2和IFN-γ在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义.doc

2和IFN-在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义?18?中国实用医药2012年1月第7卷第1期ChinaPracMed,Jan2012,V01.7,No.1HBD一2和IFN一y在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义李玉力甄莉【摘要】目的研究HBD-2,IFN一在寻常型银屑病皮损中的表达并探讨其意义.方法采用实时荧光定量RT.PCR法检测45例寻常型银屑病患者皮损组织,非皮损组织和15例非银屑病患者正常皮肤组织中的HBD-2和IFN.的mRNA表达水平,按PASI评分标准将皮损组分为轻,中,重组,检测HBD-2和IFN./mRNA在银屑病皮损不同组中的表达水平.结果银屑病患者皮损区HBD-2,IFN-的表达明显上调,非皮损区HBD-2,IFN-的表达也高于正常皮肤组织,差异均有统计学意义(P<0.05);HBD-2,IFN.在轻中重不同皮损中的表达表达依次增高,差异有统计学意义.IFN-与HBD-2存在正相关.结论IFN.和HBD-2可能共同参与了寻常型银屑病的皮损形成.【关键词】银屑病;HBD-2;IFN一;皮损;表达ExpressionandthesignificanceofIIBD-2andIFN一nthelesionsofpsoriasisvulgaris一li,ZHEN12DepartmentofDermatology,TheHospitalofShanxiMedicalUniveisity,Taiyuan030001,China【Abstract】ObjectivetoexploretheexpressionsHBD-2andIFN一inthelesionalskinofPsoriasisVulgarisanddiscussthesignificance.MethodsSkinlesionsofpsoriasisvulgarisorganizationwasdividedintomild,moderateandseveregroupsbasedonPASIscorerule,thenReal-timefluorescentquantitativereversetranscriptabepolymerasechainreactiontechniquewasusedtodetectthemRNAexpressionslevelofIFN-,HBD-2among45psoriasislesions,nonlesionalpsoriasisskintissueand15normalskintissue,alsoinskinlesionsofpsoriasisvulgarisorganizationdiffentgroups.ResultsThemRNAexpressionofHBD-2andIFN-Twasobviouslyup-regulatedinthelesionalskin,non-lesionalpsoriasisskinwashigherthannormalskintissuescon-trois.andwasdifferentindiffentlesionsofpsoriasisgroups.theexpressionofIFN-/hadpositivecorrelationtllthatofHBD-2.ConclusionIFN-yandHBD2togethermaycontributetothepathogencsisofPsoriasisVulgaris【Keywords】Psoriasis;HBD-2;IFN-;Lesionalskin;Expression银屑病病理学主要特征是角质形成细胞过度增殖,炎症细胞浸润,其确切机制尚不明确.目前认为T细胞介导的免疫紊乱是银屑病发生发展的基础,T细胞活化产生IFN-等细胞因子是关键环节.hBD-2是一种可诱导表达的抗菌肽,不但具有抗微生物活性,而且还能调节机体免疫应答和炎症反应.有学者研究发现B防御素过量表达与TNF-,IL-1B共同作用可使溃疡性结肠炎的炎症加重.本研究通过RT.PCR法检测寻常型银屑病患者皮损和非银屑患者正常皮肤组织中HBD-2,IFN-的表达并探讨二者在局部皮损形成中的意义.1资料与方法1.1一般资料我院皮肤科2009年5月至2010年5月门诊及住院银屑病患者45例,其中男25例,女20例,年龄1865岁(平均31.8岁),所有患者均具有典型的临床和病理特征,排除标准为不伴有系统性疾病,近3月内未系统使用过免疫抑制剂,糖皮质激素,免疫增强剂,维A酸类或进行光疗,2周内未使用任何外用药物.标本均取自典型皮损.银屑病患者的皮损按PASI评分分为轻度组25例,中度12例,重度组8例.正常对照l5例为整形手术切除的外观正常皮肤,其中男基金项目:山西医科大学科技创新基金资助项目(项目编号01200815)作者单位:030001太原,山西医科大学第一医院皮肤科通讯作者:甄莉Email:zhenli0351163.COrn9例,女6例,年龄范围1656岁(平均34.5岁),均无免疫性疾病及系统性疾病,无银屑病家族史.1.2取材及标本处理每例皮损区切取典型皮损,非皮损区取材为银屑病皮损周围>1cm处外观正常皮肤,-70保存备用.