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生物化学实验下载-样例.doc实验四影响酶促反应速度的因素【目的】观察温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。【原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解,生成一系列水解产物,即糊精、麦芽糖和葡萄糖等。淀粉及其水解产物遇碘会呈现不同的颜色。在不同温度,不同PH值下,唾液淀粉酶活性不同,催化淀粉水解程度不一,生成的产物也就不同。此外,激活剂、抑制剂也能影响淀粉酶活性,影响淀粉的水解。因此可根据在不同反应条件下,溶液加碘呈现的不同颜色来判断淀粉的水解程度,从而验证了温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。【器材】试管(10mm100mm)、试管架、电热恒温水浴箱、沸水浴、冰浴、多孔白瓷板、滴管。【试剂】1.1%淀粉溶液 同实验五2. 稀碘溶液 称取碘2g,碘化钾4g,溶于1 000蒸馏水中,置棕色试剂瓶中。3.缓冲液(1)pH3.0缓冲液 取0.2mol/LNa2HPO4溶液205ml,0.1mol/L柠檬酸溶液795ml,混合后即成。(2)pH6.8缓冲液 同实验五(3)pH8.0缓冲液 取0.2mol/LNa2HPO4溶液972ml,0.1mol/L柠檬酸溶液28ml,混合后即成。4.1%NaCl溶液 称取氯化钠1g,加蒸馏水至100ml即成。5.1%CuSO4溶液 称取结晶硫酸铜1g,加蒸馏水至100ml。6.1%Na2SO4溶液 称取硫酸钠1g,加蒸馏水至100ml即成。7.稀释唾液 同实验三。【操作】1.温度对酶促反应速度的影响 取3支试管,编号,按下表操作:温度对酶促反应的影响加入物(滴)123pH6.8缓冲液2020201%淀粉溶液101010置37水浴5分钟置沸水浴5分钟置冰水浴5分钟稀释唾液555置37水浴10分钟置沸水浴10分钟置冰水浴10分钟取出,各管加入碘液1滴,摇匀,观察并记录颜色变化。2.PH对酶促反应速度的影响 取3支试管,编号,按下表操作:pH对酶促反应的影响加入物(滴)123pH3.0缓冲液20pH6.8缓冲液20pH8.0缓冲液201%淀粉溶液101010稀释唾液555摇匀,置37水浴保温510分钟,向各管各加入1滴碘液,摇匀,观察并记录颜色变化。3 激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响 取4支试管,编号,按下表操作: 激活剂和抑制剂对酶活性的影响加入物(滴)12341%淀粉溶液10101010pH6.8缓冲液202020201% NaCl溶液10 1% CuSO4溶液 10 1%Na2SO410蒸馏水10稀释唾液555 5混匀,置37水浴中保温510分钟取出,各管加入碘液各1滴,观察并记录颜色变化。【结果及分析】观察各管颜色变化,说明温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。 【思考题】1. 何谓最适温度?淀粉
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