HPLC法测定保健品卵磷脂胶囊中卵磷脂的含量.pdf

论著 作者简介 汪凤云 1972 女 主管技师 从事理化检验 作者单位 1 开封市疾病预防控制中心 河南 开封 475000 2 中牟县食品药品监督管理局 河南 中牟 451450 HPLC法测定保健品卵磷脂胶囊中卵磷脂的含量 汪凤云 1 周海凡2 巩 飚1 摘要 目的 建立卵磷脂保健品中卵磷脂含量的测定方法 方法 高效液相色谱法 以 Hypersil C18 4 6mm 150mm 5 m 为色谱柱 甲醇 水 84 16 为流动相 检测波长为 206nm 流速 1 0 mL m in 1 柱温 35 结果 卵磷脂在 0 01 mg mL 0 1mg mL范围内与峰面积呈良好的线性关系 r 0 999 4 卵磷脂平均加样回收率为 94 93 RSD 为 2 28 n 9 结论 试验结果表明 本方法可靠性高 准确性和重现性好 适用于保健品卵磷脂胶囊中卵磷脂的质量控制 关键词 卵磷脂 高效液相色谱法 含量测定 中图分类号 R155 5 文献标识码 A 文章编号 1006 8414 2009 01 0017 02 Deter m ination of Phosphatidyl choline in Health Food by HPLC WANG Feng yun1 ZHOU H ai fan2 GONG Biao1 Kai Feng Provincial center for Disease control and prevention 475000 P R China Abstract Objective The methodHPLC was developed for the determination of phosphatidylcholine in health foods M ethod A Hypersil C18 column 4 6mm 150mm 5 m was usedw ith a mobile phase being methanol water 84 16 detecting wave length at 206nm the flow rate being 1 0m l m in 1and the column te mperature being 35 Result The calibration curvewas linear in the range of0 01 0 1mg mL ofphosphatidylcholine with a correlation coefficient being 0 9994 the average recovery of themeth od is 94 93 and RSD is 2 28 n 9 Conclusion Themethod is reliability and accuratew ith good reproducibility It is suit able for the quality controlof phosphatidyl choline health foods K ey words barbaloin health foods of aloe HPL 卵磷脂主要是用溶剂从大豆中提取 采用浓缩 法和化学合成法制得保健品卵磷脂胶囊 此保健品 功效成分明确 能延缓衰老 防治老年性脑力衰退 预防心血管疾病 防止出现脂肪肝等具有诸多保健 功能 卵磷脂广泛存在于动植物体内 对人体不产 生任何急性 亚急性和慢性危害 临床应用也起保 健和辅助治疗作用 随着卵磷脂的广泛应用 其成 分测定也显得尤为重要 现对用高效液相色谱法 测卵磷脂进行探讨 结果表明 该法准确简便 快 捷 高效可行 1 材料与方法 1 1 仪器与试剂 日本岛津 LC 10AD高效液相 色谱仪 SPD 10A 紫外检测器 N2000色谱工作 站 SCIENCE AS3120型超声波清洗器 离心机 混 匀器 卵磷脂标准对照品 中国药品生物品检定所 提供 卵磷脂胶囊 红枫叶生物制品有限公司 甲醇为色谱纯 氯仿为分析纯 水为二次蒸馏水 1 2 色谱分析条件 色谱柱 H ypersil C18柱 4 6mm 150mm 5 m 流动相 甲醇 水 84 16 流速 1 0mL m in 1 检测波长 206nm 柱温 35 进样量 10 L 1 3 溶液的制备 1 3 1 对照品卵磷脂标准溶液的制备 精确称取 卵磷脂对照品 50mg 用氯仿稀释溶解移入 500 mL 容量瓶中定容至刻度 1 3 2 对照品卵磷脂标准系列溶液的制备 分别 取卵磷脂标准液 5mL 10mL 15mL 20mL 25mL 30 mL 置于 50 mL 容量瓶中用氯仿定容 即得到 0 01mg mL 0 02 mg mL 0 03 mg