5 郑山根 输血科常见试验问题的探讨.ppt

输血科实验室常见问题的探讨广州军区武汉总医院输血科郑山根2009 09 一 输血科常用的实验1 直接凝集试验 原理 颗粒抗原 红细胞 抗体 试剂为IgM 血清为IgM或IgG 方法 玻片法 试管法 微柱凝胶法 单个红细胞可通过玻璃微珠之间空隙到达底部 而凝集红细胞则不能通过而滞留于玻璃微珠表面 特点 红细胞表面抗原数量多 数万 数十万甚至一百多万个 应用 血型鉴定 盐水交叉配血 关键 抗原抗体的比例需适当 否则结果错误 红细胞浓度5 10 2 间接抗球蛋白试验 凝集反应 原理 抗体首先与红细胞结合 洗涤 然后再与抗球蛋白抗体反应 方法 试管法 微柱凝胶法 配血卡 抗筛卡 特点 可检出IgG抗体或可致敏的补体成分 应用 交叉配血 抗体筛选 抗体鉴定 关键 红细胞浓度 0 8 5 37 孵育时间 试管法 充分洗涤红细胞 微柱法 离心速度和时间 1000rpm 10min 血清与红细胞需混合后孵育 3 直接抗球蛋白试验 凝集反应 原理 抗体或补体致敏的红细胞洗涤后直接与抗球蛋白抗体反应 方法 试管法 微柱法 应用 可检出IgG抗体或补体致敏的红细胞 自身免疫病 关键 红细胞浓度 0 8 5 试管法 充分洗涤红细胞 4 抗体筛选原理 间接抗球蛋白试验 血清与试剂红细胞混合 37 孵育 离心 方法 微柱凝胶法 应用 可检出血清中抗红细胞IgG抗体或可致敏红细胞的补体成分 关键 应用前微柱卡离心 红细胞浓度0 8 血清与红细胞需混合后37 孵育 离心速度和时间1000rpm 10min 5 聚凝胺交叉配血试验原理 聚凝胺中和红细胞表面的负电荷缩小红细胞之间的距离 LISS增强可以抗体之间的结合力 离心产生凝集现象 加入解聚液消除聚凝胺正电荷 有IgM或IgG抗体产生的凝集不散开 非特异性凝集则散开 比抗球蛋白试验敏感 应用 可检出血清中IgM或尤其是IgG类抗红细胞抗体 关键 按标准操作程序非常重要 是快速 敏感的交叉配血方法 红细胞浓度为5 血清加入量 LISS加入量 离心速度和时间 3400rpm 15sec 30秒内观察结果等等 肝素抗凝血多加几滴聚凝胺 注意新鲜血标本产生溶血现象 6 吸收试验原理 红细胞表面抗原与相应抗体孵育产生结合反应 已知抗体可检测红细胞表面未知抗原 已知红细胞表面抗原可检测未知血清中的抗体 应用 血型亚型的鉴定 抗体特异性鉴定 血清自身抗体吸收后用于交叉配血试验 7 放散试验原理 与红细胞表面抗原结合的抗体通过热放散或乙醚放散等方法解离下来 应用 血型的鉴定 抗体特异性鉴定 得到自身抗体或无自身抗体的红细胞 8 凝集抑制试验原理 血清 唾液 胃液 精液 腹水以及卵巢液等体液中的血型抗原与已知相应抗体特异性结合 抑制抗体与红细胞的结合反应 应用 体液或组织中血型ABH物质的鉴定 司法鉴定 二 血型鉴定 1 ABO血型系统的亚型及变异型1 A1和A2亚型两种A抗原 A1和A2亚型构成了全部A型血液的99 99 两种红细胞均与抗A试剂发生强凝集反应 B型血血清含两种抗体 抗 A 抗 A1 1 2 A2型人和22 26 A2B型人血清含抗A1 系A基因第三外显子单一碱基突变造成酶活性改变 区别 抗A1试剂与A1红细胞凝集 不与A2红细胞凝集 大约80 A型或AB型红细胞与抗A1 双花扁豆植物血凝素 凝集 分类为A1或A1B型 其余20 红细胞为抗A凝集 但不为抗A1凝集 称为A2或A2B型 意义 在常规输血实验中 除非A2或A2B型人的血清含有抗A1抗体 患者与献血员间的A1或A2不需加以区别 抗A1抗体在A2型人为1 2 A2B型人为22 26 在37 有反应的抗A1才有临床意义 可造成正反定型不符 交叉配合不相合 2 弱A亚型弱A亚型的血清学和转移酶特点 名称细胞反应血清中抗体分泌型唾液中的抗原血清中的A转移酶抗 A抗 AB抗 A抗 A1A3mfmf无有时AH有时Aendmfmf无有时H无Ax w 通常有H很少Am w 无无AH有Ay 无无AH痕量Ael 一些有H无注 红细胞均与抗H反应 抗A1可被上述红细胞吸收放散下来 mf 混合外观 w 非常弱的凝集 