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等电点沉淀法实例 酪蛋白等电点沉淀法快速鉴别奶粉和乳清粉 前言 奶粉和乳清粉在外观上很相近 水溶液性状亦相似 直接很难区分 实验原理 乳清粉不含酪蛋白 只含乳清蛋白 而常规的全脂奶粉 脱脂奶粉以及其他调制奶粉等均含有酪蛋白 实验中 以酸调节待测样品水溶液pH值至4 6附近 奶粉溶液有白色絮状凝块从溶液中沉淀出来 乳清粉溶液 则无此沉淀反应 利用这个现象立即就可以将奶粉和乳清粉区别开来 实验部分 试剂 盐酸 1 19 量取10ml盐酸 加水稀释至200ml 精密pH试纸 pH318 514 鉴定方法及结果判断取约015g样品置烧杯中 加入10ml水 搅拌溶解成均匀溶液 用吸管逐滴滴入盐酸 1 19 边滴边摇匀 并用试纸测其pH值 当pH值在416或其附近 如418 411 时 观察有无白色絮状凝块生成 若有 即为奶粉 若溶液仍呈乳浊状 无凝块形成 即为乳清粉 讨论 等电点现象是蛋白质 氨基酸的特点之一 蛋白质由多个氨基酸分子以肽键连接而成 具有两性离解性质 其离解情况复杂 总离解可用下式表示 其中P代表蛋白质 参考文献 1 杭州商学院教材 乳与乳制品工艺学 1992年 2 郑集编 普通生物化学 高等教育出版社 1989年 人血清小分子蛋白质分离中等电点沉淀法的探索 目的 探索经等电点沉淀法去除高丰度蛋白后用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清中小分子量 10kD 蛋白质的方法 方法 血清经U9处理后加不同pH值的缓冲液沉淀高丰度大分子量蛋白 取上清超滤 MW 3kD 浓缩 置换 用Tricine SDS PAGE电泳检测 实验步骤 缓冲液的配制预分离血清Tricine SDS PAGE电泳分离检测Brandford法测定不同pH缓冲溶液沉淀后上清液的蛋白质浓度 结果 Tricine SDS PAGE电泳检测分析 Brandford法检测蛋白含量 参考文献 1 RileyLW RemisRS HelgeronSD etal1HemorhagiccolitisassociatedwitharareEscherichiacoliserotype J 1NEnglJMed 1983 308 681 6851 2 LijimaY HondaT1CharacteristicsandmolecularbiologyofverotoxinproducedbyenterohemorrhagicEscherichiacoli J 1NipponRinsho 1997 55 646 6501 3 顾宝柯 徐学斌 金汇明 等1上海地区家禽 家畜及肉制品大肠埃希菌O157 H7监测 J 1疾病监测 2003 18 1 5 71 4 王炜 刘爱红1衢州市首次检出O157 H7大肠埃希菌 J 1疾病控制杂志 2003 7 1 791 5 李景学 崔树玉
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