「蔬菜中维生素c的测定」.doc

蔬菜中维生素c的测定制作人：薛钦 时间：2016年5月20日一、实验背景l 维生素C又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg维生素C。正常情况下，维生素C绝大部分在体内经代谢分解成草酸或与硫酸结合生成抗坏血酸-2-硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出体外。维生素C的作用：l 1、促进骨胶原的生物合成。利于组织创伤口的更快愈合。l 2、促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命。l 3、改善铁、钙和叶酸的利用。l 4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病。l 5、促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血，防止关节痛、腰腿痛。l 6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。l 7、水溶性强抗氧化剂，主要作用在体内水溶液中。二、实验目的l 1.人类营养中最重要的维生素之一。缺乏时引起坏血病。l 2.维生素C含量可作为植物抗衰老和抗逆境的重要生理指标，也可作为果品质量、选育良种的鉴别指标。l 3.水果、蔬菜保鲜贮藏必须测定维生素C含量，了解果蔬品质量的高低。l 4.了解和掌握2,6-二氯酚靛酚测定维生素C含量的原理和方法。三、实验原理l 2，6二氯靛酚是一种染料，其颜色反应表现为两种特性。一是取决于氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态为无色；二是受其介质酸度的影响，在碱性介质中呈深蓝色，在酸性溶液介质中呈浅红色。l 用蓝色的碱性染料标准液，滴定含VC的酸性浸出液，染料被还原为无色，到达终点时，微过量的2、6二氯靛酚染料在酸性溶液中呈浅红色即为终点。从染料消耗量即可计算出试样中还原型抗坏血酸量。2.6-二氯酚靛酚滴定法l 维生素C: 强的还原性l 将染料2.6-D 还原成无色的2.6-二氯酚靛酚l 2.6-二氯酚靛酚:强的氧化性l 中性/碱性: 蓝色 酸性:红色=NO-Cl |O= |Cll 氧化型2.6-二氯酚靛酚（红色）=NOHCl |O= |Cll 氧化型2.6-二氯酚靛酚（蓝色）NOHCl |HO |Cl |Hl 还原型2.6-二氯酚靛酚 （无色）四、不同的测定方法、l 目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法。l 荧光法。l 2，6-二氯靛酚滴定法。l 2，4-二硝基苯肼法。l 分光光度分析法。l 碘量法。荧光法l 原理:l 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成具有荧光的喹喔啉,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。l 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与邻苯二胺反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022g/ml。l 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。2，4-二硝基苯肼法l 原理:l 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。l 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。碘量法l 原理 : l 维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种。当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子。随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。l 由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VC。分光光度分析法l 原理：l 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸。l 通过吸收光谱曲线法确定维生素C的水溶液的最大吸收波长为267nm，进而通过工作曲线法快速测定蔬菜水果中维生素C的含量。l 本方法与常规方法比较，具有准确、快速、稳定、试剂易得等优点。五、仪器试剂与样品l 新鲜生菜l 滴定管、三角瓶、研钵、量筒、移液管 离心机l 20g/L草酸溶液：称取20g草酸，加水至1000mL。l 60g/L碘化钾溶液。l 0.001mol/LKIO3标准溶液。l 2，6-二氯酚靛酚溶液。l 1mg/ml抗坏血酸标准溶液。六、实验步骤l 2，6-二氯酚靛酚标准液的标定l 吸取1mg/ml抗坏血酸溶液1ml置于锥形瓶中，加10ml 20g/L草酸，摇匀，用2，6-二氯酚靛酚滴定至溶液呈淡红色。在15s不消失为终点。计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10ml 20g/L草酸作空白对照）计算滴定度T：维生素C的提取和测定l 1、称取10 g新鲜生菜样品，置研钵中，分次加20ml 20g/L草酸，研成匀浆，用的20g/L草酸定容100ml。通过纱布过滤后取10ml放于离心机中3000r/min离心10min,吸取上清使用。l 2、吸取滤液10 ml，放入50 ml三角瓶中，立即用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至出现明显的粉红色在15 s内不消失为止。记录所用滴定液体积。另取10ml 20g/L草酸作空白对照实验。七、结果计算l V1-滴定空白所用染料溶液的体积，mll V2-滴定样品所用染料溶液的体积，mll T-2，6-二氯酚靛染料溶液的滴定度,mg/mll M-样品的质量，g2,6二氯靛酚溶液的标定样品中维生素C含量的测定l V1-滴定空白所用染料溶液的体积，mll V2-滴定样品所用染料溶液的体积，mll V-吸取维生素C标准溶液的体积，ml八、注意事项l 1、本法测定的结果为食品中的还原型抗坏血酸含量，而非维生素C总量。此法是测定还原型抗坏血酸最简便的方法，适合于大批果蔬，但对红色果蔬不太适宜。l 2、维生素C在酸性条件下较稳定，故样品处理或浸提都应在弱酸性环境中进行。浸提剂以偏磷酸(HPO3)稳定维生素C效果最好，但价格较贵。一般可采用草酸(20g/L)代替偏磷酸，价廉且效果也较好。l 3、Vc不稳定，在空气中易被氧化，研磨时，尽可能要快，以减少Vc的氧化。l 4、样品处理过程中加入等量的2%草酸，目的是抑制抗坏血酸氧化酶，避免维生素C氧化损失，也可用2%偏磷酸代替。l 5、某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物在100mL容量瓶中泡沫太多，可加入戊醇23滴消除之。l 6、同法作空白实验，消除系统误差。l 7.操作要迅速，防止还原型维生素C被空气中的氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。干扰滴定因素有：l 1、色素若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1mL氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。l 2、Fe2+可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2+的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2+不会很快与染料起作用。l 3、维生素C提取时要避光、避免与铜铁接触，以免Vc氧化。九、实验结果与讨论l 1、为什么在测定维生素C的同时要进行2,6-D溶液的标定？l 2、为了保证抗坏血酸含量测定准确， 应注意些什