主要原因是A转移酶分子某个氨基酸的变异使其功能受到不同程度的影响所致 3 弱B亚型弱B亚型的血清学和转移酶特点 名称细胞反应血清中抗体分泌型唾液中的抗原血清中的B转移酶抗 B抗 AB抗H抗 BB3mfmf 无BH有Bxww 有BH无Bm w w 无BH有Bel 有时H无注 红细胞均与抗H反应 抗B可被上述红细胞吸收放散下来 mf 混合外观 w 非常弱的凝集 主要原因是B转移酶分子某个氨基酸的变异使其功能受到不同程度的影响所致 4 Cis AB型 父亲 母亲 AB型 母亲 父亲 O型 孩子为AB型及O型原理 染色体基因交换或基因变异5 嵌合体 双卵双生儿和双精子嵌合体中 存在两个血型的杂合型 也可以有其它如HLA等的杂合体 6 孟买型和类孟买型 红细胞是O型 但是H抗原阴性 血清中都有抗 H 缺乏形成H抗原的糖基转移酶 虽然有A或B基因以及A B的糖基转移酶 但不能形成A或B抗原 红细胞不能被抗 A 抗 B 抗 AB或抗 H所凝集 由于血清中有抗 H 给临床输血带来了极大困难 一般多输注同型血或采用自身输血 7 获得性B抗原 细菌的脱乙酰基酶使N 乙酰半乳糖胺转变为半乳糖 后者与血型B抗原的决定簇很相似 8 血清中的AB和H物质 含量增高见于胃癌 假性粘液性卵巢囊肿患者 可中和输入血液中的少量抗 A和抗 B O型血液 9 HAB分泌型和非分泌型 唾液中有AB物质为分泌型 反之为非分泌型 我国占73 85 受Se和se等位基因控制 唾液中检测ABO血型物质对血型鉴定有重要意义 10 白血病引起A B和H抗原减弱 弱A最多见 血型一经正确鉴定应输注同型血 11 新生儿血型 用正定鉴定血型 出生时血清中一般无IgM抗体 反定型阴性 其血清中有来自母亲的IgG抗体 12 B A 型和A B 型B型红细胞上存在A抗原 A型红细胞上存在B抗原 基因中1 2个碱基突变 称为A型和B型糖基转移酶的叠盖功能 2 抗ABH和抗D抗体1 抗 A和抗 B 抗体可以是IgM IgG或IgA 大约1 12000成人缺少抗 A或抗 B 新生儿抗体通常是IgG 且大多缺乏 血清中主要是IgM IgG 唾液 乳汁 泪液 宫颈分泌液和膀胱内容物主要是IgA IgG抗 A B M N在盐水中直接凝集红细胞 2 抗 A1抗体 在临床上意义不大 多数在25 以上没有活性 也有抗 A1引起溶血性输血反应的报道 3 ABO自身抗体 较少 材料统计6 4668人具有ABO自身抗体可导致自身溶血性贫血或致命的溶血和肾衰 4 抗H 孟买血清中的抗 H抗体 可造成严重的HDN O型红细胞输入Oh病人体内 仅2 的红细胞生存24小时 A1红细胞输入Ah病人体内 67 于1小时内破坏 5 母亲血清的ABO抗体 可引起新生儿溶血病 HDN 通常发生在O型母亲的A1 B或A1B型的孩子 15 的孕妇是A或B型的孩子 少量红细胞轻微破坏的症状可能较为常见 但临床上涉及HDN的非常少 红细胞上A和B抗原的密度相对较低 血浆中有可溶性的A或B物质可以中和部分母体来源的抗体 胎儿血浆中缺乏补体 因为IgG溶解红细胞需要补体的参与等 各血型系中 以A B抗原性最强 Rh D 抗原次之 当受者接受了所缺少的A B抗原后 几乎每个人都会产生特异性同种抗体 大约有2 3的Rh D 阴性的人 接受Rh D 阳性血液后可产生抗D抗体 3 血型鉴定错误的原因技术和管理方面的原因 1 标本或试剂搞错 造成假阳性或假阴性结果 2 器材不洁产生假阳性结果 3 试剂污染或失效产生假阳性或假阴性结果 4 离心过度或不足 产生假阳性或假阴性结果 5 阳性反应产生溶血现象未能识别 导致假阴性结果 6 漏加试剂 产生假阴性结果 7 结果记录或判断错误 产生假阳性或假阴性结果 8 细胞与血清比例不适当 产生假阳性或假阴性结果 血清异常血清蛋白异常引起串钱状形成 影响反定型结果 红细胞致敏在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集 产生假阳性结果 异常基因型ABO亚型的弱抗原难以检出 产生假阴性结果 近期输血曾异型输血 使病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物 