正常对照标本处理同前.1.3主要仪器及试剂TL988型实时荧光定量PCR仪(西安天隆科技),Y2ooC型电泳仪及JY-SCZ型电泳槽(北京君意东方电泳设备有限公司),Transzol溶液,DNAmarker由北京全式金生物技术有限公司生产,PrimeSeriptRT试剂盒及SYBRPremixExTaq试剂盒购于宝生物工程(大连)有限公司.1.4方法1.4.1RNA的提取用Transzol试剂提取总RNA,操作按照溶液试剂盒说明书进行,保存样品于_70C以备用.1.4.2逆转录合成cDNA按逆转录试剂盒说明书逆转录为cDNA,反应体系101:5PrimeScriptBuffer2l,PrimeScriptsRTEnzymeMix10.5l,OligodTPrimer0.5,Ran.dom6mers0.5l,TotalRNA20.5g/1,RNaseFreedH2O4.5.反应条件:3715min,855s.1.4.3荧光定量RT-PCR由实时荧光定量仪扩增完成,反应体系:SYBRPremixExTaqTMII12.5,PCRForwardPrimer1l,PCRReversePrimer1l,DNA模板2,dH208.5l.预变性:95C30S1个循环.设B.actin为内参照基因,其上游引物5.AGAGcTAcGAGCTGccTGAc_3,下游引物2012年1月第7卷第1期ChinaPracMed.Jan2012.Vo1.7,No.15.AGcAcTGTG丌lGGcGTACAG-3,预期扩增片段184bp;HBD-2上游引物5-ATYCCTGATGCCTCTYCC-3,下游引物5-GTGCCAAT1TGTTrATACCTTC-3,预期扩增片段117bp;IFN-上游引物5-TCCCATGGGTYGTGTGTIYA-3,下游引物5-AAGCACCAGGCATGAAATCT-3,预期扩增片段198bp.PCR反应条件为:95C58,5530s,7230s,40个循环.引物设计参照GenBank序列,应用PrimerPremier5.0软件设计,确定序列后由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.反应结束后,得出ct值.1.4.4PCR产物电泳和相对定量分析取PCR扩增产物5于琼脂糖凝胶中电泳,结果显示各组均有预期的阳性片?19?的方法是比较CT值法.1.5统计学方法采用sPss17.0进行统计分析,数据以均数4-标准差(x4-s)表示,多组比较采用秩和检验,P<0.05为差异有统计学意义;组间两两比较采用Bonferroni法,校正检验水准为d=0.017,0【=0.0083,P<检验水准为差异有统计学意义;指标间相关性分析采用Pearson相关分析,P<0.05表示差异有统计学意义.2结果2.1HBD-2,IFN-在寻常型银屑病患者皮损区表达高于非皮损区和正常皮肤,非皮损区高于正常对照.(见表1)2.2HBD-2,IFN-在寻常型银屑病患者轻,中,重皮损区的断,经测定目标基因和内标基因的扩增效率相同.相对定量表达依次增高,差异有统计学意义.(见表2)表1HBD-2,IFN-_y在皮损组,非皮损组和对照组中的表达(4-s)注:各指标三组比较P值均<O.05,组间两两比较P值均<O.O1表2HBD-2,IFN-在银屑病轻中重皮损区的表达(s)注:轻,中,重和正常组各组间比较,P<0.00832.3在寻常型银屑病皮损区,非皮损区和正常皮肤之间HBD-2,IFN-的表达水平呈正相关(r=0.785),P<0.01;在银屑病皮损区hBD-2,IFN?的表达水平呈正相关(r=0.640),P值<0.01.3讨论目前认为银屑病是一种Thl/Th2细胞平衡紊乱的炎症性疾病.Th1分化优势及Thl型细胞因子介导了银屑病的发生和发展,其中Th1型细胞因子IFN.发挥着重要的作用,Chen等研究发现IFN一可促进角质形成细胞增值,当IFN-的作用被阻断时,角质形成细胞的增殖减慢,由角质形成细胞分泌的细胞因子也相应减少.HarderJ等从银屑病患者皮损中分离纯化得到hBD-2,银屑病患者中几乎所有已知的抗菌肽如hBD-2等均高度表达J.还有研究表明IFN-_y可增加角质形成细胞分泌HBD-2,并且HBD-2在T细胞可能结合了FIX敏感性G蛋白偶联受体,作为刺激因子,通过JNK等途径促进IFN-的表达.本研究中hBD-2,IFN.在银屑病患者皮损区的表达明显高于非皮损区和正常皮肤,在非皮损区的表达也高于正常皮肤,表明两者均与银屑病关系密切;hBD-2在炎症愈重的皮损中表达愈明显,这与IFN-的表达特点一致,且在寻常型银屑病皮损区,非皮损区和正常皮肤之间hBD-2,IFN-的表达水平呈正相关,在不同皮损区hBD-2与IFN-y的表达水平也呈正相关,提示在银屑病中hBD-2和IFN-之间关系密切.常玉英研究发现B防御素过量表达与TNF,IL?1B共同作用可使溃疡性结肠炎的炎症加重.我们推测hBD-2,IFN-可能共同作用与T细胞,KC之间构成了一条恶性循环通路,成为导致银屑病免疫功能紊乱的主要因素之一,最终形成寻常型银屑病皮损.参考文献1WittmannM,PurwarR,HartmannC,et81.Humankeratinocytesrespondtointerleukin.18:implicationfortlleco1lr8eofchronicin-flammatoryskindiseases.JInvestDermatol,2005,124(6):1225.1233.2孙会,徐丽敏.干扰素与银屑病.中国麻风皮肤病杂志,2008,24(3):213-215.3ChenSH,AranyI,ApisamthanaraxN,eta1.Responseofkerati?nocytesfromnormalandpsoriaticepidermistOinterferon-gammadiffersintheexpressionofzincMpha(2)-glycoproteinandeathep-sinD.FASEBJ,2000,14:56571.4HarderJ,BarrelsJ,ChristophersE,etaLApeptideantibioticfromhumanskin.Natur