第二十五章：厌氧菌及检验.ppt

第二十五章 厌氧菌的鉴定 Anaerobicbacteria检验系刘涛 掌握厌氧芽胞梭菌的生物学特性掌握厌氧芽胞梭菌的检验程序掌握厌氧菌的培养方法熟悉常用厌氧菌鉴定试验 学习目标 厌氧菌的概念与分类 厌氧菌是指有氧条件下不能生长 无氧条件 不是绝对 下才可以生长的一类细菌 根据结构分厌氧芽胞梭菌和无芽胞厌氧菌厌氧芽胞性梭菌属包括130个种的细菌 无芽胞厌氧菌有40多个菌属 300多个菌种和亚种 厌氧菌在正常人体内的分布 分布广泛 包括口腔 上呼吸道 胃肠道及泌尿生殖道粘膜和皮肤 绝大多数为无芽孢厌氧菌当机体防御功能减弱时 可能成为条件致病菌 致病的原因 组织缺氧或氧化还原电势降低穿刺伤等封闭性伤口 血管压迫 肿瘤压迫等等机体免疫力低下机体局部屏障破坏 临床症状 感染部位产生大量气体 组织脓肿和坏死 皮下有捻发音 是产气夹荚膜梭菌感染的特征分泌物有恶臭 或为暗红色 分泌物涂片经革兰染色 发现细菌 而培养阴性发生在粘膜附近的感染深部外伤 厌氧菌标本的采集和送检 标本的采集和送检1 标本决不能被正常菌群污染 2 应尽量避免空气3 培养的最佳标本为组织标本 标本的采集 标本的送运与处理 针筒运送法无菌小瓶运送法棉拭运送法标本充盈运送法 适合大量液体标本的运送组织块运送法厌氧袋运送法 分离鉴定程序 第三节 厌氧芽孢梭菌 重点掌握 大多为严格厌氧菌 G 芽胞直径比菌体粗 使菌体膨大呈梭状 对热 干燥和消毒剂均有强大的抵抗力 除产气荚膜梭菌等极少数例外 均有周鞭毛 无荚膜 一 破伤风梭菌 破伤风 tetanus 的病原菌 发病后机体呈强直性痉挛 抽搐 可因窒息或呼吸衰竭死亡 一 形态与染色菌体细长 有周身鞭毛 无荚膜 形成芽胞后 使细菌呈鼓槌状 G 破伤风梭菌的芽胞 一 生物学性状 纯培养初期 18 24h 涂片革兰染色形态 破伤风梭菌 纯培养后 24 48h 涂片革兰染色形态 转阴 二 培养特性 严格厌氧血平板上 有 溶血菌落2 4mm 扁平 半透明 灰白色 边缘不齐 周边呈疏松羽毛状 破伤风梭菌在BA上的羽毛状菌落 在疱肉培养基上的生长现象 疱肉培养基肉汤轻度混浊 肉渣部分消化 微变黑 产生少量气体 有腐败恶臭 生化反应 不发酵糖类 分解蛋白质液化明胶 产生H2S多数菌株吲哚阳性不还原硝酸盐对蛋白质有微弱的消化作用 芽胞抵抗力很强75 80 10min仍保持活力100 1小时可完全被破坏在干燥的土壤和尘埃中可存活数年 三 抵抗力 致病条件 伤口需形成厌氧微环境伤口窄而深 如刺伤 有泥土或异物污染大面积创伤 烧伤 坏死组织多 局部组织缺血有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口无侵袭力 仅在局部繁殖 外毒素致病 二 致病物质对氧敏感的破伤风溶血毒素质粒编码的破伤风痉挛毒素属神经毒 毒性极强 小鼠LD50为0 015ng 对人致死量 1 g 为蛋白质 不耐热 可被蛋白酶破坏 二 致病性 破伤风痉挛毒素 分子量约150kDa B链 重链 是与神经节苷脂结合的单位 A链 轻链 具有毒性作用 阻止抑制性神经介质 氨基丁酸的释放 使肌肉活动的兴奋与抑制失调 造成强直性痉挛 破伤风典型症状 典型症状苦笑面容角弓反张其他 破伤风典型症状 破伤风典型症状 破伤风免疫属外毒素免疫 主要是抗毒素发挥中和作用 一般病后不会获得牢固免疫力 获得有效抗毒素的途径是人工免疫 免疫性 一般不进行涂片 镜检和分离培养 典型的症状和病史即可作出诊断 微生物学检查法 1 正确处理创口及清创 扩创 2 注射白百破三联疫苗进行人工主动免疫 3 对可疑病人可立即注射破伤风抗毒素 tetanusantitoxin TAT 进行紧急预防 4 发病早期可足量使用抗毒素进行特异性治疗 5 抗生素 防治原则 二 产气荚膜梭菌 C perfringens 所致疾病 气性坏疽 一 形态与染色 两端几乎平切的G 粗大杆菌 芽胞位于次极端 呈椭圆形 不大于菌体 无鞭毛 在体内有明显的荚膜 一 生物学性状 二 培养特性 厌氧 繁殖周期为8分钟 血琼脂平板上 圆形 凸起 表面光滑 边缘整齐 双层溶血 内环完全溶血 毒素外环不完全溶血 