定型时显示 混合外观凝集 现象 嵌合体血型体内有两群红细胞 定型时显示 混合外观凝集 现象 疾病因素导致抗原减弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制 检出困难 红细胞多凝集现象红细胞因遗传或获得性的表面抗原异常 发生多凝集现象 获得性类B由于革兰氏阴性杆菌的作用 红细胞可获得 类B 的活性 近期内进行大量的血浆置换治疗影响抗体效价 造成反定型困难 不规则抗体的存在受检者血浆中 含有ABO血型抗体以外的不规则抗体 与试剂A B细胞上的相应抗原起反应 低丙种球蛋白血症低丙种球蛋白血症病例 可能会因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应 药物等因素药物 右旋糖酐及静脉注射某些造影剂可引起红细胞聚集而类似凝集 年龄因素在未产生自己抗体的婴儿 由母亲被动获得抗体的婴儿 或抗体水平下降的老人 试验时可出现异常结果 4 下列正反定型不一致的处理方法 A亚型B亚型的鉴定 除试剂抗血清外 可用多份人源血清鉴定被检红细胞 吸收放散试验 唾液A或B或H物质检测 凝集抑制试验 弱凝集 用凝聚胺法增加敏感性2 4倍 过量血型特异性物质 血球洗涤2 3次 自身免疫性疾病 正定用EDTA抗凝血 反定用洗涤EDTA抗凝血球吸收的自身血清 低丙种球蛋白 用增强敏感性的方法如凝聚胺法 酶法 年龄 新生儿 1岁 60岁 导致Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因 1 受检细胞已被免疫球蛋白致敏 或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子 2 受检细胞与抗血清孵育时间过长 含高蛋白的定型试剂会引起细胞串钱状形成 3 定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体 造成假阳性定型结果 多见于人源抗D 4 多凝集细胞造成定型的假阳性 多见于人源抗D 5 检定用器材或抗血清被污染 造成假阳性 导致Rh血型鉴定可能出现假阴性的原因 1 受检细胞悬液浓度太高 与抗血清比例失调 2 漏加或错加定型血清 3 离心后重悬细胞扣时 摇动用力时度 摇散微弱的凝 4 抗血清保存不当 导致失效 洗涤红细胞 自身对照 三 交叉配血试验除盐水介质法外 酶法 抗球蛋白试验法 Polybrene或其改良法等能有效检出不完全抗体的配血方法 交叉配血的任何步骤中不产生溶血或凝集的结果 供者的血液成分才可以给患者输注 1 如凝集不散 则作如下处理 37 温育排除冷凝聚 比较多见 缗钱状凝集 可将血清适当稀释后进行实验 或将试管离心 倾去上清液 沥干 再加2滴生理盐水重悬 假凝集会消失 真凝集不会消失 严重的可重复一次 通常可以消除这种假凝集 凝聚红细胞用NS洗涤一次排除蛋白质等促凝因素 病人 献血者血型重新正反定型 献血者红细胞有无自身凝聚 献血者红细胞做直抗试验排除其阳性 2 病人血清 试剂红细胞排除血型不规则抗体 抗体筛选 抗筛阴性 自身对照阴性 ABO定型错误 亚血型 筛选细胞无此抗原 供者DAT阳性 抗筛阳性 自身对照阴性 同种异体抗体存在措施 选抗原阴性血液 请教专业实验室 抗筛阳性 自身对照阳性 自身抗体及同种异体抗体存在 或血清异常措施 自身抗体吸收 抗体鉴定 吸收后抗体做交叉平行试验 自身免疫性溶血性贫血 AIHI 主管和次管均不合 自身对照 血色素比较低 挑选最弱凝集的同型供血者或O型供血者 输入洗涤红细胞一般是安全的 洗涤红细胞去除98 以上的血浆和补体成分 80 以上的白细胞 慢速输注 少量多次输注 改善缺氧症状 不必要使Hb升至80个 L 4 RhEeCc抗原不和输血产生抗体 比较多见 各种单项抗体及混合抗体 或和抗 IgG同时出现等 有输血史 如抗体消失 配血相合 产生血管外迟发输血反应 如抗体存在 则输入挑选交叉配合的血液 或选用抗原相同血液进行交叉配血 5 交叉配血的相容性输血以正定为主输入同型血液或输入O型红细胞 资料报道 A2B亚型 正