mL 0 04 mg mL 0 05 mg mL 0 06 mg mL的标准系列溶液 以 0 45 m 微孔滤膜滤过 滤液备用 1 3 3 供试品溶液制备 首先将卵磷脂胶囊样品 内容物取出 搅拌均匀 盛于密闭容器内作为试样 准确称取 1 00 g试样于 500 mL 容量瓶中 加氯仿 100mL 于混匀器上混匀 置超声波清洗器中超声 30 m in 期间取出混匀两次 超声后用氯仿定容到刻 度 摇匀后取少量溶液于离心管中 以 3 000 rpm 速 度离心 10 m in 取 2 mL 上清液于 100 mL 容量瓶 中 氯仿定容到刻度 摇匀 取 2 mL过 0 45 m 孔 径滤膜 得滤液进行色谱测定 1 4 精密度试验 精密吸取卵磷脂对照品溶液 10 L 在上述色谱条件下进行测定 重复进样 6次 测 得峰面积 计算 RSD为 1 43 1 5 重复性和稳定性试验 按 1 3 3对供试品进 行前处理后得到待测液 一日内在相同条件下上液 相色谱仪 测试 6个平行样 考察日内精密度 RSD 17 河南预防医学杂志 2009年第 20卷第 1期 Henan J PrevM ed 2009 Vo l 20 No 1 为 1 62 以相对标准偏差表示 用同一待测样 连续测定 6日 考察日间精密度 RSD为 1 81 日 内 日间精密度均小于 5 表明分析过程中系统 稳定 测定结果重现性好 符合检测要求 1 6 线性关系的考察 分别精密吸取卵磷脂标准 系列溶液 10 L进样 按上述色谱条件测定 以峰 面积定量 保留时间定性绘制标准曲线 回归方程 为 Y 2 74X 0 063 Y 为峰面积 X 为质量浓 度 r 0 999 4 n 6 结果表明 卵磷脂在 0 01 mg mL 0 1 mg mL l浓度范围内 校正曲线线性关 系良好 1 7 加样回收率试验 精密称量已知含量的卵磷 脂样品的内容物 0 5 g 9份 分别精密添加卵磷脂 对照品 15 00 g 25 00 g 35 00 g各 3份 按供试品 溶液制备方法 同法操作 依法测定含量 计算回收 率 1 8 样品测定 分别取 10 g标准工作溶液和样 品待测液 进高效液相色谱仪 依上述色谱条件测 定 保留时间定性 峰面积定量 外标法计算含量 2 结果 2 1 加样回收率试验结果见表 1 其平均加样回 收率为 94 93 RSD为 2 28 n 9 表 1加样回收率试验结果 n 9 样品含量 g 100g 加入量 g 测得量 g 100g 回收率 X RSD 63 7115 0078 2596 93 63 5915 0078 3698 47 63 7615 0077 3890 80 63 8025 0087 5194 84 63 5425 0087 6296 3294 932 28 63 7725 0087 4094 52 63 8535 0097 0794 91 63 6935 0096 9695 06 63 7435 0096 1392 54 2 2 测得样品中卵磷脂含量为 63 72g 100g RSD 为 1 76 n 6 对照品色谱图和供试品色谱图分 别见图 1 图 2 图 1 卵磷脂对照品色谱图 图 2 供试品色谱图 3 讨论 3 1 检测设备的选择 用高效液相色谱法分析卵 磷脂 常用检测器是紫外和蒸发光散色检测器 蒸 发光散色检测灵敏 流动相选择范围广 但价格昂 贵 许多实验室条件不具备 根据现有的设备条件 选用了 SPA 10A紫外检测器 3 2 色谱柱的选择 卵磷脂 HPLC分析法 其固定 相通常采用硅胶 C18柱 本法采用 Hypersil C18 柱 4 6 mm 1 5mm 5 m 检测效果较好 3 3 色谱条件的选择 3 3 1 分离条件的选择 本法采用了甲醇 水 84 16 为流动相 流速为 1 0 mL m in 柱温 35 进样量为 10 L 是对卵磷脂测定为较佳的色 谱分析条件 3 3 2 检测波长的选择 采用紫外检测器测定卵 磷脂时 一般选用检测波长在 203 nm 210 nm 用 对照品在不同紫外检测波长下进行检测 发现在波 长为 206 nm处组分吸收最好 因此选用 206 n m 为 检测波长 3 4 样品提取方法的选择 卵磷脂为白色蜡状固 体 不溶于丙酮 易溶于醇 醚 氯仿等 通过实验 采用氯仿超声的方法可以完全提取样品中的卵磷 脂 3 5 本方法的可行性 本方法采用氯仿提取样品 中的卵磷脂 用甲醇 水为流动相 利用最常用的 紫外检测器 C18柱 206 nm 为检测波长 可以满足 大量市场保健品卵磷脂胶囊中有效成份卵磷脂的 测定 方法简单 方便 快速 结果可靠 参考文献 1 夏海涛 大豆磷脂的高效液相色谱分析 J 分析化学研 究简报 2001 29 9 1046 1048 2 卜延刚 保健食品卵磷脂胶囊中卵磷脂含量测定方法