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文档简介

一教学要求 放线菌有多种代谢产物 如抗生素 维生素 氨基酸 蛋白质 淀粉酶 脂肪酶 纤维素酶等 很多产物在农业 医疗 食品及国防等领域产生了巨大的效益 本实验的目的在于学习从土壤等环境中分离放线菌 实验一放线菌的选择分离与计数 二实验原理 土壤中含有丰富的放线菌 但主要是链霉菌 链霉菌以外的其他放线菌 如小单孢菌 游动放线菌 诺卡氏菌等 它们是生物活性物质重要的产生菌 但往往由于样品中稀有放线菌的数量太少 常规的分离方法很难得到 对样品进行风干 干热处理 培养基添加重铬酸钾的方法减少细菌和真菌的数量 用干热和苯酚处理减少链霉菌数量的方法 可以分离得到更多种类的放线菌 三材料与器材 菜园土或林地土 自然风干 备用 0 1 重铬酸钾溶液 1 苯酚 高氏1号培养基 水浴锅等 取样及预处理 1 来源 土壤中放线菌最丰富 品种齐全 可以筛选新的放线菌 从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣中可分离到大量的嗜热放线菌 从淡水和海洋环境中分离到嗜碱性的和嗜酸性的菌种 2 取样及预处理 1 土样 取5cm以下的土样 放于灭菌过的牛皮纸袋中 一般不放于不透气的瓶子或塑料袋中 气生孢子能耐干燥 耐湿热能力高于营养体 室温保存20天 放线菌的数量和组成变化不大 细菌大部分死亡 2 水样与水低泥样用采泥器和采水器采集 放与灭菌瓶 不密封 四操作步骤 1 取体积为300ml的高氏一号培养基 加入0 1 的重铬酸钾15mL 使之终浓度为50ppm 摇匀 倒平板 待用 2 取土样5g 摊平于大号培养皿上 在恒温干燥箱中120 干热处理1h 3 土样热处理后 加入装有45mL无菌水和少量玻璃珠的三角瓶中 加入0 5mL的笨酚 室温下振荡30分钟 静止5分钟 取上清液用无菌水稀释10倍 同时另取土样5g 不加热和笨酚处理 余步骤同上 作为对照 4 用移液管分别吸取原液和10倍稀释液各0 1ml标志稀释倍数的平板上 涂抹均匀 倒置 28 培养 5 培养10 14d 观察比较不同处理方法的生长情况 菌落特征 挑取红色 无气生菌丝的小菌落以及其它菌落形态菌株接种斜面 进一步用于形态观察和鉴定 分离操作步骤 五注意事项 1 注意土样在用之前要风干处理20天以上 以除去
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