天然药化文献翻译.docx

一、为了产生以其优越的抗肿瘤活性化合物,降低了毒性,一系列的它的合成和5-FU deoxypodophyllotoxin耦合40-demethyl-4 -dexoypodophyllotoxin与N -(5-fluorouracil-N1-ly乙酸)-氨基酸(或5-fluorouracil-N1-ly醋酸酸)。这些化合物的细胞毒作用对四人胃癌细胞株(HL-60,- 549,HeLa和SiHa)进行了评估,结果表明,这些化合物方面更有效细胞毒性比父母任何一方或复合结合VP-16和5-FU抗癌药物。此外,我们发现14 d诱导的细胞周期阻滞G2 / M期的陪同下在549个细胞凋亡、14 dcaspase-3激活和7。这些结果表明,caspase-mediated途径参与14 d诱导细胞凋亡的机制。二、介绍1、癌症是一种主要的全球健康问题,代表全球第二大死亡原因1。根据学-信息来自世界卫生组织(WHO),据估计将有1200万人死于癌症。在近几年来,改善了疾病的预防与治疗降低癌症的死亡,和大量的化疗药物已经发展到治疗癌症。2、类(PPT,1),一个自然发生的cyclolignan iso -从Podophyllum草拟的物种,是一个著名的细胞毒性deriva -保守的,作为一种有效的anti-microtubule代理2。尽管作为一个潜在使用药用药物人体试验使用了由于其全身毒性停止3。在过去的30年,广泛的结构改性已经导致了类发展抗癌药物的临床价值,eto -poside(VP-16,2),teniposide(VM-26,3)和水溶性种,磷酸甙(4)。这些药物是目前临床用于治疗小细胞肺癌,睪丸癌、急性白血病、爱滋病相关性卡波济氏肉瘤和淋巴瘤。这细胞毒性机制是VP-16抑制淋巴II(顶部2)不同的是,家长compoundwhich inhibitsmitosis4.VP -通过加强诱导细胞死亡16前II-mediated DNA通过稳定的乳沟瞬态DNA /顶部IIapp的复杂。在这样一个复杂的、DNA裂解两者兼具股及中共价与酶;高档II的毒药防止它游离5。近年来的研究表明VP-16抗肿瘤活性的主要是由于其抑制作用一个顶尖的二世,而这种致癌作用被归因于b碘6。此外,VP-16同意几个潜在的候选药物在临床应用基于PPT试验中,如、NK - 611(5)、GL - 331(6),tafluposide(F11782,7)F14512(8)(图。1)。其中,F11782是顶尖的双重抑制剂-这会oisomerases I、II绑定的酶DNA,但不稳定复杂的裂解7,8。这spermine-conjugated epipodophyllotoxin衍生F14512一个淋巴细胞毒,利用二内源多胺的交通工具系统(PTS)肿瘤细胞对目标优先9,10。3、Deoxypodophyllotoxin(结合、9),模拟的PPT,拥有潜在的anti-proliferative和抗肿瘤活性在不同细胞类型11 e13,以及抗滤过性病原体14和15活动。据透露,抑制tubulin polymeri结合-G2 / M和归纳了细胞周期阻滞,紧随其后的是细胞凋亡的机制通过多种细胞过程,涉及的活化使用自动柜员机、亚洲及Bax的影响,caspase-3激活和7,和积累的PTEN导致抑制蛋白激酶b等路径16、17。此外,研究发现,也inhibitsmigration结合MMP-9 MAPK途径,通过HASMC TNF-a-induced18中。4、在临床上,通常被用来作为抗癌药物是合适的不同的组合药物来治疗癌症,因为只有几个肿瘤是不够灵敏,由单个药物治愈(19)。许多组合,为共同药物,在临床使用由一个antimetabolite与一个或多个其他抗癌代理人。一个共同的药物通常由两种不同的作用药物配合的直接或通过一个连接器20。为了生成更有效的抗癌药物基于PPT,许多药理学家和化学家已经合成大量的conju -盖茨和其他抗肿瘤药物的PPT,如它的podophyllotoxin-camptothecin21,taxoid - epipodophyllotoxin22,23polymer-linked类,- - - - - - - - - - - - vinorelbine旧历phyllotoxin24,thiocolchicine-podophyllotoxin25,biolog -耦合,大多数的这些检查显示它展出体外细胞毒性比优于母体化合物PPT。5、最近,我们有一些类报道它与antimetabolite 5-FU26 e30的结合和衍生品31,32岁。我们持续努力寻找newcompoundswith强有力的活动和lowtoxicity fromnatural产品,考虑氨基酸经常使用一些药物载体车辆因其良好的水溶intomammalian积极组织移植时,在这部作品中,我们描述了合成一系列的物结合5-FU以适当的加入和氨基酸进行试验和衬垫细胞毒性对一组四人胃癌细胞株。此外,复合14 dwas对细胞周期的影响发展、促进肿瘤细胞凋亡、传授给caspase-3和7。