血球计数板误区探究.docx

血球计数板误区探究“培养液中酵母菌种群数量的变化”是新课程标准增设的一个探究活动，旨在培养学生建构种群增长的数学模型，并用数学模型解释种群数量变化的能力，具有多方面的意义和价值。但这项探究历时长，涉及的技术多而复杂，教科书通常仅作简要的提示，因此具体实施过程中需要教师提供或师生共同查阅相关资料，如血球计数板的使用就是学生学习中不容回避的障碍之一。但不同版本的教科书、大学教材、网络资源及某些中学教辅书籍说法不一，甚至还不乏谬误，易给师生的教与学造成混乱，甚至误导。笔者通过多方求证和实践，力图就血球计数板使用过程中经常遇到的一些困惑逐一探讨，以期达成共识并解除诸多疑惑。1规格之误区关于探究活动中血球计数板的选用，人教版、浙科版教材推荐使用2mm2mm方格，苏教版推荐使用1mm1mm方格。后者在市场上较为常见，多数大学教材也多以此规格为例。以上数据是指计数板计数平台上大方格的规格，也即计数室的边长。由于方格网距盖玻片0.1mm，因此，这两种计数室的容积分别为0.4mm3(410-4mL)、0.1mm3(110-4mL)。当镜检所选中格并计数完毕后，推算出整个计数室细胞总数，除以计数室容积就可获得所测培养液中酵母菌的种群密度。2公式之误区(以1mm1mm规格计数板为例)每种规格的血球计数板的计数室通常与又有两种规格，一种是2516型，即大方格中含25个中格，每个中格又分为16个小方格，因此每个大方格(计数室)中含有2516个小方格；另一种为1625型，即大方格中含16个中方格，每个中方格又分为25个小方格(2004年版河北少儿版教科书第82页示意图在表示方格划分方面存在失误)，每个大方格(计数室)中含的小方格数为1625。显然，尽管规格不同，但两类计数室均含有400个小方格(2516或1625)。2.1用2516型计数室计数通常计数四个角及中央的五个中方格(516=80个小方格)的细胞数A，计数重复3次，取平均值。计算公式为：酵母菌个数/1mL=80个小方格细胞总数/8040010000稀释倍数；或：=A/52510000稀释倍数。2.2用1625型计数室计数通常计数四个角的中方格(425=100个小方格)的细胞数A，计数重复3次，取平均值。计算公式为：酵母菌个数/1mL=100个小方格细胞总数/10040010000稀释倍数；或：=A/41610000稀释倍数。公式中，“10000”是指1mL相当于10000个计数室(容积为0.1mm3)的容积。因为：1mL=1cm3=1000mm3，0.1mm3=110-4mL。“10000前面的式子表示计数室中细胞总数，可用小方格数400平均每个小方格中细胞数，也可用计数室所含中方格数平均每个中方格中细胞数。综上所述，计算公式可概括为：酵母菌个数/1mL=计数室中酵母菌数10000稀释倍数，其中计数室中酵母菌数因其规格及取样方法而异。3边缘效应之误区对如何处理样方边缘上的个体，人教版教师教学用书必修三2007年版第75页明确描述为：“一般而言，样方顶边、左边及左角处的个体统计在内，其他边缘不作统计。”浙江科学技术出版社教科书必修三2004年版第72页描述为：“压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数”。河北少儿版第82页也有类似的描述，但还常见到以下不同说法：2010年版教辅资料世纪金榜第42页描述为：“对于压在小方格界线上的酵母菌，应只计数相邻两边及其顶角的酵母菌。”1989年第二版高等学校教材微生物学实验第137页则描述为：“位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。”综上所述，鉴于中学阶段教学实际及操作的可行性和避免混乱，建议采用人教版教学用书的处理约定。通俗地说即：在计数时遵循“计上不计下，计左不计右”的原则，交点处个体只记一次。4加样之误区因血球计数板在结构及原理上不同于普通的载玻片，其加样及盖盖玻片也有特殊要求，即“先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余的培养液用滤纸吸去”。(人教版教科书必修三2007年版P68)。河北少儿版第82页描述为：“从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片下缘滴入一小滴(勿产生气泡)，用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液”。而浙科版第72页却描述为：“用滴管从试管中取1滴培养液到血细胞计数板的方格区，盖上盖玻片。”网络中部分实验视频中也采取了后盖盖玻片的方式。其实，后盖盖玻片也未尝不可，但它对液滴量的要求较高，盖盖玻片时也易产生气泡。因此，从操作规范及成功率角度讲，应采用先盖盖玻的方式。至于加样位置，因计数室靠外侧边缘的平台已作斜面处理(如图1)，这使得在盖玻片(图中最上层虚线框)边缘处与计数室所在平台的距离大于0.1mm，就是为了方便液滴自行吸入，因此，图1中箭头所示部位为最佳加样位置。待液体充满计数室所在平台，立即撤走吸管，一般不会有过多的液体流入沟槽。相反地，若从沟槽内沿盖盖玻片下缘滴入，不易操作且易导致液滴流入沟槽。因此建议采用人教版所述流程操作。适量加样之后，从侧面观察应如图2所示状态。但不少教辅资料如2010年版世纪金榜第42页及一些介绍其用法的文章常将侧面图表示为图3状态，若如此，则意味着培养液已因过多而溢入沟槽，这是不符合操作规范的。5小结如今，方便快捷的网