质控和校准的相关问题.doc

摘自：现代血细胞分析技术与临床P55-56页 第二节 血细胞分析仪的校准一、 血细胞分析仪的校准方法 根据ISO15189文件-医学实验室质量与能力专用要求的精神和ICSH颁布的文件要求，血细胞分析的监测结果只有溯源至参考方法，才能保证结果的准确性和不同实验室检测结果的可比性。因此，血细胞分析仪必须按照国际参考方法进行校准。在一台新血细胞分析仪安装好后，其仪器检测结果中的全部或某一项不准确，需要进行校正；或在日常工作中，由于多种原因，检测结果会逐渐产生漂移现象，也需要对仪器的一些指标进行重新校正。其校准方法见图3-1。二、 血细胞分析仪校准应注意的问题 1 校准仪器最好采用所购买的血细胞分析检测系统配套的校准物。由于其价格昂贵、有效期短且难以及时购买，也可以使用经国家认证的血液学参考实验室用国际参考方法准确定值的正常人新鲜血。2 人工微粒制品的质控物，一般不能用于校准仪器，如经准确定值，只能校准同型号仪器。3 如用同一人工微粒制品（或醛化细胞）校准几个型号仪器，则必须首先分别校定该制品或醛化细胞在各型号仪器上的定值。如考查在某医院内几台仪器或某地区各家医院仪器的准确性（很可能这些仪器不是同一个类型），最好使用经准确定值的正常人体血液。如用人工微粒制品或醛化细胞，评价回报结果应以相应仪器值为标准。 用ICSH推荐的参考方法将Hb、RBC、WBC、PLT及HCT进行定值此血液可校准任何型号的待校准血细胞分析仪（此时，此血液科维校准物）用此血液校准性能稳定、准确度、精密度高的血细胞分析仪（校准后的仪器可称为校准物）人体静脉血（K2-EDTA抗凝血液可用此仪器定值任一正常人的抗凝血可定值人工微粒制品的质控物（醛化的血细胞或乳胶微粒）可用此血液调试任何型号的血细胞分析仪其测定值只能用于定其值的同类型的血细胞分析仪 图3-1 血细胞分析仪的校准方法摘自库尔特公司杂志1 测量库尔特S-Cal校正物的参考方法库尔特公司运用以下的参考方法测量S-Cal校正物的值，其中包括ICSH推荐的方法和NCCLS认可的标准。WBC-用ISOTONII稀释成1:500的悬液，操作中需要使用一个100微升的TC（To contain）移液管，0.5毫升ZAP-OGLOBIN溶解液和一个50毫升的A级烧瓶。用库尔特Z系列计数仪*对悬液进行计数，低阈值端始于45fl，计数经重叠校正。RBC-用ISOTONII或ISOTONIII配成1:100,000的悬液，操作中需要使用一个100微升的TC（To contain）移液管，和一个1000毫升的A级烧瓶。用库尔特Z系列计数仪*对悬液进行计数，低阈值端始于35fl，计数经重叠校正。Hgb-用NCCLS推荐的氰化血红蛋白（氰化高铁血红蛋白）法试剂配成1:250的稀释溶液，操作中需要使用一个200微升的TC（To contain）移液管，和一个50毫升的A级烧瓶。读取稀释液在504、540和750nm的毫摩尔消光系数来计算Hgb值。根据NCCLS标准的H15条，检测还包括分析ICH/RIVM参考制备物。MCV-该数值由红细胞计数和细胞压积（PCV）计算而来，就PCV通过测量细胞的微比积获得，不排除细胞间夹入的少许血浆含量。根据NCCLS标准的第H7条，MCV的计算公式为MCV（fL）=PCV/每升细胞数Plt-作1:101稀释，操作中需要使用一个20微升的TC移液管，和2毫升经过过滤的1%草酸铵溶液。将稀释悬液滴于清洁干燥的Neubauer血细胞计数板上，置潮湿箱约10分钟。利用相差照明，将两块计数池内每毫米平房的血小板数作平均，再乘以1010。*库尔特Z系列分析仪用于WBC和RBC检测的计数孔大小是100微米75微米，压力计的体积是500微升。2.1定义质控物：在日常操作中用于检查某一分析过程或仪器表现一致性的物质。它必须类似于病人标本并同病人标本一起分析。固化血液：是一种血细胞的制备物。对血细胞进行处理可延长其使用期，使之成为质控物。该产品可能缺乏一些血液的功能特性。精确度：重复检测的一致性。所谓不精确度就是一组检测结果的SD值或CV值。可接受范围：允许误差的指定范围。该范围既取决于实验误差对临床意义的影响程度，又依赖于技术上的可行性。2.2 市售质控物使用保存的血液作为质控物的发放已经成熟，血液学家越来越意识到标准化的重要性，库尔特的4C和5C就是用于血细胞分析仪的质控物。J.M. Gibson曾在一本书中指出过固化血液的局限性。血液的长期稳定性和它对变化的敏感性是一对矛盾的两个方面。依我看来，血液越是稳定，它的敏感性就越差。固化血液与正常的新鲜血液在很多方面不同，这些不同会导致质控的问题。