5.常见微生物标本的采集、保存与送检.ppt

05 03 2020 1 常见微生物标本的采集 保存与送检 茂名市CDC流行病学培训班麦充志2011 3 05 03 2020 2 碗与筷子的关系 05 03 2020 3 标本采集 采集时间 何时采采集种类 采什么采集方法 怎么采采集数量 采多少 05 03 2020 4 怎么采 样品采集程序采样用物品准备采样程序方法采样记录样品编号样品保存样品送检 05 03 2020 5 采多少 所有标本在采集时立即分装 一式N份 不同检验项目 重复实验 其它实验室复核 留样 05 03 2020 6 样本采集的一般需要量样品种类检验目的样品量饮用水全分析及致病菌 5l液体食品致病菌或毒物分析可疑食物 200ml固体食品致病菌或毒物分析可疑食物 200g呕吐物致病菌或毒物分析 50g ml 洗胃液致病菌或毒物分析 200ml腹泻物致病菌或毒物分析 50g ml 血液病原分离 抗体分析 5ml脑脊液病原分离 2ml皮损分泌物病原分析灭菌生理盐水浸泡棉签涂取 05 03 2020 7 标本标签内容 最小包装 每个标本 每个包装箱每批样本后要附上一个样本清单 详细列出此批样本的名称 状态和注意事项 05 03 2020 8 样本编号 唯一性样本来源 从什么物质 材料中采集的 如病理采集的肝脏就可标注为某某患者肝脏样本数量 包装中样本的数量 如 此包装中同时采集了2块肝脏样本 就要标注为2采样时间 采样地点 采样人 样本处理情况 抗凝剂 运送培养基 标本状况 开封食品 05 03 2020 9 标本的保存 包装 运送 样品的保存 容器 介质 温度样品的包装 感染性样本样品的运送 标本应由专业人员专人运送 最好使用专车交接手续 05 03 2020 10 怎么检 对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开展工作 避免因实验室管理和技术因素对结果的影响 05 03 2020 11 要达到有效控制疫情的目的 必须做到 早期发现和报告可疑病例 快速的流行病学调查 实验室对病原体的快速确诊 实施有效的控制措施 05 03 2020 12 实验室诊断的目的意义 识别暴发 确定病因确定传染来源确定流行范围确定传播链发现特殊的毒株判断院内交叉感染疫苗实施项目的考核仲裁依据 05 03 2020 13 实验室对病原体的快速确诊依靠 技术和试剂储备充分收集适当的 足够的标本正确的包装和快速运送到实验室适当的生物安全和消毒措施 以减少疾病进一步扩散的可能 05 03 2020 14 围绕病因假设 确定检验项目 采集标本 专业知识 经验充分物质准备高度的责任心 05 03 2020 15 在去现场之前 应考虑到以下的问题 在进行临床和流行病学信息评估时 需考虑引起暴发的潜在病原体 地方性疾病谱和流行季节谱可进一步缩小可能的因素 同时还必须考虑到多种病原体感染可出现相似的临床表现 因而需要采集多种类型的标本用于定义暴发的原因 05 03 2020 16 采样基本原则 尽早采集 根据可疑的病原体 选择不同采集时机和标本种类 在抗生素应用前采集 遵守无菌操作 正确保存和运送 容器应密封不易碎 标本不得污染容器的口和外壁 05 03 2020 17 标本种类和采集时间 血液标本全血标本采集血清标本采集第一份血清应尽早 最好在发病后7天内 采集第二份血清应在发病后第3 4周采集在病愈出院或死亡前采集血标本1份 05 03 2020 18 血液标本的采集 目的 血培养 分离血清血培养 怀疑是细菌性疾病 特别是脑膜炎或疑似菌血症的病人均要抽血 在病人高热时可采取静脉血3ml 注入双相血培养瓶 也可用盛有30ml葡萄糖肉汤的三角瓶 内增菌培养 分离血清用于抗体检测 在疾病急性期和恢复期各采血2 3ml 05 03 2020 19 血培养瓶含有0 025 SPS 聚茴香脑磺酸钠sodiumpolyanetholsulfonateSPS 可以起到抗凝 抗吞噬 抗鳌合的作用 还含有树脂 炭颗粒 可吸收血液中的抗生素 提高细菌培养的阳性率 血量 3ml时 将血分别放入两个血培养瓶 若瓶子装血太多将降低降低阳性率 05 03 2020 20 用真空负压采血管采集血液标本5ml 室温静置30分钟 1500 2000rpm离心10分钟 收集血清于2ml无菌螺口塑料管中 05 03 2020 21 标本种类和采集时间 呼吸道标本上呼吸道标本 咽拭子 鼻拭子 鼻咽抽取物 咽漱液 深咳痰液下呼吸道标本 呼吸道抽取物 支气管灌洗液 肺组织活检标本尽早采集上述标本 发病一至两周也可采集 05 03 2020 22 05 03 2020 23 呼吸道标本 05 03 2020 24 拭子的选择 应使用头部为合成纤维的拭子 例如 聚酯纤维 用铝或塑料做柄 不推荐棉拭子和木柄 05 03 2020 25 05 03 2020 26 急性呼吸道综合症的可疑暴发 可能的病原体 白喉链球菌性咽炎猩红热 汉坦病毒肺综合症 