实验二 槐花米中芦丁的提取与检识.doc

实验二 槐花米中芦丁的提取与检识一、实验目的1. 通过芦丁提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。2. 掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮甙的检识方法。二、主要化学成分的结构及性质芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现发现芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤其以槐花米（为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料，芦丁是由槲皮素（Querecetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）脱水而成的甙类化合物。芦丁为淡黄色粉末或针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为177-178。芦丁略溶于热水（1：200），难溶于冷水（1：8000），溶于热甲醇（17）、冷甲醇（1100）、热乙醇（130）、冷乙醇（1650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。 芸香苷 R=葡萄糖鼠李糖 槲皮素 R=H三、实验原理由槐花米中提取芦丁的方法很多，目前我国多采用碱提酸沉的方法，其原理是：根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，向此盐溶液加入酸，调节pH值，则芦丁又重新游离析出，从而获得粗制芦丁。除此方法外，还可以采用沸水提取或醇提取法。四、实验器材与试剂器材：铁架台，烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。试剂：芸香苷标准品，生石灰，HCl，乙醇，甲醇，镁粉，醋酸镁，AlCl3，氯仿，铁氰化钾等。五、实验内容1、实验操作流程图滤液加水300ml，用石灰乳调节pH至8-9；加热至微沸，维持pH至30min，趁热抽滤槐花米粗粉20g芦丁（精制品）静置，过滤，在60-70干燥滤液（弃去）沉淀（精制芦丁）重结晶滤液残渣（弃去）放置，冷却60-70，用浓HCl调至pH4-5，静置1小时，抽滤残渣（弃去）2、具体操作步骤（1） 芦丁的提取 称取槐花米20g，置于干燥的研磨中用钵棒挤压成粗粉。称取1-1.5g石灰粉（生石灰），置于干净的小研钵中加入10ml水后研成乳液备用。将粉碎的槐花米置于500ml的烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石灰乳，调节pH至8-9，加热微沸，维持pH值至30min，趁热抽滤。弃去滤渣，冷却至60-70，用浓HCl调至pH4-5，静置1h，析出精制芦丁，抽滤，弃去滤液，收集精制芦丁。将精制芦丁悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，然后趁热过滤，弃去不溶物，充分静置，过滤，收集芦丁结晶，在60-70干燥，得到芦丁精制品。（2） 芦丁检识 取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成四份做以下实验： 盐酸-镁粉反应：取试样溶液各2ml，分别置于两支试管中，各加入镁粉少许，再加入盐酸数滴，观察并记录颜色变化。 Molish反应：取试样溶液各2ml，分置于两支试管中，加10-萘酚乙醇溶液1ml，振摇后倾斜试管45，沿管壁滴加1ml浓硫酸，静置，观察并记录两液面交界处颜色变化。 醋酸镁反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1醋酸镁甲醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。 三氯化铝反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1三氯化铝乙醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na试 样：自制1芸香苷乙醇溶液对照品：1芸香苷对照品乙醇溶液展开剂：氯仿-甲醇-甲酸（1551）显色剂：喷雾1三氯化铁和1铁氰化钾水溶液，临用时等体积混合六、实验结果与分析附薄层层析操作具体步骤1、 铺板：先配置0.5%的羧甲基纤维素纳溶液。以1：3的比例溶解薄层层析用的硅胶6g于研钵中，研磨匀浆无固体颗粒及气泡，然后倾倒在玻璃板上，抖动玻璃板使之平整。然后在室温下晾干，使用前在105-110烘焙0.5-1h即可。2、 点样：配制1芸香苷乙醇溶液，用内径为0.5mm的平口毛细管吸取样品溶液点样。点样前用铅笔在距薄层板一端大约1cm出轻轻的画一条水平横线作为“起始线”。然后将样品溶液小心点在“起始线”上。3、 展开：把点好样的薄层层析放进层析槽（氯仿：甲醇：甲酸=1551）中展开。当展开剂前沿升至距薄层板上端大约1cm时，取出薄层板并标记出前沿的位置。4、 显色：喷雾1三氯化铁和