高效液相色谱法测定氯硝西泮片的含量.doc

高效液相色谱法测定氯硝西泮片的含量科技论坛?9?高效液相色谱法测定氯硝西泮片的含量赵德春赵鑫(哈尔滨三联药业有限公司,黑龙江哈尔滨150000)摘要:建立反相高效液相色谱法测定氯硝西泮片中氯硝西泮的含量.方法:采用奥泰公司C.色谱柱(220minx4.6ram,5bLm),水一甲醇一乙腈(40:30:30)为流动相,检测波长为254nm,流速为1.Oral/rain,柱温为30C.氯硝西泮在530ixg?mL-范围内呈良好的线性关系(r-0.99995).氯硝西泮平均回收率分别为100.1%.结论:本法简便,准确,可用于氯硝西泮片中氯硝西泮的含量测定.关键词:氯硝西泮片;含量;测定氯硝西泮化学名为1,3一二氢一7一硝基一5一(2一氯苯基)一2H一1,4一苯并二氮杂卓一2一酮,主要用于失神发作,婴儿痉挛症,运动不能性发作等症.高效液相色谱法以液体为流动相,将具有不同极性的流动相泵入装有固定相的色谱柱,从而实现对试样的分析.本文采用高效液相法,又根据本实验采用高效液相色谱法对氯硝西泮片中的氯硝西泮的进行了含量测定.1仪器与试药1.1仪器:Waters510高效液相色谱仪;N3000色谱工作站;Wa一2487可变波长检测器;精密分析天平(常州市天之平仪器设备有限公司);JRC一200型双频数控超声波清洗器(山东济宁润通超声电子有限公司);TU一1901双光束紫外可见分光光度计E京普析通用仪器有限责任公司).1.2色谱柱:奥泰公司C18色谱柱(220mm4.6ram,5m).1.3对照品:氯硝西泮.1.4试剂:甲醇,乙腈为色谱纯;水为纯化水,其它试剂均为分析纯.1.5试药:氯硝西泮片.2测定方法确定2.1色谱条件依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下.流动相:水一甲醇一乙腈(40:30:30)为流动相,检测波长:254nm,流速:1.0ml?rain一1.柱温:3O.理论板数按氯硝西泮峰计算应不得低于1000.2.2对照品溶液的制备精密称取氯硝西泮对照品适量,置容量瓶中,加流动相制成每lmL含3g的溶液,即得.2.3提取方法确定2.3.1提取溶媒的选择在供试品溶液制备中,分别选用了水,50%甲醇,流动相进行超声提取,结果表明流动相分离效果,峰形及含量为最好,所以选择流动相进行超声提取.2.3.2提取时间的选择取供试品适量,用流动相溶解,超声波振荡分别提取20,30,40分钟,制备供试品溶液,含量结果表明:三种提取时间结果无明显差异,为保证氯硝西泮不被破坏并缩短处理时间,采用超声提取30分钟.2.3.3供试品溶液的制备取装量差异项下的供试品精密称定,研细,精密称取(相当于氯硝西泮3Og),置具塞锥形瓶中,精密加入流动相10mL,密塞,精密称定重量,超声处理(240W,40kHz)30min,放冷,精密称定,用流动相补足重量,摇匀,滤过.取续滤液,即得.2.4专屙I生试验依照处方取除氯硝西泮,按样品制备工艺制成阴性对照样品,照2.3.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液,依上述方法测定,结果在氯硝西泮出峰处阴性液无色谱峰,结果阴性试验没有干扰,表明本方法专属性良好.2.5精密度试验精密称取氯硝西泮对照品适量,加流动相使溶解,制成浓度为3g?mL-1的供试品溶液.照上述色谱条件,精密吸取1Ol,连续进样6次,记录峰面积.结果,RSD=0.75%,表明本方法精密度良好.2.6对照品的线性考察精密称取适量氯硝西泮对照品,加人流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5,10,15,20,25,30微克的溶液.分别精密上述溶液吸取l0L,注人液相色谱仪,依照2.1项下的色谱条件测定,记录色谱峰.以峰面积)为纵坐标,对照品进样量()()为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程为:y=8956.32x一961.36(r=-0.99995).结果表明,氯硝西泮在530g?mL-范围内呈良好的线性关系.2.7重现性试验称取同一批的氯硝西泮片样品6份,按测定方法项下的方法制备供试品溶液,测定含量,并计算样品的RSD值,结果RSD为0.76%,结果表明此方法的重现性良好.2.8准确度试验取对照品适量,按处方比例及工艺规程制备模拟片各20片,含量分别相当于标示量的80%,100%,120%.取模拟片照”含量测定”项下方法试验,计算回收率为100.1%,RSD为0.65%.2.9最低检出限与定量采用2.1项下色谱条件,对样品测定,当信噪比为10时,定量限为1.5ng;当信噪比为3时,最低检出限为0.4ng.2.10样品稳定性试验取同一批氯硝西泮片样品,按2.3项下的供试品制备方法制备供试品,将供试品置室温下放置,分别于第0,l,2,3,4,5,6小时,精密吸取供试品溶液IOIxl注入液相色谱仪中,记录色谱图.测定氯硝西泮片中氯硝西泮的RSD=0.79%.结果表明供试品6小时内稳定.2.11样品含量测定依照上述含量测定方法,测定氯硝西泮片三批样品中氯硝西泮的含量,结果三批样品的含量分别为标示量的99.8%,100-2%,101.1%.3讨论3.1流动相的选择.分别考察甲醇一水一三乙胺(70:30:0.2),水一甲醇一乙Jj(50:20:30),水一甲醇一乙腈(40:3O:30)不同比例的流动相,结果以水一甲醇一乙J(40:30:30)为流动相为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用水一甲醇一乙腈(40:30:30)为流动相为流动相.3.2检测波长的选择.制备氯硝西泮对照品稀释液照紫外一可见分光光度法(中国药典2010版一部附录VA),于190900Nm波长范围内进行全波长光谱扫描,记录吸收光谱.在254nm处有最大吸收峰,故选用254nm为检测波长I1.中国药典)2005版标准采用紫外分光光度法中的对照品比较法.本实验采用高效液相色谱法