3无菌检查法(薄膜过滤法)操作程序.doc

贵州明湖药业股份有限公司 GMP文件文件名称无菌检查法（薄膜过滤法）操作程序文件类别 技 术 标 准制订部门质量保证部起 草 人日 期原 编 号-修 订 人日 期修订后编号SOP-QUD-0115-2006审 核 人日 期页 数共3页批 准 人日 期实施日期2013年6月1日颁发部门贵州明湖药业股份有限公司分发部门质量保证部目 的 建立无菌检查法。依 据 国家药品监督局药品生产质量管理规范(2010年修订)第七十五条范 围 本标准适用于抗菌药物注射液。责任人 试剂配制人及QA负责人、化验员对本标准实施负责。内 容1 概述 无菌检查是检查药品是否染有活菌的一种方法。2仪器、设备和用具2.1 恒温培养箱及可调2025的生化培养箱。2.2 显微镜、蒸汽灭菌器、标准pH比色器(0.02酚磺酞指示液和澳钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。23 三角瓶、刻度吸管(1、5、10m1)、玻璃器皿、移液管、试管。231 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管衙内或牛皮纸袋内盖严，灭菌备用。2.3.2 试管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内23处，用皮纸格管口(包括塞子)包扎严,灭菌备用。2.3.3 将注射器、针头(89号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。2.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。2.5 真空泵。2.6 用具的灭菌 将包扎妥的用具(除另有规定外)，在(121土05)蒸气灭菌30分钟，物品取出时切勿立即置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，易致染菌，应置恒温培养箱中烘干。适于高温灭菌的器皿也可采用160干热灭菌2小时。3 试液 3.1 75乙醇溶液配制酒精棉球用。3.2 碘配溶液配制碘酒棉球用。3.3 新洁尔灭(1：1000)溶液。3.4 3-5甲酚溶液或其他适宜消毒溶液。3.5 0.02酚磺酞指示液pH6.8-8.4系列比色液管3.6 溴甲酚蓝指示液pH6.0-7.6系列比色液管。3.7 2mol/L盐酸溶液。3.8 2mol/L氢氧化钠溶液。4 培养基4.1 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的pH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。 4.2 新鲜配制的培养基，应按中国药典2005版规定的处方，对培养基的原材料要进行挑选，化学药品均需用CP试剂规格。5操作人员 用肥皂、水清洗双手，关闭紫外光灯，进入缓冲间，换拖鞋，再用碘酒棉、75乙醇棉球擦手，穿载衣、帽、口罩。将所需物品剥去牛皮纸，移入无菌间，每次试验中所用物品必须计划好，并有备用物。6供试品外部消毒 用75L醇棉球擦拭外壁及瓶塞，待干，用灭菌撬瓶器剔去铝盖，再用75L醇棉球擦拭瓶塞，过火焰数次。7供试品制备 注射液可直接用注射器吸取药液。按规定或需灭活的供试品可用灭活剂溶解，将瓶内供试液抽出稀释至规定的浓度。依法接种于上述培养基中。8 操作8.1如供试品有抗菌作用，按中国药典2005年版无菌检查法表1规定量取供试品10瓶，照直接接种法供试品制备项下，吸取供试液加入无菌0.9氯化钠溶液或其他适宜的溶液至少100ml具塞的瓶中，混匀。用薄膜过滤器，通过火焰，将瓶塞打开倒入薄膜滤器内，立即开动真空泵将供试液抽干，然后用无菌09氯化钠溶液或其他适宜的溶剂冲洗滤膜，每冲洗一次需将液体抽干，冲洗次数及冲洗液量依供试品种类及量而异，至阳性对照菌正常生长为度，打开抽气瓶塞中的排气管的螺旋夹，将过滤器从排液管架取下，松动底座的螺母，取下滤膜部分，用灭菌镊将滤膜取出，放入灭菌双碟中，用灭菌剪刀将滤膜剪成3等份，分别加入需气菌、厌气菌和真菌培养基中。采用封闭式过滤器时，将双芯针头插至供试液容器塞上，开动电脑蠕动泵电源，使药液均匀通过3个一组的集茵培养器，待药液排尽，关闭电源，将针头取下插至无菌0.9氯化钠溶液或其他适宜的冲洗液的容器塞上，冲洗集茵培养器的滤膜，照上述操作要求，冲洗次数及量以阳性对照管细菌生长为度。关闭电源，将集菌培养器上排气孔胶帽取下，套于集菌培养器底部的排液管口上；将连接集菌培养器塑胶管之一用夹子(或止血钳)夹紧，将针头插入含需气菌、厌气菌培养基200ml的容器塞上，启动电源。使该种培养基均匀加至两个集菌培养器中，分别用夹子夹紧与其相连的两个塑胶管，同时开通另一个塑胶管的夹子，将针头插入含真菌培养基lOOmI的容器塞上，启动电源，待真菌培养基全部移入培养器中，关闭电源，取下集菌培养器，用夹子夹紧塑胶管近端，用剪切断塑胶管远端。82 将已操作完毕的培养基移出，依供试品特性加入相应的对照菌液1m1(抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生抱梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌)，按规定温度与时间培养。阳性对照管细菌应在培养2448小时，真菌应培养2472，小时有菌生长。薄膜过滤后，须冲洗。8.3 每次操作时，均应取相应溶剂和稀释剂、及冲洗液同法操作，作为阴性对照。9 结果判断 当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长时，可根据观察所得的结果判定： 如需气菌、厌气菌及霉菌培养管均为澄清