百日咳嗜血流感杆菌呼吸道合胞病毒 肺链军团肺炭疽肺鼠疫支原体 喉拭子血清 血清 鼻咽拭子血清 血培养血清痰 尿肺泡灌洗液 流感禽流感 咽拭子气管吸取物血清 05 03 2020 27 需要准备的材料 运送培养基 拭子 压舌板消毒的螺旋盖管 真空采血管 5ml注射器75 酒精 压脉带 记号笔等 05 03 2020 28 运送培养基的选择 维持活力 不增菌的非营养性半固体培养基Stuarts Cary Blair Amies STGG四种主要的运送培养基 05 03 2020 29 127CSoftaluminumwire greencap软金属 易弯曲 143CRegularaluminumwire orangecap男性尿道拭子 139CDoubleplasticswabs redcap咽拭子 阴道拭子 伤口和皮肤 05 03 2020 30 195CFlexibletwistedwire bluecapDesignedspecificallyfornasopharyngealsampling Veryflexible willbendandyieldwhenincontactwithposteriornasopharyngealwall Featuresasafeloopshapedwiretipcoveredwithsoftrayon 鼻咽拭子标本 05 03 2020 31 05 03 2020 32 Stuarts 主要成分 甘油磷酸钠硫代硫酸钠氯化钙亚甲兰琼脂炭粉 05 03 2020 33 Stuarts运送培养基 05 03 2020 34 Cary Blair运送培养基 克服在运送肠道菌时 因这些菌含有甘油磷酸脱氢酶 造成低度氧化 使细菌能代谢而生长 特别适合于运送含弧菌的标本 研究显示 在28 情况下 Cary Blair可维持弧菌活力22天 沙门氏 志贺氏菌49天 70 80 副溶血弧菌可达35天 05 03 2020 35 Cary Blair运送培养基 05 03 2020 36 Amies运送培养基 Stuarts的改良产品 含活性炭 用磷酸盐缓冲液代替甘油磷酸钠等 05 03 2020 37 STGG运送保存培养基 Skim milktrytoneglucoseglycerol STGG 05 03 2020 38 鼻咽拭子插入STGG培养基后 可立即冻存标本 报告显示 置冰上几小时后再放置 70 肺炎链球菌 嗜血流感杆菌的活力仍能维持 在 20 环境可达8周 置于 70 的STGG中保存的鼻咽分泌物 其肺炎链球菌的分离率与直接接种平板相似 保存于 20 分离率亦可接受 而4 环境保存5天 分离率不理想 STGG运送保存培养基 05 03 2020 39 需要采集的标本 上呼吸道感染 鼻咽拭子咽拭子血下呼吸道感染 痰标本支气管灌洗液胸液血 05 03 2020 40 上呼吸道可能的致病菌 溶血性链球菌 A B C G群链球菌等 肺炎链球菌 嗜血流感杆菌 金黄色葡萄球菌 白喉棒状杆菌 百日咳等 05 03 2020 41 下呼吸道感染性疾病可能的致病菌 肺炎链球菌嗜血流感杆菌肠球菌肺炎克雷伯氏菌 溶血性链球菌军团菌百日咳菌属金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟氏菌属假单胞菌肺炎支原体肺炎衣原体 05 03 2020 42 咽拭子的采集 对健康人群或病人密切接触者进行带菌检验时一般采咽拭子 用无菌棉拭子擦取悬雍垂后之鼻咽部粘膜数下 应避免接触口腔内其它部分 直接接种到巧克力双抗平板或0 5 葡萄糖增菌肉汤中 05 03 2020 43 干采用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁 将拭子头浸入含3ml采样液的螺口管中 尾部弃去 旋紧管盖 05 03 2020 44 咽拭采集的正确与否 wrong right 05 03 2020 45 鼻拭子的采集 将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处 停留片刻后缓慢转动退出 取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔 上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中 尾部弃去 旋紧管盖 05 03 2020 46 鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物 将收集器头部插入鼻腔或气管 接通负压 旋转收集器头部并缓慢退出 收集抽取的粘液 并用3ml采样液冲洗收集器1次 亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器 05 03 2020 47 咽漱液的采集 用10ml不含抗菌素的采样液漱口 漱口时让患者头部微后仰 