三、结果与讨论1、化学合成合成路线的第一个参与目标化合物代5-Fluorouracil-N1-ly醋酸(10)和氨基酸酸衍生物12腹主动脉肠瘘,他们从5-FU合成参考(方案1)报道30,33。简单地说,5-FU是治疗开始时2-chloride醋酸水溶液在他面前氢氧化钾负担复合10。活性酯11通过酯化反应的是第十p-nitrophenol使用吗N,N -dicyclohexylcarbodiimide(DCC)在干燥的氮、N-dimethylforma -心灵(DMF)。中间的11进一步反应,appro -私人氨基酸在碱性DMF-H2O溶剂N -(5 -产量fluorouracil-N1-ly乙酰)-amino酸12腹主动脉肠瘘。4-dexoydopodophyllotoxin进行合成物从40关键中间体-demethy-4-deoxypodophyllotoxin(DDPT,13),这是在我们准备previ描述-程序不断报道31。中间的DDPT连在一起不同的N -(5-fluorouracil-N1-ly乙酸)-amino酸(或5 -Fluorouracil-N1-ly醋酸)和4 - DCC面前氨基二苯乙烯分子吡啶(深度贴图)提供相应的它(- 15)14腹主动脉肠瘘或中等收入高的效果图方案2。所有的合成化合物进行表征红外光谱、1H和13C核磁共振光谱及分辨率的质量光谱测定方法。2、（1）生物活性在生物活性物的14和15结合腹主动脉肠瘘评估了体外细胞毒性试验进行了吗由4个人类肿瘤细胞株(HL - premyelocytic白血病60岁,肺癌的一个549 -,HeLa颈癌,和宫颈癌SiHa鳞状细胞癌),利用VP-16和5-FU,以供参考化合物。筛选程序是基于标准或CCK-8method MTT34,这些实验的结果在表1。（2）表1的阐述,结合物、14和15腹主动脉肠瘘,一般的5-FU,结合,DDPT和VP-16在他们的对这四个细胞系细胞毒性。作为一个群体,这些化合物HL-60细胞是最有效的方法,HeLa最低的效力吗细胞,尽管效力不同的顺序在每个细胞线。IC50的价值的复合14 d,它是最强大的共轭集团的化合物,是0.023,0.56,0.83和0.76毫米HL-60,A -549年,HeLa和SiHa,分别。在表1,我们也发现了近年来在a-carbon不同的氨基酸在这个班的化合物(14 aee)似乎有显著影响他们anti-proliferative活动在体外检测。化合物14大规模表现出更强的活动对四人胃癌细胞株比14日和14个b。此外,它与吞酸结合似乎更烈性比那些有D -氨基酸替代物(14 e与14 f)。值得注意的是,它incor - 15porated DDPT与5 -氟尿嘧啶- N1的-ly醋酸也针对这些cytotoxities展出高四个肿瘤细胞株。此结果和其他地方35岁,36建议DDPT将提高酯的抗肿瘤活性相比复合DDPT开始的。这些结果也证实了这个假设在自由羟基40DDPT地位不是有利于35抗肿瘤活性。（3）据报道,结合诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞G2 / M期细胞在HeLa16、17。它是否DDPT 5-FU有类似的影响,肿瘤细胞的影响14 d细胞周期进程FACS分析测定propidium iodide-stained A - 549细胞37。如图2,治疗0.5毫米14 d导致时间的积累细胞在G2 / M期下降和药物G1期细胞的人口。G2 / M期逮捕最初经过12小时检测治疗;52.6%和64.8%的cellswere在G2 / M期为12 h 14 d暴露(图2 B)和24小时(图2 C)分别比15.6%在未处理的文化(图2 A)。这些结果表明,14 d干扰细胞扣押增殖细胞周期、诱导G2 / M逮捕A549细胞,这DDPT物和5-FU有相似的影响细胞周期阻滞的结合与母体化合物16、17。（4）如上所述,诱导肿瘤细胞凋亡的结合时间的方式,然而,我们没有发现明显的凋亡在14 d-treated FACS分析一个- 549细胞。确认结合物的影响和5-FU的诱导凋亡上,一个- 549的形态进行了Hoechst细胞使用染色。,如图3所示,消极的控制(治疗)的细胞表现出优良的生长特性24小时后孵化(图3)。然而,一个到549个细胞治疗14 d唤起了0.5毫米典型的凋亡特征,如膜blebbing、细胞收缩和剥离、和核缩合-甚至问技术(图3 B)。类似的效果,观察到当细胞遭受到0.5毫米PPT16。（5）天冬氨酸是cysteinyl,还proteinases相合在天冬氨酸蛋白质基质残留。收到一个凋亡信号,还接受前体蛋白水解加工产生积极的活性。还在11在人类的特征,caspase-3和7个主要下-小溪还发挥重要作用效应,在降解大多数的关键细胞成分38细胞凋亡。决定是否参与14 d-induced半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶凋亡、西方吸干了分析利用抗体认识和caspase-7裂形式的caspase-339。