项目4-11维生素的测定.ppt

食品中维生素的测定 Determinationofvitamininfoods 测定食品中维生素在营养分析方面具有重要的意义 1 可评价食品的营养价值2 监督维生素强化食品的剂量 以防摄入过多的维生素而引起中毒 引言 橙汁中VC的测定2 6 二氯靛酚滴定法 学习目标 知识目标 1 能解读国家标准水果 蔬菜中维生素C含量的测定 2 能解释2 6 二氯靛酚法测定的维生素C仅为还原型的原因 3 能说出提取剂必须为草酸或偏磷酸的原因 4 能解释不同方法测定食品中VC含量原理 技能目标 1 能依据国家标准进行食品中VC含量测定实验准备 2 会准确标定2 6 二氯靛酚溶液 正确进行VC的测定 3 会分析实验结果 规范书写分析报告 安全操作 真实记录 素质目标 1 培养学生严谨 务实的学习精神 2 培养学生开拓创新 团结协作的职业素质 基础知识 维生素C是一种己糖醛基酸 有抗坏血病的作用 所以又称作抗坏血酸 维生素C广泛存在于植物组织中 新鲜的水果 蔬菜 特别是枣 辣椒 苦瓜 柿子叶 猕猴桃 柑桔等食品中含量尤丰富 维生素C通常采用草酸 草酸 醋酸 偏磷酸 醋酸溶液直接提取 在一定浓度的酸性介质中 可以消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用 2 6 二氯靛酚滴定法测定原理 还原型抗坏血酸可以还原染料2 6 二氯靛酚 该染料在酸性溶液中是粉红色 在中性或碱性溶液中呈蓝色 被还原后颜色消失 还原型抗坏血酸还原染料后 本身被氧化成脱氢抗坏血酸 在没有杂质干扰时 一定量的样品提取液还原标准染料液的量 与样品中抗杯血酸含量成正比 具体工作任务分解 任务一 仪器设备及试剂的准备 仪器锥形瓶 150mL 容量瓶 100mL 酸式滴定管 25mL 烧杯 移液管 10mL 量筒 50mL试剂1 草酸溶液2 草酸溶液2 6 二氯酚靛酚溶液 配制好后保存在冰箱中 每次使用前 用标准抗坏血酸标定其滴定度 抗坏血酸标准液 称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL20g L的草酸溶液中 此溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸 任务二 样品预处理 量取100mL橙汁饮料 加等量的2 草酸溶液 取20mL 100mL容量瓶 1 草酸稀释至刻度 混合均匀 过滤备用 注 2 草酸在此作为提取剂 实验表明 2 草酸提取效率最高 稳定性最好 试样的制备 鲜样的制备 称100g鲜样 加等量的2 草酸溶液 倒入组织捣碎机中打成匀浆 取10 40g匀浆 含1 2mgVc 于100mL容量瓶内 用1 草酸稀释至刻度 混合均匀 干样的制备 称1 4g干样 含1 2mgVc 放入乳钵内加1 草酸溶液磨成匀浆 倒入100ml容量瓶中 用1 草酸稀释至刻度 过滤上述样液 不易过滤的可用离心机沉淀后 倾出上清液过滤备用 任务三 样品VC含量测定 抗坏血酸标准溶液标定2 6 二氯酚靛酚 染料 标定样品中维生素C的测定 抗坏血酸标准溶液标定 150mL锥形瓶吸取标准使用液2mL加入0 5mL6 碘化钾溶液 3滴1 淀粉溶液0 001mol L碘酸钾标准溶液滴定 终点为淡蓝色 C V1 V2 0 53C 抗坏血酸标准液的浓度 mg mLV1 滴定时消耗0 001mol L碘酸钾标准溶液体积 mLV2 滴定时所取抗坏血酸的体积 mL0 088 1mL0 001mol L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量 mg mL 2 6 二氯酚靛酚 染料 标定 250mL锥形瓶吸取5mL抗坏血酸标准溶液加入1 草酸溶液5mL摇匀用2 6 二氯酚靛酚滴定至粉红色 15s不褪色为终点 样品中维生素C的测定 3个150mL锥形瓶分别吸取样品过滤液5mL快速滴入2 6二氯靛酚溶液 直至红色不立即消失然后一滴一滴的加入2 6二氯靛酚溶液 以呈现的粉红色在15s内不褪色为终点1个150mL锥形瓶分别吸取蒸馏水5mL快速滴入2 6二氯靛酚溶液 直至红色不立即消失然后一滴一滴的加入2 6二氯靛酚溶液 以呈现的粉红色在15s内不褪色为终点 注 对非还原抗坏血酸 如脱氢 不能测出 易受还原性物质影响 适用于新鲜果蔬 测定过程中避免金属的干扰 任务四 分析结果数据处理 任务五 填写检验报告单 1 2 6二氯靛酚 抗坏血酸 1mg mL的含义是什么 2 样品滤液颜色较深会影响滴定终点的观察 该如何处理 3 本方法测定的是试样中抗坏血酸总量吗 为什么 4 配制好的染料溶液是蓝色的 为什么滴定终点却是粉红色的 知识拓展 其他测定方法简介1 荧光法1 原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后 与邻苯二胺 OPDA 反应生成具有荧光的喹喔啉 quinoxaline 其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比 