百合中含糖量的测定.doc

百合中含糖量的测定一、实验材料：兰州百合二、试剂配置： 80 % 的乙醇：用95 % 的乙醇配置； 30 %的HCl,：用36 %的浓HCl,配置；蒽酮试剂：150 mg蒽酮溶于100 ml 稀硫酸 (76 ml 浓硫酸加入到30 ml 水中)；0.1% 的间苯二酚：0.1 g间苯二酚溶于100 ml 95 %的乙醇；2 mol/L NaOH：8 g NaOH溶于100ml水中；氯化钙-醋酸溶液：250 g氯化钙加蒸馏水500 ml溶解，静置过夜，用醋酸调整pH到2.02.2；DNS：185 g酒石酸钾钠，溶于500 ml水中，加热至45，向酒石酸钾钠中加入6.3 g 3,5-二硝基水杨酸，在加入2 mol/L 的NaOH 262 ml后，再加入5 g苯酚和5 g亚硫酸钠，溶解后定容至1000 ml，并在4保存； 测标准曲线的葡萄糖、蔗糖和果糖配置浓度为1mg/ml。三、实验步骤1、提取取2 g 百合，溶解在4 ml 80 % 的乙醇中研磨，再用2 ml 80 % 的乙醇涮洗研钵，将液体全部转移到离心管中，75加热10 min，5000转离心10 min，收集上清。沉淀加80 % 的乙醇4 ml重复抽提两次，合并上清液后，用80 % 的乙醇定容至25 ml。2、可溶性总糖含量测定向试管中加入3 ml蒽酮试剂，再加入100 l乙醇提取液， 90保温15 min ，冷却后于620nm处测吸光值。含量以gg-1鲜重表示。用20-100 g 的葡萄糖同法测定，作标准曲线（体系中加入20l-100l葡萄糖，再用乙醇补足剩余体积）。试管号012345试样葡萄糖(ul)0102030405050乙醇（ul）100908070605050蒽酮（ml）33333333、蔗糖含量测定取200 l乙醇提取液，加入400 l 2 mol/L NaOH，100煮5 min，冷却后加入4 ml 30 %的HCl,1200 l 0.1 % 的间苯二酚， 80保温10 min，冷却后于480nm处测吸光值。蔗糖含量以gg-1 鲜重表示。用40-200 g 的蔗糖同法作标准曲线（体系中加入40l-200l蔗糖，再用乙醇补足剩余体积）。试管号012345试样蔗糖（ul）04080120160200200乙醇（ul）200160120804000NaOH（ul）400400400400400400400HCl (ml)4444444间苯二酚（ul）12001200120012001200120012004、果糖含量测定取400 l乙醇提取液，加入800 ul 0.1 % 的间苯二酚和2800l 30 %的HCl ， 80保温10 min，冷却后于480nm处测吸光值。果糖含量以gg-1 鲜重表示。用40-200 g 的果糖同法作标准曲线（体系中加入40l-200l果糖，再用乙醇补足剩余体积）。试管号012345试样果糖（ul）04080120160200400乙醇（ul）4003603202802402000间苯二酚（ul）800800800800800800800HCl (ul)12001200120012001200120012005、还原糖含量测定取2 ml乙醇提取液，加入4mlDNS后，在沸水中加热2min, 冷却后于54nm处测吸光值。还原糖糖含量以gg-1 鲜重表示。用200-1000 g 的葡萄糖同法作标准曲线（体系中加入200l-1000l果糖，再用乙醇补足剩余体积）。试管号012345试样葡萄糖（ml）00.20.40.60.812乙醇（ml）21.81.61.41.210DNS（ml）44444446、淀粉含量测定（1）淀粉工作曲线的制作：准确称取可溶性淀粉0.0000，0.1000，0.2000，0.3000，0.4000，0.5000，0.6000g于150ml三角瓶中，各加氯化钙-醋酸溶液30ml，于80水浴中水解10分钟，取出冷却后将溶液移入100ml容量瓶中，用蒸馏水定溶，测定旋光度，以旋光度为纵坐标，可溶性淀粉的质量为横坐标作图，绘制标准曲线或计算回归方程。（2）样品测定:称取5g鲜样烘干研细放置于