发 噢 声 让洗液在咽部转动 然后将咽漱液收集于50ml无菌的螺口塑料管中 无条件的可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口采样管中 05 03 2020 48 深咳痰液的采集 要求病人深咳后 将咳出的痰液收集于50ml含3ml采样液的螺口塑料管中 05 03 2020 49 呼吸道灌洗液的采集 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管 约30cm深处 注入5ml生理盐水 接通负压 旋转收集器头部并缓慢退出 收集抽取的粘液 并用采样液涮洗收集器1次 亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集 05 03 2020 50 常用的病毒采样保存液成分 pH7 0 7 6的Hanks液或MEM DMEM液或生理盐水 在采样液中需加入抗菌素 可用青霉素 终浓度为100U ml 庆大霉素 终浓度为1mg ml 和抗真菌药物 终浓度为2 g ml 05 03 2020 51 病毒采样盒 咽拭子器具 05 03 2020 52 出血点渗液 接种0 5 葡萄糖增菌肉汤或直接接种含双抗巧克力平板和血平板 接种增菌肉汤或直接接种巧克力平板和血平板 咽拭子 血液 接种血培养瓶 分离血清检测IgG 涂片G染色 05 03 2020 53 患者站立或床上坐直 在收集前嘱咐患者用开水含漱口腔 深呼吸 从深部咳痰 将痰吐入已消毒的广口螺旋盖管 25 50ml 内 痰量1 2ml 如不足 应重复上述步骤 痰标本的采集 05 03 2020 54 接种培养板的选择 根据所要检测的目的菌而定 一般选择两种平板 血平板和巧克力平板链球菌属 新鲜绵羊血 或马血 平板奈瑟氏菌属 巧克力平板 CAP 不含抗生素嗜血流感杆菌 含300 g ml的杆菌肽的巧克力平板 05 03 2020 55 标本种类和采集时间 肠道标本粪便标本采集肛拭标本采集发病后尽可能早的采集标本粪便标本采集 05 03 2020 56 肠道标本的采集 采集5 10g粪便或采集肛拭子标本置于含3 10ml无菌采样液的螺口管中 严格密封 05 03 2020 57 肠道标本的采集用具 05 03 2020 58 脑脊液标本的采集 正常人的脑脊液是无菌的 以无菌手续通过腰椎穿刺采集脑脊液3 5ml 应立即送检或床边接种 应在35 保温运送 05 03 2020 59 脑脊液 CSF CSF一经采集 就应尽快送到实验室 运送过程中 标本应置于18 37 的环境 不要暴露于阳光下或冷冻保存 若CSF不能马上送到实验室处理 延迟在几小时之内 可将血培养瓶或螺旋管盖拧松 置35 5 CO2环境 05 03 2020 60 CSF 离心1000 2000rpm 3 5min 上清 用于胶乳凝集试验 沉淀 混匀 接种平板培养 注 如若CSF不足1ml 不必离心 直接进行G染色和接种培养 革兰染色 接种血培养 05 03 2020 61 CSF标本的运送和处理 最好床旁接种 涂片 血培养瓶或2ml的0 5 葡萄糖增菌肉汤 巧克力平板或血平板 螺旋管装CSF 05 03 2020 62 尸检标本的采集 尸检标本病人死亡后应尽早进行解剖 在严格按照生物安全防护的条件下 进行尸检主要采集肺 气管 肝 肾 脾 心脏 脑 胃 肠 淋巴结等可疑组织标本同时采集血标本 分泌物或渗出物没有条件进行尸体解剖的 可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本 05 03 2020 63 可疑组织标本每种组织应多部位取材 每一采集部位分别使用不同消毒器械 以防交叉污染 各部位应取20 50g 淋巴结取2个 各部位标本 一半用10 福尔马林固定 通常所取组织块固定于不少于5 10倍以上体积的10 福尔马林溶液中 另一半直接放 70 或液氮罐中保存 05 03 2020 64 血无菌操作采集死者血液5ml 其2 5ml置无菌玻璃管中 使血球沉淀 吸出血清分泌物或渗出物 用灭菌棉棒擦拭局部 采集分泌物后 装入放有保存液的试管中 05 03 2020 65 其他标本 出血点瘀斑胸水肺活检标本 05 03 2020 66 出血点 瘀斑 可挑取出血点 瘀斑进行培养和涂片 05 03 2020 67 出血点 瘀斑渗出液 以75 酒精消毒局部皮肤 切忌用碘酒消毒 因其具有渗透作用杀死出血点内细菌 用无菌针头挑破出血点或瘀斑 轻轻地挤出组织液 用无菌毛吸管吸取渗出液直接接种到血 和巧克力 平板上做分离培养 也可将渗出液涂片 作革兰氏染色镜检 05 03 2020 68 胸水 肺组织活检标本 胸水在B超定位下进行胸腔穿刺 抽取胸水5ml 置于无菌的塑料螺口管中肺组织活检标本在超声或X线定位下 经皮穿刺取肺组织活检标本 置于含3ml采样液的塑料螺口管中 05 03 2020 69 标本保存 用于病毒分离