毒素 在乳糖蛋黄牛奶血琼脂上分解乳糖 双溶血环 一 生物学性状 Nagler反应 蛋黄琼脂平板上 由于此菌产生的卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂 被特异性的抗血清所中和 使菌落周围出现乳白色混浊圈 Nagler反应 汹涌发酵 代谢活跃 分解多种糖类 产酸产气 在牛乳培养基中分解乳糖 大量产气 将棉塞冲开 气势凶猛 出现所谓 汹涌发酵 stormyfermentation 在疱肉 左 和牛乳 右 培养基中生长 生化反应 发酵多种糖产酸产气液化明胶产生H2S吲哚阴性 三 分型 根据4种主要毒素 的产生情况 可分为5个毒素型 对人致病的主要为A型 生物学性状 致病物质 产气荚膜梭菌能产生10余种外毒素 有些外毒素即为胞外酶 致病性 一 致病物质 1 毒素以A型产生量最大 分解细胞膜上磷脂和蛋白形成的复合物 造成细胞溶解 引起血管通透性增加伴大量溶血 组织坏死 肝脏 心功能受损 组织坏死 组织坏死 致病物质 2 肠毒素不耐热的蛋白质 100 瞬时即被破坏 整段肽链嵌入细胞膜 破坏膜离子运输功能 所致疾病 1 气性坏疽战伤 工伤 车祸 气性坏疽潜伏期短 发展迅速 病情险恶 气肿 捻发音 及组织坏死 致毒血症 休克 2 食物中毒 致病性 产气荚膜梭菌 产气荚膜梭菌 一 直接涂片镜检深部创口取材涂片G 大杆菌 大荚膜白细胞甚少且形态不典型伴其它杂菌 二 分离培养及动物实验血平板 镜检及生化反应动物实验本菌引起的食物中毒在发病后1日内 检出大于105病菌 克食品或106病菌 克粪便 即可确立诊断 微生物学检查法 一 预防及时处理伤口 破坏和消除厌氧微环境 预防性的使用抗生素 二 治疗局部扩创 清创抗生素 抗毒素高压氧舱法 防治原则 三 肉毒梭菌 C botulinum G 粗短杆菌 芽胞呈椭圆形 使细胞呈汤匙状或网球拍状 厌氧 肉毒毒素不耐热 煮沸1分钟即可被破坏 一 生物学性状 一 致病性 肉毒毒素 对人致死量为0 1 g 肉毒毒素作用于外周胆碱能神经 抑制神经肌肉接点处神经介质乙酰胆碱的释放 导致弛缓性麻痹 二 致病性与免疫性 肉毒毒素作用机理 肉毒毒素减肥 二 所致疾病 1 食物中毒本病是单纯性毒素中毒而非细菌感染 临床表现与其它食物中毒不同 主要为神经末稍麻痹 2 婴儿肉毒病 二 致病性与免疫性 鉴定依据 涂片镜检为革兰阳性近极端芽胞 呈汤匙状厌氧 消化肉渣变黑 产生恶臭味菌落边缘有皱褶肉毒毒素测定阳性 三 微生物学检查法 加强食品卫生管理和监督 提高防范意识 尽早根据症状作出诊断 迅速注射A B E三型多价抗毒素 五 防治原则 四 艰难梭菌 C difficile 对氧极为敏感 很难分离培养 新生儿肠道中正常菌群 可因长期使用抗生素引起的伪膜性肠炎 G 粗大杆菌 有鞭毛 有芽胞 一 生物学性状 产生A B两种毒素 即肠毒素和细胞毒素 因长期使用抗生素导致菌群失调后可引起内源性感染 二 致病性与免疫性 第四节无芽胞厌氧菌 属人体内的正常菌群 包括革兰阳性和革兰阴性的球菌和杆菌在某些特定状态下 这些厌氧菌作为条件致病菌可导致内源性感染 与人类疾病相关的主要无芽胞厌氧菌 一 主要种类 性状和在感染中的作用 1 革兰阴性厌氧杆菌脆弱类杆菌 B fragilis 临床上最常见的无芽胞厌氧菌分离株 韦荣菌属最重要 咽喉部主要厌氧菌 常为混合感染菌之一 一 生物学性状 一 主要种类 性状和在感染中的作用 2 革兰阳性厌氧球菌消化链球菌属 在临床厌氧菌分离株中仅次于脆弱类杆菌 主要寄居于阴道 丙酸杆菌 能发酵糖类产生丙酸 痤疮丙酸杆菌 P acnes 双歧杆菌属 正常肠道菌群 在大肠中起重要的调节作用 真杆菌属 一 生物学性状 一 致病条件寄居部位改变宿主免疫力下降菌群失调厌氧微环境 二 致病性与免疫性 二 感染特征内源性感染 呈慢性大多为化脓性感染分泌物或脓液粘稠 有恶臭 使用氨基糖苷类抗生素长期无效 分泌物直接涂片可见细菌 但普通培养法无细菌生长 二 致病性与免疫性 三 所致疾病败血症中枢神经系统感染脑脓肿口腔与牙齿感染呼吸道感染腹部和会阴部感染女性生殖道感染 二 致病性与免疫性 1 标本采取采取后