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文档简介

蛋白质技术 1 蛋白的分离纯化技术 略 2 蛋白的检测技术 1 SDS PAGE 2 Westernblot 3 ELISA 4 蛋白芯片 5 蛋白测序 略 6 双向电泳 新基因的获取技术 7 蛋白质磷酸化分析 8 EMSA 蛋白与核酸相互作用的研究 功能 9 免疫共沉淀技术 CoIP 蛋白与蛋白相互作用的研究 功能 1 SDS PAGE电泳 1 原理2 用途 SDS PAGE电泳原理 1 SDS 带负电 和还原剂破坏蛋白的高级结构 同时SDS与蛋白定量结合 消除蛋白之间的电荷差异 使得蛋白的迁移率主要依赖分子量 分子小跑得快 2 不连续电泳 上层为浓缩胶 可将样品压缩到同一起跑线 下层为分离胶 可获得更高的分辨率 3 考马斯亮蓝进行染色 SDS PAGE电泳用途 1 蛋白分子量的测定2 蛋白浓度的测定3 蛋白的鉴定 通过1来实现 2 Westernblot Westernblot 3 ELISA 4 蛋白芯片 6 双向电泳 双向电泳是蛋白质组学中对蛋白质组进行研究的主要分离方法 同时能分离成百上千种蛋白质 蛋白质在第一向根据电荷的不同 等电聚焦 第二向根据分子量的不同进行分离 SDS PAGE 分离后对蛋白质进行染色 根据实际分析情况 分别进行考马斯亮兰染色 银染或荧光染色 扫描后用相关软件 PDQUEST等 进行图谱分析 分析差别点等 双向电泳与质谱技术联用 还可以进一步分析差别点蛋白的特性 7 蛋白质磷酸化分析 蛋白磷酸化是一种重要的细胞信号调控方式一般在丝氨酸 苏氨酸和酪氨酸上磷酸化 蛋白激酶 磷酸化 蛋白质磷酸酯酶 去磷酸化 A 一般通过双向电泳和质谱分析 B 也可通过磷酸化抗体Westernblot检测 8 EMSA 凝胶阻滞试验 electrophoreticmobilityshiftassay 体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术 原理 非变性电泳中 核酸蛋白结合后 泳动速度变慢 DNA与Protein相互作用检测 9 免疫共沉淀技术 CoIP
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