以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量 本方法的最小检出限为0 022g ml 2 适用范围本方法适用于蔬菜 水果及其制品中总抗坏血酸的测定3 仪器实验室常用设备 荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计 打碎机 4 操作步骤4 1样品制备全部实验过程应避光 称取100g鲜样 加100g偏磷酸 乙酸溶液 倒入打碎机内打成匀浆 用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度 4 2氧化处理分别取样品滤液及标准使用液各100ml于带盖三角瓶中 加2g活性炭 用力振摇1min 过滤 弃去最初数毫升滤液 分别收集其余全部滤液 即样品氧化液和标准氧化液 待测定 4 3各取5ml标准氧化液于2个50ml容量瓶中 分别标明 标准 及 标准空白 4 4各取5ml样品氧化液于2个50ml容量瓶中 分别标明 样品 及 样品空白 4 5于 标准空白 及 样品空白 溶液中各加5ml硼酸 乙酸钠溶液 混合摇动15min 用水稀释至50ml 在4 冰箱中放置2h 取出备用 4 6于 样品 及 标准 溶液中各加入5ml50 乙酸钠溶液 用水稀释至50ml 备用 4 7荧光反应取 标准空白 溶液 样品空白 溶液及 4 6 中 样品 溶液各2ml 分别置于10ml带盖试管中 在暗室中迅速向各管中加入5ml邻苯二胺 振摇混合 在室温下反应35min 用激发光波长338nm 发射光波长420nm测定荧光强度 标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标 对应的抗坏血酸含量为横坐标 绘制标准曲线或进行相关计算 其直线回归方程供计算时使用 5 计算X c V m F 100 1000 式中 X 样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量 mg 100g c 由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度 g ml m 试样质量 g F 样品溶液的稀释倍数 V 荧光反应所用试样体积 ml 6 注意事项6 1大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶 因此 抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸 醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生素C 6 2某些果胶含量高的样品不易过滤 可采用抽滤的方法 也可先离心 再取上清液过滤 6 3活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸 但它也有吸附抗坏血酸的作用 故活性炭用量应适当与准确 所以 应用天平称量 我们的实验结果证明 用2g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型 其吸附影响不明显 2 高效液相色谱法 可以同时测得抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的含量 具有干扰少 准确度高 重现性好 灵敏 简便 快速等优点 是上述几种方法中最先进 可靠的方法 但分析成本较高 3 2 4 二硝基苯肼比色法 1 原理 样品中还原糖型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸 再与2 4 二硝基苯肼作用生成红色的脎 根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比 进行比色定量 2 适用范围本方法适用于蔬菜 水果及其制品中总抗坏血酸的测定 3 仪器3 1恒温箱 37 0 5 3 2可见 紫外分光光度计3 3打碎机 4 操作步骤4 1样品预处理量取100mL橙汁饮料 加等量的2 草酸溶液 取20mL 100mL容量瓶 1 草酸稀释至刻度 混合均匀 4 2氧化脱氢处理取25mL滤液 加入2g活性炭 振摇lmin 过滤 弃去数毫升初滤液 取10mL此氧化提取液 加入10mL20g L的硫脲溶液 混匀5 1样品制备全部实验过程应避光 4 3呈色反应取三个试管 各加入4mL经氧化脱氢后的样品稀释液 在其中两个试管中加入1 0mL20g L2 4 二硝基苯肼溶液 1个试管作空白 将所有试管放入 37士0 5 恒温干燥箱保温3h 除空白管外 另外两个试管放入冰水中 空白管常温冷到室温 加入1 0mL20g L2 4 二硝基苯肼溶液 室温中放置10 15min 放入冰水内 4 4硫酸 9 1 处理并比色测定当空白试管放入冰水后 向三支试管内分别加入5mL 9十1 硫酸 取出试管 室温放置30m