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实验三 血清总胆固醇的测定目的要求 了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。实验原理 血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 250mg/mL。胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。本法不必离心，颜色产物也比较稳定。试剂和器材一、试剂邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。二、测试样品0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。三、器材试管1.515cm（11）；移液枪，量筒50mL分光光度计。操作方法 一、制作标准曲线取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：管号012345678标准胆固醇工作液(mL)00.050.100.150.200.250.300.350.40冰乙酸(mL)0.400.350.300.250.200.150.100.050邻苯二甲醛试剂(mL)0.200.200.200.200.200.200.200.200.20混合酸(mL)4.004.004.004.004.004.004.004.004.00相当于未知血清中总胆固醇量(mg%)050100150200250300350400A550加毕，温和混匀，2037下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。二、样品测定取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：管号对照样品样品稀释的未知血清样品(mL)00.400.40邻苯二甲醛试剂(mL)0.200.200.20冰乙酸(mL)0.4000混合酸(mL)4.004.004.00A550加毕，温和混匀，2037下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。注意事项1.本法在2037条件下显色。2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。思考题1. 本实验操作中特别需要注意
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