含头份不同，一般是50头份/瓶、100头份/瓶两种规格，使用前详细阅读说明书。50头份/瓶的抽取5ml生理盐水进行稀释。100头份/瓶的抽取10ml生理盐水进行稀释。使用前应仔细阅读说明书。2.3废弃物注意事项使用后的注射器、针头、空结核菌素瓶以及用具应进行消毒等无害化处理。3注射部位及术前处理 在颈侧中部上1/3处剪毛（或提前一天剃毛），三个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm，用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。如术部有破损或变化时，应另选部位或在对侧进行。首先用洗涤精水洗毛以达到润滑的目的，剃毛时与皮肤呈45角，用老式手动剃须刀，刀片卡片不用安装以防塞毛，注射角度与皮肤呈2030角 。4注射剂量及注射方法不论大小牛只，将牛型提纯结核菌素稀释成每毫升含2万国际单位后。一律皮内注射0.1ml 2000国际单位/头牛。冻干菌素稀释后应当天用完。注意冷藏保存。先以75%酒精消毒术部，然后皮内注入定量（0.1ml）牛型提纯结核菌素，注射后局部应形成68mm圆形皮丘，如注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。注射时要保证每头牛更换针头。5注射次数和观察反应 皮内注射后经72小时判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好记录。对疑似反应牛应即在另一侧以同一批菌素同一剂量进行第二回皮内注射，再经72小时后观察反应。如有可能，对阴性和疑似反应牛，于注射后96和120小时再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。 6结果判定 6.1阳性反应局部有明显的炎性反应。皮厚差等于或大于4mm （4 mm）以上者，其记录符号为（+）。对进出口牛的检疫，凡皮厚差大于2mm者，均判为阳性。 6.2疑似反应局部炎性反应不明显，皮厚差在2.0-3.9mm间(4 mm皮厚差 2 mm)，其记录符号为（）。凡判为疑似反应的牛只，于第一次检疫60天后进行复检，其结果仍为可疑反应时，经60天后再复检，如仍为疑似，应判为阳性。 6.3阴性反应无炎性反应。皮厚差在2mm以下（ 2 mm ），其记录符号为（）。7游标卡尺的构造及读数方法7.1游标卡尺包括尺身、主尺、游标尺、深度尺、内测量爪 、外测量爪和紧固螺钉七个部分。7.2游标卡尺分类一般分为10分度、20分度和50分度三种，10分度的游标卡尺可精确到0.1mm , 20分度的游标卡尺可精确到0.05mm , 而50分度的游标卡尺则可以精确到0.02mm。7.3读数方法先看游标尺的零刻度线在主尺的多少毫米刻度线的右边，读出所测长度以毫米为单位作为整数部分；再看游标尺上第几条刻度线与主尺上的刻度线对齐，将对齐的游标尺刻度线与游标尺零线间的格数乘以卡尺的精确度，就是所测长度以毫米为单位的小数部分；以上两部分相加就是卡尺的读数。.7.4注意事项7.4.1游标卡尺的正确手持方法。右手正面握尺，用拇指推动游标，左手持物。7.4.2测量前要检查零点。7.4.3临床选用50分度的游标卡尺以提高精确度。8其它注意事项注射结核菌素后牛体可能会出现一些异常反应，应予妥善处理。有发热症状体温37.5以上情况暂不宜作试验；局部出现水泡、溃疡，应保持清洁，涂2甲紫，必要时可用注射器将水泡液抽除；注射后全身发