我们发现的一种处理- 549细胞14 d - 0.5毫米的毕业生增加的裂隙性两caspase-3(图4)caspase-7(图4 B),以一种时间的方式。这些结果caspases-3展示的介入或七14 d-induced细胞凋亡的机制。四、总结综上所述,cytoxicity测定大部分物增加了许多折叠活动相比父母任何一方或临床药物甙化合物结合,5-FU;此外,有前途的共轭14 d可以诱导细胞周期G2 / M逮捕和凋亡caspase-3阶段采用活性7在- 549细胞。尽管有这些潜在的治疗的好处这种药物通过结合基团合适的氨基酸仍不清楚,所得结果推广我们所相信的该方法也适用于其他抗肿瘤药物,和值得探讨潜在的作用这些和相似类型的化合物。我们目前的结果流更多灯光的潜力的共轭化合物来克服这些化疗耐药的出现频繁代理人。五、实验1、化学性质在Kofler熔点仪和确定眼睛。红外光谱测定Nicolet 5 DX-FT-IR上光谱仪样品之间放整齐KBr盘子。1HNMR13C核磁共振光谱是记录在一个瓦里安Mecury - 400 - BB谱作为内标TMS,所有的化学变化价值观是报告为d ppm。旋光度测定一个Perkin旋光仪埃尔341年1 dm细胞在23 c质量光谱是记录在一个Bruker Daltonics APEXk49eVGZAB-HS(70电子伏特)光谱仪的来源与应急电离,分别。所有反应进行了监测chro用薄层-matograph(TLC)在硅胶GF254(0.25毫米厚)。柱色谱(CC)进行(230 e400硅胶60网格、青岛海洋化工有限公司、中国)。类是分离自胆emodi药草Podophyllum墙于var胆,其他原料,庄智象购买和使用的商业没有进一步净化,除非另有说明。1.1、10的合成过程成为一个解决5 -氟尿嘧啶(6.5克,50中和)、钾氢氧化钠(5.6克,100年中和在水中添加(40毫升)解决氯乙酸(4.75克,50中和)inwater(20毫升)在30分钟内搅拌室温。pH值的使命-提出调整混合物,并保持在10的drop-by-drop添加10%的氢氧化钾溶液。这然后refluxed混合2小时,冷静下来,acidified 2对pH值添加集中的盐酸、水晶的10人被孤立抽吸。填写了再结晶化解产品在饱和水钠bicar -bonate和reprecipitated浓郁的盐酸结果在白色的针。1.2、11的合成过程混合2-N15-FU醋酸(9.8克,0.05组分),p-nitro -苯酚(13.9克,0.1水解)和DCC(10.3克,0.05水解)了无水二甲基甲酰胺(100毫升)为4 h在0 C,然后搅了另一个12 h室温。反应混合物被分散可供光波蒸发了,原油产品是值得进一步探讨的问题在acetonitrile-ethanol再结晶过程中产生复合11分。1.3、12a-f的一般合成过程p-Nitrophenyl 2-N15-fluorouracil-ylacetate 11(1.4克,5中和)被溶解在二甲基甲酰胺(10毫升),然后解决含水5%氢氧化钠(5毫升)适当的a-amino酸(6中和)了themixture搅拌2 h在0 C,然后不断搅了10小时在室温条件下,pH值的反应混合物被阻挡在8 e10。在真空环境下溶剂被移除从水渣结晶,化合物12腹主动脉肠瘘提供针状结晶。1.4、14a-f和15的一般制备Amixture 13(0.5中和),10(或适当的N-5-FU-acetic氨基酸12腹主动脉肠瘘)(0.5中和)和氮、N-dimethylaminopyridine(深度贴图,20毫克)都是在干燥的12种二氯甲烷(10毫升)5分钟室温下氩。氮、没有-dicyclohexylcarbodiimide DCC、104毫克)增加,反应混合物就发动了3 e40 h和薄层色谱法监测。反应混合物在过滤和滤液风干。渣的分离复合14和15负担腹主动脉肠瘘栏浓度-在tography硅胶与dichloromethane-acetone作为洗脱液。1.4.1、2、生物活性评估2.1、细胞毒性检测细胞在37摄氏度孵化在5% CO2气氛。利用MTTKit-8和细胞计数(CCK-8)比色方法的使用生长抑素确定34。合成物和参考化合物5 concentra溶解在盐水-对其(0.005 e50毫米)。为HL-60和HeLa,细胞被镀96孔板,然后暴露在quadplex好48小时。然后CCK-8被添加到每个好。4小时后孵化,absor -在l450 bance以确定板的读者。一549 -和SiHa,细胞在96 -板包裹,允许归属24小时,然后暴露于48小时。quadplex以及媒体吸气,10毫升5毫克/毫升MTT解决方案(稀释在无菌PBS)在无血清培养基稀释被添加到每个好。经过四小时孵化,解决的办法是10分钟判读之下2000每分钟转速。supernatantwasmixedwith DMSO溶液的150毫升,thenwas在一个振荡器摇动。在确定了l570方式一个盘子的读者。IC50值一个日志情节的确定控制与浓度的。2.2、细胞周期分