食用菌母种的制作技术.ppt

实验一食用菌母种的制作技术 食用菌学实验 中南民族大学工商学院实验教学中心环境与生物工程分中心 母种制作技术 母种即一级菌种 多用试管作为容器 因此又称试管种 是第一次用孢子分离法 组织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝体及其经过转管扩大后的菌丝体 一级菌种是菌种生产的基础 一级菌种质量的优劣 直接关系到二级菌种和三级菌种的质量 对食用菌生产产生根本的影响 母种培养基是菌丝体生长繁殖的基础 不同食用菌菌丝体的生长发育对培养基营养成分的要求是不同的 常用的母种培养基有 1马铃薯葡萄糖琼脂培养基 PDA 广泛用于多种食用菌母种的分离 培养和保藏 2玉米粉蔗糖培养基 适用于多种食用菌 特别是香菇 金针菇菌丝生长 3稻草浸汁培养基 适用于草菇菌丝生长 4马铃薯棉籽壳综合培养基 广泛用于培养和保藏多种食用菌母种 1了解食用菌母种及母种培养基的种类 2通过实验 使同学们掌握母种培养基的制作 消毒与灭菌 母种转接等操作技术和方法 一实验目的 灭菌锅 玻璃漏斗 漏斗架 六层纱布 试管 烧杯 中长玻璃棒 水果刀 酒精灯 75 酒精消毒瓶及酒精棉球 镊子 接种钩或铲 恒温培养箱 超净工作台 电炉 马铃薯 葡萄糖或蔗糖 琼脂 试管种 平菇 香菇等 二 实验材料 一 培养基的制作1 PDA培养基 马铃薯 去皮 200g葡萄糖20g琼脂18 20g水1000ml要求各小组按配方配制所需用量 可2 3组合作配制 三 实验内容与方法 2 配制方法a先将马铃薯洗净 去皮 挖掉芽眼 切成1cm见方的小块 称取适量 b将称好的马铃薯放入大烧杯内 加水适量 放在电炉上煮沸后维持15 20min 至马铃薯熟而不烂 c用六层纱布过滤 由于马铃薯在煮沸过程中 有部分谁被蒸发掉 所以过滤后的马铃薯汁 应加水补足水分至初始体积 d将称号的琼脂加入马铃薯汁中 在电炉上用文火加热 直至琼脂完全融化 最后加入葡萄糖等可溶性物质 搅匀 补足水分 标记刻度 e分装试管 培养基配好后应趁热用漏斗分装试管 装入试管高度的1 5 1 4 分装时应注意不得使培养基沾在试管的口壁上 以防杂菌污染 剩余的培养基分装到三角烧瓶中灭菌 f将分装好的试管塞好塞子 7或9支扎成一把 灭菌 若使用棉塞 外面应包一层防潮纸 在用线绳扎紧 防止灭菌时棉塞被冷凝水浸湿 1 具体灭菌要求 1 1kg cm2 121 保持20 30min 2 操作过程加水 装锅 盖盖 加热 当压力升为0 5kg cm2时排放冷空气 正式升压 保压 1 1kg cm2 121 保持20 30min 停止加热 自然降压至零 排放余汽 开盖 取出灭菌物品 趁热摆斜面 检验灭菌效果 32 空白培养48h 二 灭菌 1 左手拿两支试管 一支为已经灭菌的斜面 另一支为已长好的菌种 右手拿接种钩 已在火焰上灼烧灭菌又冷却 并同时用右手轻轻拔下两支试管的塞子 2 将试管口通过火焰数次 并稍转动 以防环境中的微生物落入 三 接种和培养 3 首先将接种钩伸入有菌试管 连同培养基钩取直径为3 5mm的菌丝块 取出接种钩 迅速伸入另一灭菌斜面上并将菌丝块放在斜面的中央 4 烧试管口 塞好棉塞或盖好试管帽 如用胶塞 则不要烧试管口 将接种钩烧一下 插到酒精瓶中 5 将接种好的菌种放入恒温培养箱培养 一般培养2d 检查有无杂菌生长 7 15d母种菌丝即可长满斜面 适合菌种菌丝体生长的最佳温度 Why 通过培养 在试管斜面上可长出洁白 粗壮的菌丝体 说明转接成功 若在试管斜面上出现有光泽 黏液状培养物或呈黄 绿 灰 黑等毛状物时 即