同一种产品在不同技术的分析仪上检测会得到不同的结果。这种不同部分是由于仪器精度的问题，但它并不是唯一的原因，以下几方面的差异也是起作用的因素：保存血液和新鲜血液的粘稠度；取样技术；稀释比例和稀释技术；溶血时间和溶血剂强度。对于新鲜血液，所有的仪器都应该给出相同的检测结果，但是。对于保存溶液，不同的仪器上可以得到不同的结果。对一些质控调查的分析揭示了该类结果差异。一个好的质量控制管理体系包括使用校正品，质控物和病人血液。校正物必须是出自某一参考方法的。质控物的稳定期必须足够长以保证使用，且同时其敏感性也必须得到保证。如果固化的细胞太坚固，它将缺乏敏感性。要有一个较广范围的实验室间质量保证项目，就像库尔特公司组织的IQPA，来验证质控物。一个好的质控项目可以保证病人得到更好的诊治。2.3 Brain S. Bull的XB分析Brain S. Bull发现，在个体（没有疾病）的不同时期，平均红细胞体积（MCV）和平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）显得十分稳定。进一步，他还发现不同人群组之间这些指数值也表现得尤为一致。这些观察结果发表于1976年。XB分析的基本原理就这样问世了。后来，他又报道说他最初制定的靶值是不受区域限制的。在随后的著作中，他对血细胞分析仪的XB监控和质量控制提出了实践性的见解。3实验室间质量控制项目（IQAP）相对简单的IQAP图标用一个点来显示准确度和精确度，方便地描绘出实验室间的关系，实施IQAP的结果，是使同类组内的一致性得到了稳步改善（例如，血红蛋白的CV值从原先的两位数发展到现在的一位数低值）。使命：IQAP的使命是：-为新的用户和现有用户提供较完善的质量控制；-为库尔特公司提供资料丰富而准确的数据库；-促进质控分为；全面的数据库：数据库包括以下几个专业的信息：-血液-生化-流式细胞仪它为世界各地许多国家的用户提供服务。它涉及到11种型号以上的13,999台仪器。每个月输入45,000份数据，发出19,126份报告。关于库（Pool）的原理：在IQAP中，库是评审同类组的核心，它汇集了来自同类组内各实验室的数据，这些实验室使用相同批号的质控物，并用于同类仪器。当我们得到用户数据、质控物批号和仪器类型的时候，库就形成了。数据必须是同质的，也就是说，所有的递交数据必须在其均值的3SD之内，参考相应的质控物批号，就是在靶值的允许波动范围的三倍之内（一个非常非常宽的范围）。一个库最少要有16个实验室，不是16台仪器，才可以出报告。每个实验室至少要递交10次记录。库的大小没有限制，通常可以达到用于700台左右的仪器。数据每星期处理4次，以便使库尽可能大一些。如果一个库只有16个实验室递交的数据，其平均值依然有效。事后若有第17个实验室加入，它对库平均值的改变只有1/17，非常轻微。同一时间内约有300个库在工作着。库构成了一种标准，个别实验室的结果要与它相比较。每个库都是：l 针对指定的仪器和质控物而言l 允许同类组进行比较l 不受靶值的影响定义：l 变异系数指数（CV）用于测量库尔特IQAP中所提及的精度，它是用户CV和库CV的比值，是对总体表现得衡量。CVI=CV/库CV。l 标准差指数（SDI）是平均值和标准差的比值，有单位。用以衡量准确度。SDI=（参加者值-同类组平均值）/同类组SD。X轴表示标准差的数量，显示用户与同类组平均值（真值）比较的差异。它可以是+或，用SDI表示，指准度。Y轴是将用户数据的变异系数同同类组的进行比较。它呈对数正态分布（不能比最好的更好了），用CVI表示，指精度。用IQAP数据库评价4C质控物的表现：这两张图显示对库尔特4C和5C细胞质控物靶值的再现程度，我们可以看到其靶值有很好的再现性。一个好的质量控制管理体系包括使用校正品，质控物和病人血液。校正物必须是出自某一参考方法的。质控物的稳定期必须足够长以保证使用，且同时其敏感性也必须得到保证。如果固化的细胞太坚固，它将缺乏敏感性。要有一个较广范围的实验室间质量保证项目，就像库尔特公司组织的IQPA，来验证质控物。一个好的质控项目可以保证病人得到更好的诊治。P214页 五、光散射法红细胞和血小板计数 以二维激光散射法检测红细胞和血小板。红细胞测试原理是：在测试系统中，全血与红细胞/血小板稀释液混合，使自然状态下双凹盘状扁平圆形的红细胞成为球形并经戊二醛固定，此种处理并不影响MCV体积。红细胞无论以何种方位通过测量区时，被激光束照射后所得的信号是相同的。激光束以低角度前向光散射和高角度光散射同时测量一个红细胞，根据低角度光散射转换能量的大小，测量单个体积与总数；根据高角度光散射得出单个细