T淋巴细胞功能测定教学文稿.doc

T淋巴细胞功能测定教学文稿 T T淋巴细胞功能测定探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实实验验流流程程1W1.双向免疫扩散试验2.酶联免疫吸附试验(ELISA)OVA(1mg/ml)+CFA免疫小鼠腹腔内注射500?l OVA+CFA加强免疫小鼠500?l摘眼球取血无菌取脾和胸腺分离血清2W取脾和胸腺淋巴细胞转化试验生理盐水（500?l)免疫小鼠腹腔内注射生理盐水加强免疫小鼠鼠500?l2W After1W对照组实验组抗体效价增殖功能探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验内容?小鼠摘眼球取血、分离血清?淋巴细胞转化试验探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!教学要求?掌握小鼠血清的分离?掌握淋巴细胞转化试验的基本原理及基本操作探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验分组及材料?器材1.酒精棉球若干2.无菌纱布块1块/组3.无菌平皿1块/组4.无菌吸头（大、中、小）4盒/room5.无菌96孔培养板1块/组6.可调微量加样器4套/room7.细胞计数板1套/组8.显微镜1台/组9.EP管若干10.眼科剪、小镊子4套/room11.细胞培养箱（375%CO2)12.酶标仪13.离心机2个/room14.超净台2个/room?动物及试剂1.小鼠2只/组组(NS,OVA)2.培养液（IMDM)无FCS100ml/room3.培养液（IMDM)20%FCS30ml/room4.ConA（2.5,5,10?g/ml)各1.5ml/tube5.白细胞计数液（2%冰醋酸）2瓶/room6.MTT（5mg/ml)1.5ml/room7.二甲亚砜（DMSO)5ml/组分组每组四人，两人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾脏探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!免疫血清分离过程摘眼球取血RT for2hrs Rotation3000rpm for20min Transferserum toa newEP Doublediffusion Storeat4ELISA1.5ml EP探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验步骤?单细胞悬液的制备1.小鼠脱臼处死，用酒精棉球擦拭皮毛消毒。 2.于超净台内取出脾和胸腺组织(各11/22)，分别放入预先盛有22ml IMDM培养液的平皿内。 3.将33-44层纱布覆盖到组织上，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻压组织，将其捣碎。 然后用1000?l加样器隔着纱布将细胞悬液吸出，放入11.55ml EP管中。 ?细胞计数1.取上述制备好的细胞悬液混匀后取出20?l，加到盛有980?l计数液的EP管中，在显微镜下计数，计数方法见后。 2.调细胞浓度至111077/ml，所需量为1.5ml，设需要的细胞悬液体积为Aml,可按公式?/mlA=1.5111077NOTE:在稀释前一定将原细胞悬液混匀，否则细胞长时间沉淀使细胞数不准。 探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!细胞计数板?查出四个大方格的总细胞数(X)?算出每个大方格的细胞数Y=X/4?每个大方格的体积为V=1mm1mm0.1mm=0.1mm3=10-4ml?制备的细胞悬液的细胞浓度（/ml)=Y104稀释倍数 (50)4探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!?细胞培养1.按图所示加板。 2.将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于3755%C C0022培养箱中，培养48小时。 ?MTT掺入（隔一天下午2:00）1.在终止培养前22小时，在显微镜下观察细胞转化情况。 2.每孔内加入MTT（55mg/ml)10?l，加完后轻轻搕板，使MTT和细胞混匀。 3.在3755%C C0022培养箱中继续培养22小时，然后离心2000rpm，55min，轻轻弃去上清，（注意不要将孔底部的颗粒物弃出）。 4.加入100?l二甲亚砜（DMSO)，将颗粒溶解。 （隔一天下午44:00）?结果测定1.结果测量用酶标仪测定光密度值A A570nm（用空白孔调零），记录结果。 2.结果判定SI（刺激指数）=Con A A刺激孔A A值/对照孔AA值探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!预习内容?单克隆抗体的制备（理论P70，实验P106）?双向免疫扩散（理论P241，实验P116）探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!?八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺?每孔加入100?l调好的细胞悬液?1-3孔加入10%FCS-IMDM培养液，100?l?4-6孔加入2.5?g/ml的Con A,100?l?7-9孔加入5?g/ml的Con A,100?l?10-12孔加入10?g/ml的Con A,100?l NOTE:ConA用10%FCS-IMDM培养液配制N.S.OVA N.S.OVA加加样样方方法法返回探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!?八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺?每孔加入100?l调好的细胞悬液?1-3孔加入10%FCS-IMDM培养液，100?l?4-6孔加入2.5?g/ml的Con A,100?l?7-9孔加入5?g/ml的Con A,100?l?10-12孔加入10?g/ml的Con A,100?l N.S.OVA N.S.OVA加加样样方方法法探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!感谢您浏览?需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎?fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据全球范围的研究机构与商业公司。 该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效