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文档简介

酵母RNA的制备及组分测定 实验目的 掌握稀碱法分离酵母RNA原理及操作过程 实验原理 酵母细胞富含核算 其中只要是RNA 含量可达干菌体的2 67 10 而DNA含量有0 03 0 516 因此工业上提取RNA多以酵母为原料 利用稀碱法使酵母细胞变性 裂解 然后用酸中和 除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA 或调pH2 5利用等电点沉淀 这种方法成本低 工业简单 得到的产物为变性的RNA 主要用作制备核苷酸的原料 RNA含有核糖 嘌呤碱 嘧啶碱和磷酸各组分 加硫酸水解RNA 水解液可以用定糖 加钼酸铵沉淀和加硝酸银沉淀等方法测出上述组分的存在 实验试剂 1 0 2 氢氧化钠溶液 2 95 乙醇 3 冰醋酸 4 10 硫酸溶液 5 0 1mol L硝酸银溶液 6 1mol L氨水 7 三氯化铁 浓盐酸溶液 8 地衣酚 乙醇溶液 9 钼酸铵溶液 实验步骤 一 酵母RNA的提取称取4g干酵母粉置于200mL烧杯中 加入40mL0 2 NaOH溶液 沸水浴30min 并经常搅拌 然后加入数滴乙酸溶液使提取液呈酸性 用广泛试纸检查 4000r min离心15min 取上清 加入30mL95 乙醇 边加边搅动 加毕后4000r min离心5min 弃上清 沉淀用95 乙醇洗涤2次 每次5mL 洗涤时可用玻璃棒小心搅动沉淀 最后将沉淀转移到滤纸上 让其自然干燥 称量所得RNA粗品的质量 计算 RNA质量 g 干酵母粉RNA含量 100 干酵母粉质量 g 二 RNA组分鉴定RNA水解 取1g提取的RNA 加入10 硫酸溶液5mL 沸水浴10min 制成水解液 然后进行组分鉴定 1 嘌呤碱 1mL水解液 2mL氨水 再加入1mL硝酸银 观察现象 2 核糖 1mL水解液 2mL三氯化铁 盐酸 0 2mL地衣酚 乙醇 沸水浴10min 观察现象 3 磷酸 2mL水解液 5滴硝酸银 1mL钼酸铵 沸水浴加热 观察现象 实验结果 1 计算干酵母粉中RNA的含量 2 记录RNA各组分鉴定后 观察到的现
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